Các bước cơ bản tạo chế phẩm probiotic từ chủng Bacillus nghiên cứu
- Hoạt hóa giống: từ giống được bảo quản trong ống eppendoft ở tủ lạnh 40
C, VK được cấy chuyền sang ống thạch nghiêng, đặt trong tủ ấm 370C trong 24 giờ.
- Nhân giống: giống sau khi PT tốt được cấy nhân giống sang bình tam giác chứa 10ml MT2 với điều kiện: nhiệt độ phòng, pH 7-7,5, lắc 180 vòng/phút trong 24 giờ. Sau đó giống được bổ sung vào MT lên men đã vô trùng với tỉ lệ thích hợp [40].
- Lên men thu sinh khối TB:
+ Tiến hành lên men trong bình tam giác (dung tích 250ml) với các điều kiện nuôi cấy, tỉ lệ cấy giống và thành phần MT thích hợp đã tối ưu (theo mục 2.3.17.9).
+ Sau thời gian thích hợp, ly tâm thu sinh khối TB với tốc độ 5000 vòng/phút, nhiệt độ 40
C trong 10 phút.
+ Rửa TB bằng dung dịch NaCl 0,85%.
- Tạo chế phẩm [12], [39], [20]: Dịch sinh khối sau khi ly tâm (có dạng paste) được trộn với chất mang. Chất mang giúp VK có thể tồn tại lâu, nó như chất bảo quản chế phẩm. Chất mang thường là khô đậu tương, khô lạc, cám gạo, bột gạo, đường lactose, sucrose,…[78]. Cụ thể như sau:
+ Trộn sinh khối TB với 10% đường sucrose [12], [39].
+ Tiếp tục trộn hỗn hợp trên với cám gạo theo tỉ lệ: 40g sinh khối TB: 100g cám gạo [12], [39].
+ Sấy khô hỗn hợp trên bằng tủ sấy có quạt gió, ở nhiệt độ ≤450C với thời gian thích hợp để đạt độ ẩm 8-12%.
+ Kiểm tra chất lượng chế phẩm sau khi sấy khô: kiểm tra mật độ TB bằng phương pháp đếm số KL (theo mục 2.3.9) và kiểm tra hoạt tính enzyme ngoại bào và hoạt tính đối kháng với VSV kiểm định bằng phương pháp khoan lỗ thạch.
+ Đóng gói chế phẩm: 50g/gói.
+ Bảo quản: chế phẩm được bảo quản trong bao nhôm (hàn kín) và được giữ ở nhiệt độ phòng [28], [32].
Lưu ý: Việc kiểm tra mật độ TB trong chế phẩm được tiến hành theo thời gian: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 và 8 tuần.