a) ựồng nuôi cấy 24 giờ, b) ựồng nuôi cấy 48 giờ, c) ựồng nuôi cấy 72 giờ.
3.4. Xác ựịnh môi trường nuôi cấy các dòng rễ tơ
Thành phần môi trường cũng có ảnh hưởng ựến số lượng các hợp chất thứ cấp ựược sản xuất. Do vậy khi thiết kế các công thức môi trường dinh dưỡng cần ựảm bảo hoàn thành sự sinh trưởng của tế bào.
Trong nuôi cấy rễ tơ sâm Hàn Quốc việc bổ sung các hợp chất hữu cơ hay vô cơ vào môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng ựến sự sinh trưởng của rễ. Hiệu quả của các hợp chất hữu cơ hay vô cơ tùy thuộc vào nồng ựộ, thời gian bổ sung và giai ựoạn phát triển của rễ (Pistelli et al., 2010). Tối ưu hóa các thành phần dinh dưỡng có thể làm tăng khả năng phát triển của rễ tơ ựể sản xuất các hợp chất thứ cấp (Bensaddek et al., 2008).
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 69
Tốc ựộ sinh trưởng của mô có thể ựược tăng lên khi bổ sung các chất hữu cơ và dịch chiết từ thực vật, nhiều chất thường ựược sử dụng như dịch chiết chuối, nước dừa, pepton, nước ép cà chua, dịch chiết ựu ựủ, .... Nước dừa có chứa các acid amin, vitamin, acid hữu cơ, axit nucleic, ựường, khoáng chất, hooc môn thực vật và một số chất khác giúp mô sinh trưởng và phát triển nhanh hơn (Shekarriz et al. 2014). Trong nghiên cứu của Agampodi and Jayawardena (2009) cho thấy nước dừa có chứa IAA tự nhiên có tác ựộng tắch cực tới sự hình thành rễ ở cây mắa.
Chắnh vì vậy nước dừa thường ựược sử dụng trong nuôi cấy callus và huyền phù tế bào, ựặc biệt trong nuôi cấy rễ tơ không bổ sung hooc môn sinh trưởng thì bổ sung nước dừa có thể mang lại hiệu quả cao.
để xác ựịnh liều lượng thắch hợp của một số hợp chất hữu cơ ựến sự tăng trưởng, rễ tơ ựược nuôi cấy trong môi trường SH có bổ sung nước dừa với tỷ lệ 5%, 10%, 15%, 20% và casamino acid với lượng 100, 250, 500, 1000 mg/l, không bổ sung chất ựiều hòa sinh trưởng. Rễ tơ ựược nuôi trên máy lắc với tốc ựộ 80 vòng/phút trong ựiều kiện 22oC, trong tối. đánh giá qua chỉ tiêu tốc ựộ sinh trưởng sau 6 tuần nuôi cấy.
Bảng 3.13. Ảnh hưởng của nước dừa và casamino acid tới sinh trưởng của rễ tơ
Khối lượng ban ựầu: 0,2 (g) Thành phần môi trường Trọng lượng tươi sau 6 tuần (g) Tốc ựộ sinh trưởng (mg/ngày) Ảnh hưởng của nước dừa tới sinh trưởng của rễ tơ
đC 0 1,06 20,56 CW1 5 % 1,63 34,13 CW2 10 % 1,64 34,21 CW3 15 % 1,72 36,11 CW4 20 % 1,68 35,16 LSD0,05 0,078 CV% 3
Ảnh hưởng của casamino acid tới sinh trưởng của rễ tơ
đC 0 1,06 20,56 CH1 100 mg/l 1,53 31,67 CH2 250 mg/l 1,49 30,63 CH3 500 mg/l 1,77 37,46 CH4 1000 mg/l 1,78 37,54 LSD0,05 0,075 CV% 2,7
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 70
Qua bảng trên ta thấy nồng ựộ nước dừa và casamino acid khác nhau ảnh hưởng khác nhau tới tốc ựộ tăng trưởng của rễ tơ sâm Ngọc Linh. Khi tăng nồng ựộ nước dừa từ 5% ựến 15% thì tốc ựộ tăng trưởng của rễ tơ tăng từ 1,63 - 1,72 g. Khi tăng lượng nước dừa lên ựến 20% thì tốc ựộ tăng trưởng có tăng nhưng không có ý nghĩa. Như vậy lượng nước dừa thắch hợp cho nuôi cấy rễ tơ sâm Ngọc Linh là 15%. Trong nuôi cấy callus của cây khoai lang (Ipomoea batatas L.) thì bổ sung lượng nước dừa từ 0 - 10% thì khối lượng callus của giống SK010 tăng từ 7,2 Ờ 99,6 g (Michael, 2011).
Khi bổ sung thêm casamino acid vào môi trường nuôi rễ thì trọng lượng tươi của rễ sau 6 tuần nuôi cấy tăng ựáng kể so với ựối chứng, khi bổ sung thêm casamino acid từ 100 mg/l lên 500 mg/l thì trọng lượng rễ tăng từ 1,53 - 1,77 g, tăng lượng casamino acid lên 1000 mg/l thì khối lượng rễ có tăng nhưng không có ý nghĩa ở mức α=0,05. Như vậy nên bổ sung casamino acid với lượng 500 mg/l ựể tiết kiệm chi phắ mà vẫn cho hiệu quả cao. Trong nuôi cấy protoplasts của cây hoa hướng dương sử dụng nồng ựộ 1000 mg/l casamino acid cho hiệu quả cao (Burrus et al., 1991).
Hình 3.14. Ảnh hưởng của nước dừa. a, b, c, d lần lượt nồng ựộ nước dừa 5, 10, 15, 20%.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 71
Hình 3.15. Ảnh hưởng của casamino acid.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 72