Góp phầnn ghiên cứu thành phần hóa học rễ cây bá bệnh (eurycoma longifolia jack)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA *********** NG DƯƠNG CẨM TÚ GĨP PHẦN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC RỄ CÂY BÁ BỆNH (EURYCOMA LONGIFOLIA JACK) Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học Mã số: 11050158 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2013 LỜI CẢM ƠN - Luận văn thực phịng Hóa Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên-Viện Cơng Nghệ Hóa Học - Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam năm 2012 – 2013 Trước tiên xin bày tỏ kính trọng lịng biết ơn sâu sắc đến PGS TS NGUYỄN NGỌC HẠNH - Người truyền đạt cho kiến thức chuyên môn nhiều kinh nghiệm nghiên cứu quý báu Trong suốt trình học tập nghiên cứu tôi, cô động viên giúp đỡ quan tâm hết lòng nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thiện luận văn Tôi chân thành biết ơn ThS Phùng Văn Trung, ThS Phan Nhật Minh, Cử nhân Nguyễn Tấn Phát, truyền đạt cho nhiều kinh nghiệm thực nghiệm quý báu, giúp đỡ chân thành hỗ trợ nhiệt tình để tơi hồn thành luận văn Cử nhân Võ Thị Bé cộng tác giúp đỡ q trình tơi thực đề tài Tơi xin cảm ơn cha mẹ bên cạnh động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện từ vật chất đến tinh thần cho tơi học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Cuối cảm ơn bạn học viên lớp cao học Trường Đại Học Bách Khoa, niên khóa 2011 - 2013 giúp đỡ, hỗ trợ tơi suốt q trình học tập ABSTRACT Five compounds including three quassinoids: Eurycomanone (EL02), 13β(18)-epoxy eurycomanone (EL03), eurycomalactone (EL04); one alkaloid: 9-O-β-D-glucopyranosyl Canthin-6-one (4) and one sterol: β-sitosterol (ELA) were isolated from the roots of Eurycoma longifolia Jack Their structures were elucidated by 1H-NMR, 13 C-NMR, COSY, DEPT, HSQC, HMBC, ESI-MS and comparision with published data Besides study on chemical constituents, we also tested antioxidant of chloroform - methanol extract and the pure compounds by DPPH method The results show that the antioxidation ability of the chlororoform – methanol extract, EL02, EL03, EL04, EL05 are lower than vitamin C in concentration 100 μg/ml TÓM TẮT Từ rễ Bá bệnh cô lập chất bao gồm quassinoid Eurycomanone (EL02), 13β(18)-epoxy eurycomanone (EL03), eurycomalactone (EL04); alkaloid 9O-β-D-glucopyranosyl Canthin-6-one (EL05) sterol β-sitosterol (ELA) Cấu trúc chúng xác định phương pháp phổ: 1H-NMR, 13 C-NMR, COSY, DEPT, HSQC, HMBC, ESI-MS sau so sánh với tài liệu tham khảo Ngồi chúng tơi tiến hành thử hoạt tính kháng oxi hóa cao chiết cloroform – metanol, chất EL02, EL03, EL04, EL05 Bá bệnh phương pháp DPPH Kết cho thấy khả kháng oxy hoá cao chất tinh khiết phân lập từ rễ nồng độ 100 μg/ml thấp vitamin C LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các kết luận văn đảm bảo tính xác, trung thực chưa cơng bố cơng trình Tác giả ng Dương Cẩm Tú MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ VÀ SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT LỜI MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ THỰC VẬT 1.1.1 Đặc điểm Bá bệnh 1.1.2 Tác dụng dược lý 1.1.3 Thành phần hóa học 1.2 CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY BÁ BỆNH 1.2.1 Các nghiên cứu nước 1.2.2 Các nghiên cứu nước 1.2.2.1 Quassinoid 1.2.2.2 Alkaloid 14 1.2.2.3 Triterpenoid 15 1.2.2.4 Biphenylneolignan 16 1.3 ĐẠI CƯƠNG VỀ PHƯƠNG PHÁP SỪ DỤNG TÁC NHÂN DPPH 17 1.3.1 Tìm hiểu DPPH 17 1.3.2 Kết tính tốn 17 Chương 2: THỰC NGHIỆM 18 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 18 2.2.1 Nguyên liệu 18 2.2.2 Phương pháp 18 2.2.3 Hoá chất 18 2.2 CHIẾT XUẤT CAO 19 2.3 CÔ LẬP VÀ TINH CHẾ 20 2.3.1 Sắc ký cột áp suất thường cao CHCl3 - MeOH 22 2.3.2 Sắc ký cột phân đoạn II cao CHCl3 – MeOH 23 2.3.2.1 Sắc ký cột trung áp phân đoạn II.1 cao CHCl3 – MeOH 23 2.3.2.2 Sắc ký cột thường phân đoạn II.2 cao CHCl3 – MeOH 25 2.4 XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM CỦA CAO CHCl3 – MeOH 26 2.5 XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA 26 2.5.1 Chuẩn bị mẫu tiến hành đo 26 2.5.2 Phương pháp tính tốn 27 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HÓA HỌC VÀ NHẬN DANH CÁC HỢP CHẦT TINH KHIẾT 28 3.1.1 EL02 28 3.1.2.1 Các đặc tính EL02 28 3.1.2.2 Xác định cấu trúc EL02 28 3.1.2 EL03 35 3.1.2.1 Các đặc tính EL03 35 3.1.2.2 Xác định cấu trúc EL03 35 3.1.3 EL04 38 3.1.3.1 Các đặc tính EL04 38 3.1.3.2 Xác định cấu trúc EL04 39 3.1.4 EL05 44 3.1.4.1 Các đặc tính EL05 44 3.1.4.2 Xác định cấu trúc EL05 45 3.1.5 ELA 50 3.1.5.1 Các đặc tính ELA 50 3.1.5.2 Xác định cấu trúc ELA 50 3.2 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA 52 3.2.1 Chất đối chứng (Vitamin C) 52 3.2.2 Cao CHCl3 – MeOH rễ Bá bệnh 53 3.2.3 Chất EL02 54 3.2.4 Chất EL03 55 3.2.5 Chất EL04 56 3.2.6 Chất EL05 57 3.2.7 So sánh % ức chế mẫu thử với vitamin C 58 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 4.1 KẾT LUẬN 59 4.2 KIẾN NGHỊ 60 BÀI BÁO TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Hiệu Diazepam E.longifolia Jack giai đoạn đối kháng chuột Bảng 1.2: Hiệu Eurycoma longifolia Jack and testosterone khả tăng cường sinh lý Bảng 1.3: Hoạt tính hợp chất có khả kháng ký sinh trùng sốt xuất huyết kháng tế bào ung thư Eurycoma longifolia Jack Bảng 1.4: Mối quan hệ thành phần hóa học khả kháng ký sinh trùng sốt rét dịch chiết từ Eurycoma longifolia Jack Bảng 2.1: Kết sắc ký cột cao CHCl3 – MeOH 24 Bảng 2.2: Kết sắc ký cột phân đoạn II.1 cao CHCl3 – MeOH 25 Bảng 2.3: Kết sắc ký cột phân đoạn II.2 cao CHCl3 – MeOH 27 Bảng 2.4: Độ hấp thu theo nồng độ mẫu thử 27 Bảng 3.1: Thông tin từ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC HMBC EL02 32 Bảng 3.2: Dữ liệu phổ 13CNMR, DEPT 90 DEPT 135 EL02 33 Bảng 3.3: So sánh liệu phổ 13CNMR EL02 với tài liệu tham khảo 34 Bảng 3.4: Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC HMBC EL03 36 Bảng 3.5: Dữ liệu phổ 13CNMR, DEPT 90 DEPT 135 EL03 37 Bảng 3.6: Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC HMBC EL04 42 Bảng 3.7: So sánh liệu phổ 13CNMR EL04 với tài liệu tham khảo 43 Bảng 3.8: Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC HMBC EL05 48 Bảng 3.9: So sánh liệu phổ 13C EL05 với tài liệu tham khảo 49 Bảng 3.10: So sánh liệu phổ 13C ELA với tài liệu tham khảo 51 Bảng 3.11: Kết tính tốn % ức chế gốc tự DPPH theo nồng độ chất đối chứng vitamin C 52 Bảng 3.12: Kết tính tốn % ức chế gốc tự DPPH theo nồng độ cao CHCl3 – MeOH rễ Bá bệnh 53 Bảng 3.13: Kết tính tốn % ức chế gốc tự DPPH theo nồng độ EL02 rễ Bá bệnh 54 Bảng 3.14: Kết tính tốn % ức chế gốc tự DPPH theo nồng độ EL03 rễ Bá bệnh 55 Bảng 3.15: Kết tính tốn % ức chế gốc tự DPPH theo nồng độ EL04 rễ Bá bệnh 56 Bảng 3.16: Kết tính tốn % ức chế gốc tự DPPH theo nồng độ EL05 rễ Bá bệnh 57 Bảng 3.17: So sánh % ức chế mẫu thử với vitamin C 58 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Bá bệnh (Eurycoma longifolia) Hình 1.2: Rễ Bá bệnh Hình 1.3: Hoa, quả, Bá bệnh Hình 2.1: TLC cao CHCl3 – MeOH 20 Hình 2.2: Cao CHCl3 – MeOH 20 Hình 2.3: Trộn silicagel cao CHCl3 – MeOH 22 Hình 2.4: Cột áp suất thường cao CHCl3 – MeOH 22 Hình 2.5: TLC phân đoạn II.1 24 Hình 2.6: Cột sắc ký trung áp phân đoạn II.1 24 Hình 2.7: TLC phân đoạn II.2 25 Hình 3.1: TLC EL02 28 Hình 3.2: Tinh thể chất EL02 28 Hình 3.3: TLC EL03 35 Hình 3.4: Tinh thể chất EL03 35 Hình 3.5: TLC EL04 38 Hình 3.6: Tinh thể chất EL04 38 Hình 3.7: TLC EL05 44 Hình 3.8: Tinh thể chất EL05 44 Hình 3.9: TLC ELA 50 Hình 3.10: Tinh thể chất ELA 50 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ VÀ SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1: Sơ đồ chiết xuất cao CHCl3-MeOH 19 Sơ đồ 2.2: Quy trình phân lập hợp chất từ cao CHCl3-MeOH 21 Biểu đồ 3.1: Đường biểu diễn % ức chế theo nồng độ vitamin C 53 Biểu đồ 3.2: Đường biểu diễn % ức chế theo nồng độ cao CHCl3 – MeOH 54 Biểu đồ 3.3: Đường biểu diễn % ức chế theo nồng độ EL02 55 Biểu đồ 3.4: Đường biểu diễn % ức chế theo nồng độ EL03 56 Biểu đồ 3.5: Đường biểu diễn % ức chế theo nồng độ EL05 57 Biểu đồ 3.6: So sánh % ức chế mẫu thử với vitamin C 58 ... 1.1.1 Đặc điểm Bá bệnh 1.1.2 Tác dụng dược lý 1.1.3 Thành phần hóa học 1.2 CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY BÁ BỆNH 1.2.1 Các nghiên cứu nước ... hoạt tính sinh học để ứng dụng vào dược phẩm thực phẩm Do việc nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học chúng vấn đề cần thiết quan trọng, góp phần làm sáng tỏ hoạt tính sinh học mà dân gian... TỔNG QUAN Hình 1.1: Bá bệnh (Eurycoma longifolia) Hình 1.2: Rễ Bá bệnh Hình 1.3: Hoa, quả, Bá bệnh 1.1.2 Tác dụng dược lý  Năm 1999, Hooi Hoon Ang and Meng Kwoon Sim nghiên cứu hoạt tính an thần