Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1.6. Kết quả chuyển gen ở sâm Ngọc Linh thông qua vi khuẩn A.Rhizogenes
Sau khi tiến hành các thắ nghiệm trên chúng tôi tiến hành chuyển gen tạo rễ tơ ở sâm Ngọc Linh trên nguồn vật liệu là mẫu củ ựể kiểm tra tác ựộng tổng hợp của các ựiều kiện trong mỗi thắ nghiệm trên và từ ựó có thể khẳng ựịnh kết quả và ựưa ra quy trình chuyển gen cho cây sâm Ngọc Linh.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 54
Thắ nghiệm ựược lặp lại 3 lần với tổ hợp các ựiều kiện tối ưu cho hiệu quả chuyển gen cao nhất, mẫu củ ựược gây tổn thương, cắt thành lát mỏng, ngâm trong dịch huyền phù vi khuẩn có giá trị OD600 là 0,5 trong 30 phút, bổ sung AS 100 ộM, ựồng nuôi cấy 3 ngày.
Bảng 3.6. Ảnh hưởng của tổ hợp các ựiều kiện tối ưu ựến hiệu quả chuyển gen nhờ vi khuẩn A. rhizogenes qua biểu hiện của gen gus
Lần lặp lại Tổng số mẫu Tổng số mẫu bắt màu GUS+(%)
1 90 50 55,56
2 90 48 53,33
3 90 51 56,67
TB 55,19+1,7
a
GUS+(%) = số mẫu biểu hiện màu gus / tổng số mẫu thắ nghiệm nhuộm X-gluc Qua bảng số liệu trên ta thấy tỷ lệ mẫu bắt màu khi kết hợp các ựiều kiện chuyển gen cao ựạt 55,19%. Tỷ lệ mẫu bắt màu ở các lần lặp lại có sự sai khác nhưng không ựáng kể.
Khi kết hợp các ựiều kiện tốt nhất thì ta thấy hiệu quả chuyển gen tăng lên rõ rệt, chứng tỏ ở thời gian ựồng nuôi cấy 72 giờ, OD600=0,5, thời gian lây nhiễm 30 phút, nồng ựộ AS 100 ộM là phù hợp nên vi khuẩn xâm nhập vào mô dễ dàng và chuyển gen hiệu quả vào trong tế bào.
Như vậy qua các thắ nghiệm trên có thể khẳng ựịnh chuyển ựược gen vào sâm Ngọc Linh nhờ vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes và bước ựầu xây dựng quy trình chuyển gen vào sâm Ngọc Linh. Từ ựó có thể ứng dụng quy trình trên ựể chuyển gen tạo rễ tơ.