[9], [40]
Nguyên tắc
Enzyme tác động với cơ chất trong MT thạch, cơ chất bị phân hủy tạo thành vòng trong suốt xung quanh lỗ khoan. Độ lớn MT trong suốt phản ánh hoạt tính của enzyme.
Cách tiến hành
- Nuôi VK trong MT8 (không bổ sung agar) như đã trình bày ở mục 2.2.
- Sau 36-48 giờ, lấy dịch đem ly tâm 5000 vòng/phút trong 15 phút để thu phần dịch lọc bên trên (enzyme thô).
- Chuẩn bị MT cảm ứng sinh tổng hợp enzyme MT8.
- Dùng khoan nút chai (đường kính d=0,9cm) khoan lỗ ở giữa đĩa thạch.
- Dùng pipet vô trùng hút 0,1ml dịch enzyme thô cho vào lỗ thạch, đặt ở nhiệt độ phòng 24 giờ.
- Kiểm tra hoạt tính amylase: thuốc thử là dung dịch lugol. Nếu VK có sinh amylase sẽ tạo vòng trong suốt quanh lỗ khoan, vùng tinh bột chưa bị phân giải có màu tím đậm.
- Đánh giá khả năng sinh amylase bằng cách đo đường kính vòng phân giải (D-d), cm.
2.3.13. Xác định hoạt tính cellulase bằng cách đo đường kính vòng thủy phân [9], [40] [9], [40]
Nguyên tắc
Enzyme tác động với cơ chất trong MT thạch, cơ chất bị phân hủy tạo thành vòng trong suốt xung quanh lỗ khoan. Độ lớn MT trong suốt phản ánh hoạt tính của enzyme.
Cách tiến hành
- Nuôi VK trong MT9 (không bổ sung agar) như đã trình bày ở mục 2.2.
- Sau 36-48 giờ, lấy dịch đem ly tâm 5000 vòng/phút trong 15 phút để thu phần dịch lọc bên trên (enzyme thô).
- Chuẩn bị MT cảm ứng sinh tổng hợp enzyme MT9.
- Dùng khoan nút chai (đường kính d=0,9cm) khoan lỗ ở giữa đĩa thạch.
- Dùng pipet vô trùng hút 0,1ml dịch enzyme thô cho vào lỗ thạch, đặt ở nhiệt độ phòng 24 giờ.
- Kiểm tra hoạt tính cellulase: thuốc thử là dung dịch lugol. Nếu VK có sinh cellulase sẽ tạo vòng trong suốt quanh lỗ khoan.
- Tiến hành đánh giá khả năng sinh cellulase bằng cách đo đường kính vòng phân giải (D-d), cm.