- Bảo quản: quá trình bảo quản hạt giống cũng là giai đoạn mà nấm bệnh có
103, Việt lai 20 ) Tiến hành điều tra trên cả hai hình thức sản xuất, kết quả cho thấy các giống có dòng bố mẹ được sản xuất trong nước bị nhiễm nấm cao hơn các giống
4.2.2.1. Thu thập và phân tích mẫu
Nghiên cứu đa dạng di truyền của nấm B. oryzae đã được tiến hành tại một số nước, các kết quả đưa ra rất đa dạng và phong phú. Nấm B. oryzae có thể có sự đa dạng và không đa dạng tại các địa phương khác nhau hoặc trên cùng một địa điểm nghiên cứu (Misra et al., 1962; Weikert- Oliveira et al., 2002; Kamal and Mia, 2009; Burgos, 2013). Tại Việt Nam hiện vẫn chưa có nghiên cứu nào được tiến hành để tìm hiểu đa dạng di truyền của nấm B. oryzae. Bước đầu tìm hiểu đa dạng của nấm B. oryzae tại các tỉnh phía Bắc và ven biển miền Trung, chúng tôi đã tiến hành thu thập các mẫu nấm gây hại trên hạt giống lúa khác nhau ở các địa phương khác nhau. Các mẫu nấm được đánh giá về hình thái trong quá trình gây hại trên hạt, được lựa chọn đại diện đặc trưng cho giống, đại diện cho các tỉnh tại hai miền Bắc và miền Trung. Các mẫu nấm sau khi được nuôi cấy trên môi trường nhân tạo PGA đã được sàng lọc bằng mồi đặc hiệu với B. oryzae (Akihiro et al., 2007). Các mồi được sử dụng để nhận biết B. oryzae là PKS1Si-KpnI và PKS1Si-BglII, trình tự mồi (3‘-5‘) với vị trí giới hạn được gạch chân như sau:
PKS1Si-KpnI: AAGGTACCAGTATCGCTCCTATGTTCGC; PKS1Si-BglII: CCAGATCTGATCTCGGAGACATCAACAC,.
Các đặc điểm hình thái của nấm B. oryzae khi thu thập trên hạt được xắp sếp vào các nhóm từ I đến V bao gồm:
- I- sợi nấm phát triển nhiều, sinh ít bào tử; - II- sợi nấm phát triển nhiều, sinh nhiều bào tử; - III- sợi nấm phát triển ít, sinh nhiều bào tử; - IV- sợi nấm phát triển ít, sinh ít bào tử;
- V- bao trùm toàn bộ hạt là bào tử nấm với mật độ dầy đặc gây chết cho hạt trong quá trình nảy mầm.
24 mẫu nấm đã được xác định là nấm B. oryzae (bảng 4.18). Kết quả cho thấy không có sự khác nhau giữa các địa phương, 5 nhóm hình thái đều xuất hiện tại các tỉnh. Các mẫu nấm này tiếp tục được lựa chọn để nghiên cứu giải trình tự gen trên vùng ITS tìm kiếm sự đa dạng sinh học.
Bảng 4.18. Nguồn gốc các mẫu nấm B. oryzae trên hạt giống lúa
thu thập tại các tỉnh phía Bắc và ven biển miền Trung
STT Mẫu nấm Thu thập từ giống Địa điểm thu thập
1 BT7-I2 Bắc thơm số 7 Quảng Ninh
2 BT7-V4 Bắc thơm số 7 Ninh Bình
3 BC15-IV6 BC 15 Hải Dương
4 N97-II9 Nếp N97 Phú Thọ