Nguyên tắc [27]
- Tách rời các tế bào VSV.
- Nuôi cấy các VSV trong MT dinh dưỡng đặc trưng để mọc thành các KL riêng rẽ, tách biệt nhau.
Cách tiến hành: Theo tiến trình cụ thể như sau [17], [20]:
- Lấy 10g phân heo + 90ml nước cất vô trùng, lắc đều, tạo dung dịch huyền phù. Đem gia nhiệt ở nhiệt độ 80 – 850 C trong 15 phút (diệt các TB sinh dưỡng và các TB không sinh bào tử) thu lấy dịch lọc, ta được dịch pha loãng 10-1
.
- Lắc đều, hút 1ml dung dịch 10-1 cho vào ống nghiệm chứa 9ml nước cất vô trùng, ta được dịch pha loãng 10-2. Cứ tiếp tục pha loãng như thế được dịch pha loãng 10-3, 10-4, 10-5, 10-6.
- Từ dịch pha loãng 10-4, 10-5, 10-6, dùng pipet hút 0,1ml dịch lọc (ở mỗi nồng độ) nhỏ vào đĩa Petri thứ 1 có sẵn MT1. Dùng que trang trải đều dung dịch khắp bề mặt thạch, giữ nguyên que trang đó tiếp tục sang đĩa thứ 2 rồi thứ 3 (mỗi nồng độ 3 đĩa).
- Lật ngược đĩa Petri, bao gói, ủ ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ cho đến khi xuất hiện KL.
- Lấy 1 KL riêng rẽ hòa vào nước cất vô trùng, cấy trang lên đĩa Petri có MT1, ủ mẫu ở nhiệt độ phòng cho đến khi xuất hiện KL. Nếu các dạng KL đồng đều, có màu sắc giống nhau, soi dưới KHV đều có 1 dạng TB, chứng tỏ giống phân lập đã thuần khiết.
- Sau đó chọn các KL riêng rẽ cấy chuyền sang ống thạch nghiêng để bảo quản và nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lí, sinh hóa.
Yêu cầu: Chủng phân lập phải đạt độ thuần khiết và có kí hiệu riêng biệt để nhận biết.