Thời gian thực hiện lấy mẫu máu từ ngày 28/08/2012 tới hết ngày 5/10/2012, tại huyện Kim Bôi, tỉnh Hòa Bình.
Thời gian thực hiện toàn bộ nghiên cứu: Từ tháng 03 năm 2012 đến tháng 12 năm 2013.
2.2.4. Một số định nghĩa và khái niệm sử dụng
Trẻ tiêm vắc xin sởi mũi 1: Là trẻ đã đƣợc tiêm 1 mũi vắc xin sởi tính đến thời điểm trƣớc khi tham gia nghiên cứu.
Trẻ tiêm vắc xin sởi mũi 2: Là trẻ đƣợc tiêm mũi 2 vắc xin sởi khi 18 tháng tuổi, trong buổi tiêm chủng thƣờng xuyên hàng tháng theo lịch tiêm chủng của
Chƣơng trình TCMR đã đƣợc Bộ Y tế phê duyệt [4]. Quy trình thực hiện tiêm chủng theo thƣờng qui của Chƣơng trình TCMR.
Hiệu giá kháng thể kháng sởi: Là giá trị định lƣợng của kháng thể IgG kháng sởi, đƣợc tính theo đơn vị quốc tế mIU/ml.
Giá trị hiệu giá kháng thể trung bình nhân (GMT): Là trung bình nhân của các giá trị hiệu giá kháng thể của các mẫu huyết thanh. GMT đƣợc tính theo công thức:
GMT = n x1. x2 … xn
Hiệu giá kháng thể đạt giá trị bảo vệ: Là khi hiệu giá kháng thể IgG đạt đƣợc giá trị >120mIU/ml.
Chuyển đổi huyết thanh: Là tình trạng mẫu huyết thanh 2 có hiệu giá kháng thể tăng ít nhất 4 lần so với giá trị ban đầu ở huyết thanh 1 [117].
2.2.5. Thiết kế nghiên cứu
Sử dụng thiết kế nghiên cứu dịch tễ học mô tả loạt trƣờng hợp (case series), theo dõi dọc. “Trƣờng hợp” ở đây là một trẻ trong diện nghiên cứu đã đƣợc tiêm vắc xin sởi mũi thứ nhất của chƣơng trình TCMR. Trẻ đƣợc lấy máu lần 1 ngay trƣớc khi tiêm vắc xin sởi mũi hai vào lúc 18 tháng tuổi theo đúng lịch tiêm chủng vắc xin của Bộ Y tế ban hành và thƣờng quy của chƣơng trình TCMR [4]. Trẻ đƣợc lấy máu 2 sau tiêm mũi hai 1 tháng để đánh giá đáp ứng miễn dịch sau tiêm vắc xin sởi mũi hai.
2.2.6. Cỡ mẫu và cách chọn mẫu
Cỡ mẫu
Để xác định tỉ lệ trẻ có hiệu giá kháng thể IgG ở mức đủ bảo vệ sau tiêm vắc xin sởi: Áp dụng cách tính cỡ mẫu tối thiểu ƣớc tính tỉ lệ trong quần thể theo công thức:
n = Z2 (1- /2) x
p x q
( x p)
Trong đó:
- n: cỡ mẫu tối thiểu
- : mức ý nghĩa thống kê, chọn =0,01
- Z(1-/2): Hệ số tin cậy. Với =0,01, giá trị tƣơng ứng của Z(1-/2) = 2,57 - p: Tỉ lệ mẫu huyết thanh kháng sởi đạt hiệu giá kháng thể IgG mức đủ bảo
vệ ; theo kết quả nghiên cứu của Saffar M.J. [107] lấy bằng 82% (p=0,82) - q: 1 – p;
- : độ chính xác mong muốn tƣơng đối, chọn = 0,11. Vậy cỡ mẫu tối thiểu cần nghiên cứu là:
n = 2,572 x 0,82 x 0,18 / (0,11 x 0,82)2 120
Trên thực tế có 160 trẻ tham gia lấy mẫu trƣớc tiêm vắc xin sởi mũi 2 và chỉ còn 131 trẻ tham gia lấy mẫu sau tiêm vắc xin.
Phương pháp chọn mẫu và tiến hành nghiên cứu
Dựa vào sổ quản lý dân số và sổ tiêm chủng trẻ em do trạm y tế xã quản lý, lập danh sách tất cả các trẻ sinh ra trong tháng 2/2011 của huyện Kim Bôi, tỉnh Hòa Bình đã đƣợc tiêm vắc xin sởi mũi 1. Chọn ngẫu nhiên từ danh sách này lấy ra 165 trẻ, không phân biệt giới tính (gọi là trẻ tiêm mũi thứ nhất). Tiến hành gặp gỡ gia đình có trẻ trong danh sách đƣợc chọn, giới thiệu thông tin nghiên cứu, lấy ý kiến và phiếu đồng thuận tham gia của cha mẹ hoặc ngƣời giám hộ cho trẻ. Truyền thông về mục đích và nội dung nghiên cứu cho cha mẹ. Lựa chọn vào nghiên cứu những trẻ đủ tiêu chuẩn tham gia và có ý kiến đồng thuận của cha mẹ hoặc ngƣời giám hộ. Mời cha mẹ đƣa trẻ đến trạm y tế để cán bộ y tế sàng lọc đối tƣợng nghiên cứu theo mẫu phiếu (phụ lục 5). Danh sách cuối cùng đƣa vào nghiên cứu là 160 trẻ. Tiến hành thu thập 02 ml máu ven của mỗi đối tƣợng lần 1 (gọi là huyết thanh 1 – HT1) để xét nghiệm định lƣợng kháng thể IgG kháng sởi trƣớc khi tiêm vắc xin sởi mũi hai. Tất cả 160 trẻ đƣợc tiêm vắc xin sởi mũi hai lúc 18 tháng tuổi (gọi là trẻ tiêm mũi hai) trong đợt tiêm chủng hàng tháng theo thƣờng quy của chƣơng trình TCMR và hƣớng dẫn kỹ thuật của Bộ Y tế. Không
thực hiện bất kỳ can thiệp nào đối với quá trình chuẩn bị và thực hiện tiêm chủng vắc xin cho trẻ. Một tháng sau khi tiêm vắc xin sởi mũi hai, tiến hành thu thập 02ml máu ven lần 2 (gọi là huyết thanh 2 – HT2). Vì 29 trẻ đã bỏ cuộc ở lần lấy máu này nên kết cuộc có 131 trẻ có đủ tiêu chuẩn để đƣa vào phân tích kết quả sau tiêm vắc xin sởi mũi 2.
Vắc xin sử dụng để tiêm cho trẻ 18 tháng tuổi là vắc xin sởi sống giảm độc lực do hãng Aventis (Pháp) sản xuất, hạn dùng 21/5/2014. Đây là loại vắc xin đã đƣợc Bộ Y tế cho phép lƣu hành, sử dụng trong chƣơng trình TCMR từ nhiều năm qua. Đƣờng tiêm: tiêm dƣới da, liều lƣợng 0,5ml. Vắc xin đƣợc chỉ định theo đúng hƣớng dẫn của nhà sản xuất và Bộ Y tế.
Quy trình chọn mẫu mục tiêu 2 đƣợc trình bày trong sơ đồ sau:
Sơ đồ 2.1. Quy trình chọn mẫu để xác định đáp ứng miễn dịch sau tiêm mũi vắc xin sởi mũi 2 ở trẻ 18 tháng tuổi
Trẻ 18 tháng tuổi đã tiêm mũi 1 vx sởi đƣợc chọn
vào NC (n=165)
Trẻ lấy máu lần 1 (HT1) và đƣợc tiêm mũi 2 vx sởi
(n=160)
Trẻ đƣợc lấy máu lần 2 (HT2, n=131)
Trẻ có HT1 không đạt mức KT bảo vệ (n=32)
Trẻ đƣợc đƣa vào phân tích kết quả đắp ứng miễn dịch sau tiêm ở HT2
(n = 131) Trẻ có HT1 đạt mức KT bảo vệ (n=99) Trẻ bị loại do bỏ cuộc (n=29) Trẻ bị loại do không đáp ứng tiêu chuẩn (n=5) Xét nghiệm lần 2 Xét nghiệm lần 1 Tuyển chọn đối tƣợng