Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây bá bệnh

BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI — cg ★ so — LÊ THANH BlNH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THựC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CÂY BÁ BỆNH (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ KHÓA 2002-2007^ ^ ^ M Người hướng dẫn : TS. Nguyên Nơi thực hiện : Bộ môn Dược Liệu Thời gian thực hiện ; 01/2007 đến 05/2007 HÀ NỘI, THÁNG 05 NĂM 2007 j ß d i e ỏ M L ổ n . Vói lòng kính trọng và biết 0fn sâu sắc, em xin chân thành gửi lòd cảm ơn TS. Nguyễn Viết Thân, ngưòd đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tận tình và giúp đỡ em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Em cũng xin chân thành cảm ơn toàn thể các thầy, cô giáo, các cán bộ kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu đã đóng góp những ý kiến quý báu và tạo điều kiện cho em hoàn thành khoá luận này. Nhân dịp này, em cũng xin được bày tỏ lòng cảm ơn tới người thân, bạn bè đã luôn động viên, giúp đỡ em trong suốt quá trình làm khoá luận. Hà Nội, ngày 21 tháng 5 năm 2007 Sinh viên Lê Thanh Bình MỤC LỤC ĐẶT v m Đ Ề 1 Phần 1: Tổng quan 2 1.1. Vị trí phân loại cây Bá bệnh 2 1.2. Đặc điểm hình thái cơ bản của họ Thanh th ấ t 2 1.3. Đặc điểm hoá học của cây Bá bệnh 4 1.4. Tác dụng, công dụng và một số chế phẩm từ cây Bá bệnh 6 Phần 2: Thực nghiệm và kết q u ả 9 2.1. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 9 2.1.1. Nguyên liệu 9 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu 9 2.2. Thực nghiệm và kết q uả 12 2.2.1. Đặc điểm thực v ật 12 A. Đặc điểm hình thái 12 B. Đặc điểm giải ph ẫ u 12 2.2.2. Đặc điểm hoá h ọc 16 A. Định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ có trong dược liệu 16 B. Sắc ký lớp m ỏng 26 c. Sơ bộ xác định vết Saponin trên sắc ký đồ dịch chiết methanol thân và rễ Bá bệnh 32 Kết luận và đề x u ấ t 34 1. Kết luận 34 2. Đề xuất 35 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Dd: Dung dịch Pư: Phản ứng STT: Sô thứ tự TT: Thuốc thử Xđ: Xác định UV: Ánh sáng tử ngoại Nhân dân ta từ lâu đã biết sử dụng các loại cây cỏ trong tự nhiên để làm thuốc chữa bệnh. Bắt nguồn từ kinh nghiệm dân gian, cùng với sự phát triển nhanh chóng của khoa học kỹ thuật, đến nay rất nhiều dược liệu đã được nghiên cứu, sử dụng rộng rãi và khoa học. Trong kho tàng kinh nghiệm quý báu đó, cây Bá bệnh (Eurỵcoma longifolia Jack.), họ Thanh thất {Simaroubaceae) hay còn gọi là cây Bách bệnh, đã được nhân dân ta sử dụng khá nhiều. Đặc biệt là vỏ cây thưcmg được sử dụng làm thuốc dưới tên Hậu phác nam với nhiều công dụng như chữa các trường hợp ăn uống không tiêu, nôn mửa, đầy bụng, tiêu chảy; vỏ thân còn được dùng để chữa sốt rét, giải độc rượu và chữa đau mỏi do thấp. Ngoài ra, gỗ thân cũng được dùng để chữa tiêu chảy, quả chữa lỵ, rễ chữa ngộ độc và tẩy giun, lá tươi nấu nước tắm chữa ghẻ lở. Hiện nay, trên thế giới, cây Bá bệnh đã được dùng phổ biến như một nguồn dược liệu đem lại hiệu lực điều trị và lợi ích kinh tế cao. Tuy nhiên, ở Việt Nam, cây này chưa được nghiên cứu một cách toàn diện mà chủ yếu chỉ sử dụng theo kinh nghiệm dân gian. Do vậy, chúng tôi thực hiện đề tài '"Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hoá học của cây Bá bệnh'’ với mục đích góp phần nghiên cứu để sử dụng một cách hiệu quả và kinh tế hơn vị thuốc Bá bệnh thu hái ở Việt Nam, và với các nội dung sau: - Nghiên cứu về mặt thực vật của cây Bá bệnh. - Bước đầu nghiên cứu về thành phần hoá học của cây Bá bệnh. PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. Vị trí phân loại cây Bá bệnh [4], [10]: Theo hệ thống phân loại thực vật Jakhtajan, cây Bá bệnh {Eurycoma longifolia Jack.), họ Thanh thất (Simaroubaceae) hay còn gọi là cây bách bệnh, lồng bẹt, mật nhcfn, người Tày gọi là Tho nan [2], có vị trí phân loại như sau: Giới Thực vật (Pỉantae) Phân giới Thực vật bậc cao {Kormobionta) Ngành Ngọc lan {Magnolỉophyta) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa hồng (Rosidae) Bộ Cam {Rutales) Họ Thanh thất (Simaroubaceae) Chi Eurycoma Loài E. longi/olia 1.2. Đặc điểm hình thái cơ bản của họ Thanh th ất: Các cây họ Thanh thất là cây gỗ hay cây bụi, vỏ đắng, nhánh có phủ lông sít nhau. Lá lớn, mọc so le, kép lông chim lẻ, có nhiều đôi lá chét mọc đối. Cụm hoa mọc thành chuỳ rộng, thường mọc ở gần ngọn; hoa thường đơn tính; có một số lưỡng tính, hoa thường mẫu 3- 5, nhỏ, đều. Lá đài 5, rời hoặc dính ở gốc, thường phủ lông tơ. Cánh hoa 5, dài hơn lá đài nhiều. Nhị 5, xen kẽ vói cánh hoa; chỉ nhị rời và ồ gốc mỗi nhị thường có phần phụ dạng vẩy; bao phấn ngắn, có khi ngã xuống, lắc lư, mở ngang hoặc hướng trong. Bộ nhuỵ gồm 4-5 (3-2) lá noãn rời, xếp chồng trên cánh hoa; ở hoa đực không có các lá noãn hoặc chỉ có rất thô sơ; vòi nhuỵ dính thành cột; đầu nhuỵ rời. Quả hạch 3-5, hoặc quả nang, quả có cánh. Hạt không có phôi nhũ, có vỏ lởm chởm lông ngắn [4], [1]. Theo tác giả Nguyễn Tiến Bân, họ Thanh thất có khoảng 30 chi, 200 loài, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới, ít ở cận nhiệt đới và ôn đới. ở Việt Nam có 8-10 chi: Ailanthus Brucea Eurycoma Harrisonia Hebonga Picrasma (Triscaphis) Quassia Samadera ịSamadura) và có trên 10 loài [1]. Theo tác giả Phạm Hoàng Hộ, họ Thanh thất (tác giả gọi là họ Khổ mộc) ở Việt Nam có 8 chi [6 ]: Samadera Irvingia Harrisonia Ailanthus Quassia Eurycoma Picrasma Brucea Theo Thực vật chí Đông Dưoỉng, họ Thanh thất có 7 chi: Quassia Harrỉsonỉa Aỉlantus Samandura Eurycoma Bruceae Picrasma Trong đó, chi Eurycoma có 2 loài: E. longifolia và E. harmandiana [22]. ở Việt Nam, cây Bá bệnh mọc khá phổ biến trên cả nước, nhưng gặp nhiều hơn ở các tỉnh miền Trung và Tây Nguyên, thường mọc ở dưới tán rừng nguyên sinh, rừng thứ sinh và đôi khi cả ở đồi cây bụi [14]. 1.3. Đặc điểm hoá học của cây Bá bệnh: ở Việt Nam, cây Bá bệnh chưa được nghiên cứu nhiều. Theo một số tài liệu trong cây này có: Các hợp chất quassinoid: eurycomalacton; 6- a - hydroxyeurycomalacton, longilacton; 5,6-dehydro-eurycomalacton; 14,15-p- dihydroxyklaineanon, 11-dehydroklaineanon [14]. - Các hợp chất triterpen loại tirucalan: niloticin; dihydroniloticin; piscidinol A; bourjotinolon A; episapelin A; melianon và hyspidron [9]. - Từ rễ đã phân lập được 3 quassinoid: eurycomanol; eurycomanol 2-0- p-D glucopyranosid và 13Ị3, 18-dihydroeurycomanol [14]. - Các alcaloid loại xanthin-6 -on được phân lập từ vỏ và gỗ: 9, lO-dimethoxyxanthin-6 -on; 10-hydroxy-9-methoxy-xanthin-6-on; 11 hydroxy-lO-methoxy-xanthin-6 -on; 5,9-dimethoxyxanthin-6-on và 9-methoxy -3-methyl-xanthin-5, 6 -dion. Ngoài ra còn có các alcaloid carbolin [14]. - Từ vỏ cây Bá bệnh ở miền Đông nam bộ Việt Nam đã xác định được thành phần hai chất đắng eurycomalacton và 2 , 6 -dimethoxybenzoquinon. Ngoài ra, còn campestrol, và |3-sitosterol [14]. 2,6-dimethoxybenzoquinon OH OH OH OH .OH Hình 1.1: Cấu trúc của các quassinoid phân lập từ cây Bá bệnh. 1.4. Tác dụng, công dụng và một số chế phẩm từ cây Bá bệnh: -Tác dụng dược lý: - Theo tác giả Đỗ Huy Bích: + Về mặt dược lý, cao chiết từ bá bệnh có tác dụng kháng ký sinh trùng sốt rét (chính là tác dụng của các quassinoid). + Một số chế phẩm thuốc gồm 3 dược liệu: Bá bệnh, Trâm bầu (Combretum quadrangulare Kuxy) và cỏ trinh nữ {Mimosa púdica L.) đã được áp dụng trên bệnh nhân có chỉ định điều trị mật vói kết quả là lượng bilirubin - máu đã giảm đáng kể [2 ]. - Một số tác giả khác cho rằng: + Bá bệnh có tác dụng kích thích tình dục. Có mối tương quan giữa hoạt tính kích thích sinh dục nam và lượng nội tiết tố sinh dục nam trong huyết thanh. Thân và rễ Bá bệnh làm tăng lượng testosteron trong huyết thanh động vật, rễ làm tăng testosteron nhiều hơn thân cây. Không giống như liệu pháp điều trị thay thế testosteron, Bá bệnh không làm mất sự sản xuất testosteron tự nhiên của cơ thể. Cũng do đặc tính làm tăng nồng độ testosteron mà Bá bệnh còn được dùng để làm tăng sức mạnh của cơ bắp và tăng cưòỉng sức khoẻ [15]. + Hoạt động của virus gây ra khối u cũng bị ức chế bởi 14-15 P- dihydroxyklaineanon, một quassinoid của Bá bệnh. Các quassinoid khác, eurycomanol; 13,21-dihydroeurycomanol và 14,15 P-dihydroxyklaineanon có khả năng chống độc tế bào [18], [2 1 ]. + Longilacton có tác dụng chống sán máng [17]. + Một số quassinoid như eurycomanol, eurycomalacton, và 14, 15 p- dihydroxyklaineanon có tác dụng làm giảm các lipopolysaccharid gây ra sốt ở chuột sau 1 giờ và có khả năng mạnh hơn aspirin [16]. + Eurycomanol còn được cho là có tác dụng chống ung thư [20]. - Công dụng: [...]... thân và rễ cây Bá bệnh đều chứa Saponin là nhóm chất chính Ngoài ra, trong thân cây Bá bệnh còn chứa alcaloid và steroid; trong rễ cây Bá bệnh còn chứa alcaloid, glycosid tim và steroid Đây có thể là cơ sở ban đầu về mặt hoá học để định hướng nghiên cứu về các bộ phận của cây Bá bệnh trong thời gian tiếp theo 24 Bảng 3.1 Kết quả định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ chính có trong thân và rễ Bá bệnh. .. thích: Hình 2.1; Cây Bá bệnh - Hình 2.2: Dược liệu thân và rễ Bá bệnh Hình 2.3: Vi phẫu vỏ thân Bá bệnh Hình 2.4: Vi phẫu vỏ rễ Bá bệnh 2.1 2.2 2.3 14 Hình 2.5: Bột thân Bá bệnh > _\ Hình 2.6: Bột rẽ Bá bệnh 15 2.2.2 Đặc điểm hoá học: A Định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ có trong dược liệu: Tiến hành phản ứng định tính sơ bộ các nhóm chất hữu cơ với các dược liệu: thân, rễ của cây Bá bệnh 2.2.2.1 Định... phòng - Nghiên cứu đặc điểm thực vật: Đăc điểm hình thái: Qua sự quan sát thực tế, mô tả đặc điểm của cây và tham khảo, đối chiếu vói một số tài liệu Chụp ảnh: ảnh chụp toàn cây hoặc một bộ phận của cây được chụp bằng máy ảnh kỹ thuật số và được in Đăc điểm vi hoc: Sau khi thu hái, dược liệu được đem xử lý bằng các phương pháp phù hợp rồi nghiên cứu: + Bột dược liệu: • Dược liệu được phơi và sấy khô... Saponin 11 2.2 THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ: Với mục đích góp phần nghiên cứu để sử dụng một cách hiệu quả và kinh tế hcfn vị thuốc Bá bệnh thu hái ở Việt Nam, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu và quá trình thực nghiệm thu được những kết quả sau: 2.2.1 Đặc điểm thực vật: A Đặc điểm hình thái: Cây Bá bệnh là cây nhỡ xanh quanh năm, cao khoảng 2- 8 m, có lông ở nhiều bộ phận, thường ít phân nhánh, lá tập trung... • Quan sát và mô tả dưới kính hiển vi • Chụp ảnh: ơ iọ n những đặc điểm điển hình của bột dược liệu trên kính hiển vi có gắn máy ảnh, sử dụng trắc vi vật kính và trắc vi thị kính để đo kích thước các đặc điểm của bột dược liệu, chụp, chuyển thành các file ảnh trên máy vi tính, ghép các đặc điểm của bột dược liệu vái nhau thành ảnh hoàn chỉnh và in + Vỉ phẫu: • Chọn dược liệu: chọn những phần dược liệu... đưa ra thị trường PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: 2.1.1 Nguyên liệu: Các dược liệu sử dụng gồm có: thân và rễ của cây Bá bệnh {Eurycoma longifolia Jack.), họ Thanh thất (Simaroubaceae) được thu hái ở một số địa phưcfng thuộc tỉnh Nghệ An 2.1.2 Phưoiig pháp nghiên cứu: - Thu hái và bảo quản: Dược liệu tươi được thu hái, phơi sấy khô và bảo quản trong túi polyethylen... - Dịch chiết methanol thân và rễ Bá bệnh cho hình ảnh sắc ký đồ tương tự nhau, chứng tỏ giữa thân và rễ Bá bệnh có thành phần hoá học tương tự nhau Tuy nhiên theo cùng một cách chuẩn bị dịch chiết thì các vết trong sắc ký đồ cho bỏi dịch chiết rễ Bá bệnh thưòỉng nhiều hơn và đậm hơn so với các vết trong sắc ký đồ cho bởi thân Bá bệnh - Các kết quả thu được trong phần sắc ký lớp mỏng là tương đối chmh... phèn và xanh methylen Loại nước bằng Ethanol tuyệt đối rồi cố định tiêu bản thực vật bằng bôm trong xylen • Quan sát mô tả: Tiêu bản đã cố định được để nơi khô ráo ở nhiệt độ phòng 1-2 tuần rồi đưa lên kính hiển vi quan sát, mô tả đặc điểm giải phẫu • Chụp ảnh: Vi phẫu được đưa lên kính hiển vi có gắn máy ảnh, chụp và chuyển thành các file ảnh trên máy vi tính rồi in - Nghiên cứu thành phần hoá học: ... dịch chiết tìiân và rễ Bá bệnh trong methanol quan sát ở các bước sống khác nhau Chứ thích: (1): Sắc ký đồ địch chiết thân Bá bệiih quan sát ở bước sóng 254nm (2): Sắc ký đồ dịch chiết ứiân Bá bệnh quan sát ở bước sóng 366nm (3): Sắc ký đồ dịch chiết thân Bá bệnh sau khi phun thuốc thử hiện màu (4): Sắc ký đồ dịch chiết rễ Bá bệnh quan sát ở bước sóng 254nm (5): Sắc ký đồ dịch chiết rễ Bá bệnh quan sát... thường và các ánh sáng ở các bước sóng Ằ = 254nm và Ằ = 366nm Toàn bộ quá trình chấm, , , chụp ảnh được điều khiển bằng phần mềm winCATS sử dụng phần mềm VideoScan để phân tích sắc ký đồ + Sơ bộ phát hiện vết Saponin trên sắc ký đồ: Muc đích: Sơ bộ phát hiện vết Saponin trên sắc ký đồ dịch chiết thân và rễ Bá bệnh bằng phương pháp gelatin - huyết tạo cơ sở cho những nghiên cứu sâu hơn về dược liệu Bá bệnh