Ngày tải lên :
19/08/2012, 00:04
... PHÁP NGHIÊN
CứU
3.1. Đối tượng , vật liệu , địa điểm và thời gian nghiên cứu
3.1.1. Đối tượng nghiên cứu
Gồm một số tổ hợp lai F
1
, quần thể F
2
3.1.2. Vật liệu nghiên cứu
* Thí nghiệm trong phòng:
Thiết bị :+ Máy PCR , máy chạy điện di , máy chụp ảnh điện
di , máy li tâm , máy votex , tủ lạnh , lò vi sóng .
+ Các loại ống effendof , các loại pipet và đầu tiếp đi kèm .
Thành phần cho phản ứng PCR
+ Cặp mồi phát hiện gen bất dục đực tms2 theo M.T.Lopez
và cộng sự (2003)có trình tự là :
RM11_F:5’TCTCCTCTTCCCCCGATC3’
RM11_R:5’ATAGCGGGCGAGCTTAG3’
Hóa chất chạy PCR : dNTD , MgCl
2
, Taq ADN polymerase ,
PCR mastermix , nước cất
Hóa chất dùng để chiết tách ADN hệ gen :
Để chọn tạo lúa lai hai dòng thành công thì dòng TGMS
phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho
ưu thế lai cao.Hiện nay các dòng TGMS đang được sử
dụng như:103S,T1S96,64S,287S,36S
2
,Kim 76S,Pair 64S
và 25S.
Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS(tms1, tms2,
tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển
hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó,gen tms2 có
ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống
đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các
dòng,giống lúa triển vọng để tạo dòng TGMS tốt,có khả
năng phối hợp cao,tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế
lai cao như TH33,Việt Lai 20,TH34,…
Thành phần ... LIệU
2.1. Hiện tượng ưu thế lai
2.2. Hệ thống lúa lai hai dòng
Khái niệm hệ thống lúa lai hai dòng
Ưu điểm của hệ thống lúa lai hai dòng
Các phương pháp chọn tạo dòng mẹ lúa lai hai
dòng(EGMS).
+ Phương pháp truyền thống
+ Chỉ thị phân tử và ứng dụng
2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chỉ thị phân
tử trong chọn tạo lúa lai hai dòng
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng ở Việt Nam
1.2.Mục đích và yêu cầu:
1.2.1.Mục đích:
Xác định gen tms2 trong tập đoàn các dòng TGMS bằng
chỉ thị phân tử.
Nghiên cứu di truyền gen tms2.
1.2.2 Yêu cầu :
Khảo sát một số đặc điểm nông sinh học của các tổ hợp lai
F
1
Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR
Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp
truyền thống của các tổ hợp lai F
2
.
Phát hiện gen tms2 ở các dòng TGMS và thế hệ F
2
.
PHầN ... TE
3.2.2. Phương pháp nghiên cứu
* Xác định khả năng chứa gen bất dục đực mẫn cảm với
nhiệt độ tms2 bằng phương pháp PCR :
+) Chiết tách ADN tổng số của dòng mẹ TGMS,các tổ hợp phân ly
F
2
theo quy trình cải tiến của Bộ môn Công nghệ sinh học.
Bước 1:Thu ngắt mẫu lá khỏe,dài khoảng 2cm bỏ vào ống
eppendorf có dung tích 1,5ml,đánh dấu tên giống rồi bỏ vào đá
lạnh.
Bước 2:Cối,chày sứ dùng để nghiền mẫu đã được hấp khử
trùng và đặt trong đá lạnh.Các mẫu lá được cắt nhỏ khoảng
0,5cm rồi bỏ vào cối.
Bước 3:Nhỏ 400 µl dung dịch đệm chiết suất ADN vào cối rồi
nghiền nhỏ mẫu lá cho đến khi dung dịch chuyển sang màu
xanh đen.
Bước 4:Bổ sung thêm 400 µl dung dịch chiết suất AND vào pha
trộn lẫn sau đó hút 400 µl vào ống eppendorf đã được đánh dấu.
Bước 5: Cho 700 µl hỗn hợp Phenol : Chlorofom :
Isoamylalcohol ( 25:24:1 )
3.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
* Nội dung nghiên cứu
+) Theo dõi đặc điểm nông sinh học :
Các chỉ tiêu nông sinh học :
+ Thời gian từ cấy đến bắt đầu trổ(10% số bông thoát khỏi lá
đòng).
+ Thời gian trổ từ khi bắt đầu trỗ(10% số bông thoát khỏi lá
đòng) đến khi kết thúc trổ (85% thoát khỏi lá đòng) .
+ Thời gian tự cấy đến chín(85% số hạt chắc màu vàng)
+ Tổng thời gian sinh trưởng từ gieo đến khi thu hoạch .
+ Chiều cao cây (cm) cuối cùng : đo từ mặt đất đến mút đầu bông
dài nhất không kể râu .
+ Chiều dài lá đòng : đo từ gối lá đến đầu mút lá , đo vào giai
đoạn chín sáp.
+ Chiều rộng lá đòng.
+ Góc độ lá đòng .
+ Chiều dài bông : đo từ cổ bông đến hết bông vào thời kì chín
chắc .
PHầN...