Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng của viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp

ĐẶT VẤN ĐỀ Sự ra đời của sinh dược học, dược động học đã mở ra một quan điểm mới trong ngành dược học nói chung và khoa học bào chế nói riêng. Sinh dược học đã gắn kết ý nghĩa “sinh học” với kỹ thuật bào chế, đánh giá chất lượng và sử dụng thuốc… Vì vậy, nhiều dạng thuốc mới có hiệu lực tốt đã ra đời và được sử dụng trong điều trị. Trên cơ sở hiểu biết về sinh học thời khắc (chronobiology), dược lý thời khắc (chronopharmacology), bệnh học thời khắc (chronopathology) đã tập trung nghiên cứu về nhịp sinh học và các chu kỳ phát triển của một số bệnh (bệnh tim mạch, hen, khớp, viêm loét dạ dày tá tràng,…88). Vì vậy, muốn nâng cao hiệu quả điều trị, phải sử dụng thuốc sát với diễn biến của bệnh. Nếu bệnh phát triển theo nhịp, thì thuốc cũng phải được cung cấp theo nhịp cho cơ thể bệnh nhân. Xuất phát từ yêu cầu trên, bào chế thời khắc (chronopharmaceutics) đã ra đời, phát triển ở nhiều nước tiên tiến trên thế giới và bất đầu được các nhà khoa học Việt Nam quan tâm. Mục tiêu và nội dung khoa học của bào chế thời khắc là nghiên cứu bào chế, sản xuất các dạng thuốc có khả năng cung cấp dược chất cho cơ thể theo nhịp diễn biến bệnh. Bào chế thời khắc chủ yếu dựa trên công nghệ bào chế thuốc giải phóng có kiểm soát và giải phóng theo chương trình. Thuốc giải phóng theo nhịp là hệ thống phân phối dược chất “đúng nơi”, “đúng thời điểm” và “đúng liều”. Dạng thuốc này phải phù hợp với nhịp sinh học của cơ thể và chu kỳ của bệnh 11. Diltiazem là dược chất có tác dụng chẹn kênh calci, làm giãn động mạch vành và mạch ngoại vi. Trong điều trị, các chế phẩm diltiazem được sử dụng để làm chậm nhịp tim, giảm co bóp cơ tim, làm chậm dẫn truyền nút nhĩ thất. Diltiazem thường được sử dụng để dự phòng và điều trị cơn đau thắt 2 ngực. Vì vậy, nếu uống viên diltiazem quy ước, sẽ gặp nhiều phiền phức về thời điểm uống thuốc. Thậm chí, nếu quên uống thuốc, thì sức khoẻ và tính mạng của bệnh nhân sẽ bị đe dọa. Hiện nay, trên thế giới, có một số hãng dược phẩm đã sản xuất viên diltiazem giải phóng theo nhịp và đã đưa vào điều trị. Nhưng các chế phẩm này chưa có trên thị trường thuốc Việt Nam. Vì vậy, để nâng cao hiệu quả dự phòng và điều trị của diltiazem đối với bệnh nhân bị cơn đau thắt ngực, luận án tiến hành đề tài: “Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng của viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp” với các mục tiêu sau: 1. Bào chế được viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp 60mg có thời gian tiềm tàng từ 56 giờ. 2. Xây dựng được tiêu chuẩn cơ sở và đánh giá được độ ổn định của chế phẩm nghiên cứu. 3. Đánh giá được sinh khả dụng của viên nghiên cứu trên chó thực nghiệm. Để giải quyết 3 mục tiêu trên, đề tài luận án thực hiện các nội dung nghiên cứu sau: 1. Nghiên cứu xây dựng công thức và qui trình bào chế viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp 60 mg bằng phương pháp bao khô và bao màng. 2. Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn và đánh giá độ ổn định của viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp ở điều kiện thường và lão hoá cấp tốc. 3. Xây dựng và thẩm định phương pháp HPLCMSMS để định lượng diltiazem trong huyết tương chó. 4. Đánh giá sinh khả dụng của chế phẩm bào chế được so với viên nén đối chiếu Tildiem trên chó thực nghiệm.

HỌC VIỆN QUÂN Y

NGUYỄN VĂN BẠCH

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ

VÀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NÉN DILTIAZEM GIẢI PHÓNG THEO NHỊP

LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC

HÀ NỘI - 2012

HỌC VIỆN QUÂN Y

NGUYỄN VĂN BẠCH

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ

VÀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NÉN DILTIAZEM GIẢI PHÓNG THEO NHỊP

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan luận án này là công trình nghiên cứu của riêng tôi Tất cả các

số liệu trong luận án là trung thực và chưa công bố trong bất kỳ công trình nào

TÁC GIẢ

Nguyễn Văn Bạch

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới:

GS TS Võ Xuân Minh PGS TS Phạm Thị Minh Huệ

Những người thầy đã tận tình hướng dẫn và hết lòng giúp đỡ tôi hoàn thành luận án này

Tôi xin chân thành cám ơn Đảng uỷ, Ban Giám đốc Học Viện Quân Y, Trung tâm Đào tạo-Nghiên cứu Dược, phòng Sau Đại học, Hệ sau Đại học đã cho phép và tạo mọi điều kiện cho tôi học tập và thực hiện luận án này

Tôi xin chân thành cám ơn TS Nguyễn Minh Chính và các đồng chí giảng viên,

kỹ thuật viên Trung tâm Đào tạo-Nghiên cứu Dược đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành luận án này

Tôi xin chân thành cám ơn TS Nguyễn Trần Linh, CN Vũ Tùng Lâm cùng toàn thể các thầy, cô giáo, kỹ thuật viên Bộ môn Bào chế, Bộ môn Phân tích-Độc chất (Trường Đại học Dược Hà Nội) đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành luận án này

Tôi xin chân thành cám ơn TS Phùng Thị Vinh, ThS Tạ Mạnh Hùng cùng các kiểm nghiệm viên Trung tâm Tương đương sinh học, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương

Cuối cùng, tôi xin cám ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp đã ủng hộ và động viên tôi trong quá trình thực hiện luận án này

Hà Nội, ngày 6 tháng 12 năm 2011

Nghiên cứu sinh

Nguyễn Văn Bạch

1.1.2.2 Ưu, nhược điểm của thuốc giải phóng theo nhịp 6 1.1.3 Kỹ thuật bào chế thuốc giải phóng theo nhịp 6

1.1.3.2 Hệ kiểm soát với tác nhân gây kích thích 13 1.1.3.3 Hệ kiểm soát với tác nhân điều chỉnh từ 14

1.3 Tương đương sinh học và một số phương pháp đánh 23

giá tương đương sinh học của chế phẩm diltiazem

1.3.1.1 Đánh giá sinh khả dụng in vitro 24 1.3.1.2 Đánh giá sinh khả dụng in vivo 26 1.3.1.3 Đánh giá tương đương sinh học 27 1.3.2 Một số kết quả nghiên cứu sinh khả dụng và tưong 31

đương sinh học của diltiazem 1.3.2.1 Sinh khả dụng diliazem in vitro 31 1.3.2.2 Sinh khả dụng diltiazem in vivo 32

CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, ĐỐI TƯỢNG 36

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, thiết bị và đối tượng nghiên cứu 36

2.1.3 Thuốc đối chiếu, thuốc thử và chất chuẩn 38

2.1.5 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 38

2.2.1.1 Bào chế viên nhân diltiazem 39 2.2.1.2 Bào chế viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp 39 2.2.2 Phương pháp đánh giá tiêu chuẩn chất lượng và độ 41

ổn định của viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp 2.2.2.1 Đánh giá tiêu chuẩn chất lượng 41 2.2.2.2 Phương pháp đánh giá độ ổn định 46 2.2.3 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng của viên nén 47

diltiazem giải phóng theo nhịp trên chó thực nghiệm 2.2.3.1 Xây dựng và thẩm định phương pháp HPLC- 47 MS/MS để định lượng diltiazem trong huyết tương chó 2.2.3.2 Đánh giá sinh khả dụng trên chó 52 2.2.4 Công cụ tính toán số liệu, thiết kế thí nghiệm 55

và tối ưu hoá

3.1.1 Định lượng diltiazem bằng phương pháp quang 56

phổ UV và HPLC 3.1.1.1 Định lượng diltiazem trong môi trường hoà tan 56 3.1.1.2 Định lượng diltiazem trong viên nén giải phóng 57 theo nhịp

3.1.2.2 Khảo sát công thức vỏ bao 65 3.1.2.3 Xây dựng công thức tối ưu 71 3.1.3 Nghiên cứu bào chế viên nén diltiazem giải phóng theo 76

nhịp theo phương pháp bao màng mỏng 3.1.3.1 Khảo sát công thức viên nhân 76 3.1.3.2 Khảo sát ảnh hưởng công thức màng bao đến 80 thời gian tiềm tàng

3.1.3.3 Tối ưu hoá công thức viên nén diltiazem giải 82 phóng theo nhịp

3.1.3.4 Tóm tắt công thức và qui trình bào chế 89

3.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cơ sở và đánh giá độ 90

ổn định của viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp

3.2.1 Xây dựng tiêu chuẩn của viên nén diltiazem giải phóng 90

theo nhịp 3.2.1.1 Xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng viên nén 90 diltiazem giải phóng theo nhịp

3.2.1.2 Đề xuất tiêu chuẩn chất lưọng và xây dựng tiêu 91 chuẩn cơ sở viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp 60 mg 3.2.2 Nghiên cứu độ ổn định của viên nén diltiazem 91

giải phóng theo nhịp

3.2.2.4 Tính toán dự đoán tuổi thọ của thuốc 94

3.3 Kết quả nghiên cứu sinh khả dụng 96

3.3.1 Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng 96

diltiazem trong huyết tương chó

3.3.2 Kết quả đánh giá sinh khả dụng của viên nén diltiazem 108

giải phóng theo nhịp trên chó

3.3.2.1 Xác định nồng độ diltiazem trong huyết tương 108 chó sau khi uống viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp

và viên nén Tildiem

3.3.2.2 Phân tích dược động học và so sánh sinh khả 110 dụngcủa viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp với viên nén Tildiem đối chiếu

4.1.1 Về phương pháp bao khô 115

4.2 Về nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cơ sở và đánh giá độ ổn 121

định của viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp

4.2.1 Về nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn của viên nén 121 diltiazem giải phóng theo nhịp

4.2.2 Về đánh giá độ ổn định của viên nén 124

4.3 Về nghiên cứu sinh khả dụng viên nén diltiazem giải 126

NHỮNG CÔNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CÔNG BỐ CÓ

LIÊN QUAN TỚI LUẬN ÁN

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

TT Phần viết tắt Phần viết đầy đủ

1 AUC : Diện tích dưới đường cong (Area Under Curve)

2 AUMC : Diện tích dưới đường cong nồng độ x thời gian -

thời gian (Area Under Moment Curve)

3 CA : Cellulose acetat

4 CAP : Cellulose acetat phtalat

5 Cmax : Nồng độ cực đại trong máu (Maximum Plasma

Concentration)

8 DĐVN : Dược điển Việt Nam

9 DEP : Diethyl phtalat

15 HPLC-MS/MS : Sắc ký lỏng hiệu năng cao – Ghép nối khối phổ

(High Performance Liquid Chromatography

tandem Mass Spectrophotometry)

16 HPMC : Hydroxypropyl methyl cellulose

17 HQC : Mẫu kiểm chứng giới hạn trên (High Quality

Control sample)

18 KLMB : Khối lượng màng bao

19 L-HPC : Low hydroxy propyl cellulose

20 LLOQ : Giới hạn định lượng thấp nhất (Lower Limit Of

Quantification)

21 LQC : Mẫu kiểm chứng giới hạn dưới (Lower Quality

Control sample)

22 MQC : Mẫu kiểm chứng giữa giới hạn dưới và trên

(Middle Quality Control sample)

23 MRT : Thời gian lưu trung bình (Mean Retention Time)

24 NaCMC : Natri carboxymethyl cellulose

25 PVP : Polyvinyl pyrolidon

27 S/N : Tỷ lệ tín hiệu/nhiễu (Signal To Noise)

28 SD : Độ lệch chuẩn (Standard deviation)

29 SKD : Sinh khả dụng (Biological availability)

30 SSG : Natri starch glycolat

32 Tlag : Thời gian tiềm tàng (Lag time)

33 Tmax : Thời điểm đạt được nồng độ cực đại (Time

point of maximum plasma concentration)

35 WHO : Tổ chức y tế thế giới

36 X : Giá trị trung bình

Bảng Tên bảng Trang

1.1 Một số biệt dược GPTN lưu hành trên thị trường 17 1.2 Thiết kế thử TĐ sinh học theo phương pháp chéo đôi 28 2.1 Các nguyên liệu , hoá chất sử dụng trong nghiên cứu 36 2.2 Các thông số của detector khối phổ dùng để định tính, 48 định lượng diltiazem và felodipin

3.1 Kết quả đo mật độ quang của dung dịch DIL 56 trong đệm phosphat pH = 7,2

3.2 Kết quả khảo sát độ tương thích của hệ thống sắc ký 58 3.3 Mối liên quan giữa nồng độ DIL và diện tích píc 59 3.4 Kết quả khảo sát độ lặp lại của phương pháp 60 3.5 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp 60 3.6 Công thức viên nhân với TD trương nở khác nhau 62 3.7 Công thức viên nhân với tỷ lệ L–HPC khác nhau 63 3.8 Công thức viên nhân với tỷ lệ Avicel khác nhau 64 3.9 Công thức lớp vỏ bao ngoài với tỷ lệ EC/HPMC khác nhau 65 3.10 Công thức vỏ bao ngoài với tỷ lệ EC/lactose khác nhau 67 3.11 Công thức vỏ bao ngoài với dường kính viên khác nhau 69

3.14 Hàm lượng (%) DIL trong các công thức thực nghiệm (n=6) 72 3.15 Tlag và tỷ lệ (%) DIL được giải phóng từ viên bao khô (n=6) 73 3.16 Tlag và tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ công thức tối ưu (n = 6) 75 3.17 Công thức viên nhân với các loại TD trương nở 77 3.18 Công thức viên nhân với tỷ lệ L-HPC khác nhau 78 3.19 Công thức viên nhân với lực gây vỡ viên khác nhau 79 3.20 Công thức màng bao với các polyme phối hợp khác nhau 80 3.21 Công thức màng bao với khối lượng màng khác nhau 81

3.24 Hàm lượng DIL của các công thức thực nghiệm (n=6) 84 3.25 Tlag và tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ viên nén DIL GPTN (n=6) 84 3.26 Tlag và tỷ lệ (%) DIL được giải phóng từ công thức tối ưu (n=6) 88 3.27 Tỷ lệ (%) DIL được giải phóng từ viên nén DIL GPTN 90 3.28 Độ hoà tan của DIL từ viên nén DIL GPTN bảo quản ở 92 điều kiện thường

3.30 Hàm lượng (%) DIL trong viên bảo quản ở điều kiện thường 94 3.31 Hàm lượng (%) DIL trong viên bảo quản ở điều kiện lão hoá 94

cấp tốc

3.32 Kết quả đánh giá độ thích hợp của hệ thống HPLC-MS/MS 97 3.33 Ảnh hưởng của nền mẫu tại thời gian TR của DIL 99 3.34 Sự phụ thuộc giữa tỷ lệ diện tích píc của DIL/FELO và nồng 100

độ DIL chuẩn trong huyết tương

3.35 Kết quả xác định giá trị LLOQ của phương pháp 101 3.36 Kết quả thẩm định độ đúng và độ lặp lại trong ngày 102 3.37 Kết quả thẩm định độ đúng và độ lặp lại khác ngày 102

3.40 Kết quả nghiên cứu độ ổn định của DIL trong mẫu huyết tương 105

sau 3 chu kỳ đông - rã đông

3.41 Độ ổn định của DIL trong quá trình xử lý mẫu 106 3.42 Kết quả độ ổn định dài ngày của DIL trong huyết tương 107 3.43 Nồng độ DIL trong huyết tương chó sau khi uống viên nén 108

Hình Tên hình Trang

1.1 Đặc điểm giải phóng dược chất của thuốc giải phóng theo nhịp 5

1.2 Mô hình về cơ chế của phản ứng hoá lý giữa acid hữu cơ 10

và lớp màng film chứa nhóm -N(CH3)3

+ 2.1 Sơ đồ các giai đoạn bao khô viên nén DIL GPTN 40 3.1 Đường chuẩn của dung dịch DIL trong môi trường đệm 57

phosphat pH=7,2 3.2 Sắc ký đồ của hỗn hợp TD (a) và của dung dịch DIL (b) 58

3.3 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính của diện tích píc 59

và nồng độ DIL

3.4 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên có TDTN khác nhau 62

3.5 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên có tỷ lệ L-HPC 63

khác nhau 3.6 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên có tỷ lệ Avicel khác nhau 64

3.7 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên có tỷ lệ EC/HPMC E15 66

khác nhau 3.8 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên có tỷ lệ EC/lactose 67

khác nhau 3.9 Hình ảnh viên nén bao khô với EC/Lactose trong môi trường 68

đệm phosphat pH=7, 2 của CT15 3.10 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên có khối lượng vỏ bao 68

khác nhau 3.11 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên có đường kính khác nhau 69

3.12 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên có lực dập khác nhau 70

3.13 Ảnh hưởng của tỷ lệ EC/lactose và lực dập đến Tlag 74

(X3=35 giây) 3.14 Ảnh hưởng của lực dập và thời gian nén đến Tlag (X1=2,5) 74

3.15 Tỷ lệ (%) DIL được giải phóng từ công thức tối ưu 75

3.16 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng từ các viên với các TDTN khác nhau 77

3.17 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng khi thay đổi tỷ lệ TDTN 78

3.18 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng khi thay đổi lực gây vỡ viên 79

3.19 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng khi thay đổi polyme phối hợp 80

3.20 Tỷ lệ (%) DIL giải phóng khi thay đổi khối lượng màng bao 81

3.21 Ảnh hưởng của khối lượng màng và EC tới Tlag 86

( HPMC = 0,8%; DEP = 0,6%) 3.22 Ảnh hưởng của khối lượng màng và HPMC tới Tlag 87

(EC = 4%; DEP = 0,6%)

3.24 Tỷ lệ (%) DIL từ công thức viên nén GPTN tối ưu 89 3.25 Đồ thị biểu diễn sự giảm hàm lượng (%) DIL theo thời gian 95

3.27 Sắc ký đồ của mẫu huyết tương tự tạo chứa DIL và FELO 98 3.28 Đồ thị đường chuẩn của DIL trong huyết tương 100 3.29 Đường cong nồng độ DIL theo thời gian trong huyết 109 tương 6 chó sau khi uống viên nén DIL GPTN 60mg

3.30 Đường cong nồng độ DIL theo thời gian trong huyết tương 110

chó sau khi uống viên DIL GPTN và viên Tildiem 60mg

ĐẶT VẤN ĐỀ

Sự ra đời của sinh dược học, dược động học đã mở ra một quan điểm mới trong ngành dược học nói chung và khoa học bào chế nói riêng Sinh dược học đã gắn kết ý nghĩa “sinh học” với kỹ thuật bào chế, đánh giá chất lượng và sử dụng thuốc… Vì vậy, nhiều dạng thuốc mới có hiệu lực tốt đã ra đời và được sử dụng trong điều trị

Trên cơ sở hiểu biết về sinh học thời khắc (chronobiology), dược lý thời khắc (chronopharmacology), bệnh học thời khắc (chronopathology) đã tập trung nghiên cứu về nhịp sinh học và các chu kỳ phát triển của một số bệnh (bệnh tim mạch, hen, khớp, viêm loét dạ dày - tá tràng,…[88]) Vì vậy, muốn nâng cao hiệu quả điều trị, phải sử dụng thuốc sát với diễn biến của bệnh Nếu bệnh phát triển theo nhịp, thì thuốc cũng phải được cung cấp theo nhịp cho cơ thể bệnh nhân Xuất phát từ yêu cầu trên, bào chế thời khắc (chronopharmaceutics) đã ra đời, phát triển ở nhiều nước tiên tiến trên thế giới và bất đầu được các nhà khoa học Việt Nam quan tâm Mục tiêu và nội dung khoa học của bào chế thời khắc là nghiên cứu bào chế, sản xuất các dạng thuốc có khả năng cung cấp dược chất cho cơ thể theo nhịp diễn biến bệnh Bào chế thời khắc chủ yếu dựa trên công nghệ bào chế thuốc giải phóng

có kiểm soát và giải phóng theo chương trình Thuốc giải phóng theo nhịp là

hệ thống phân phối dược chất “đúng nơi”, “đúng thời điểm” và “đúng liều” Dạng thuốc này phải phù hợp với nhịp sinh học của cơ thể và chu kỳ của bệnh [11]

Diltiazem là dược chất có tác dụng chẹn kênh calci, làm giãn động mạch vành và mạch ngoại vi Trong điều trị, các chế phẩm diltiazem được sử dụng để làm chậm nhịp tim, giảm co bóp cơ tim, làm chậm dẫn truyền nút nhĩ thất Diltiazem thường được sử dụng để dự phòng và điều trị cơn đau thắt

ngực Vì vậy, nếu uống viên diltiazem quy ước, sẽ gặp nhiều phiền phức về thời điểm uống thuốc Thậm chí, nếu quên uống thuốc, thì sức khoẻ và tính mạng của bệnh nhân sẽ bị đe dọa

Hiện nay, trên thế giới, có một số hãng dược phẩm đã sản xuất viên diltiazem giải phóng theo nhịp và đã đưa vào điều trị Nhưng các chế phẩm này chưa có trên thị trường thuốc Việt Nam Vì vậy, để nâng cao hiệu quả dự phòng và điều trị của diltiazem đối với bệnh nhân bị cơn đau thắt ngực, luận

án tiến hành đề tài: “Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng của

viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp” với các mục tiêu sau:

1 Bào chế được viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp 60mg có thời gian tiềm tàng từ 5-6 giờ

2 Xây dựng được tiêu chuẩn cơ sở và đánh giá được độ ổn định của chế phẩm nghiên cứu

3 Đánh giá được sinh khả dụng của viên nghiên cứu trên chó thực nghiệm

Để giải quyết 3 mục tiêu trên, đề tài luận án thực hiện các nội dung nghiên cứu sau:

1 Nghiên cứu xây dựng công thức và qui trình bào chế viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp 60 mg bằng phương pháp bao khô

và bao màng

2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn và đánh giá độ ổn định của viên nén diltiazem giải phóng theo nhịp ở điều kiện thường và lão hoá cấp tốc

3 Xây dựng và thẩm định phương pháp HPLC-MS/MS để định lượng diltiazem trong huyết tương chó

4 Đánh giá sinh khả dụng của chế phẩm bào chế được so với viên nén đối chiếu Tildiem trên chó thực nghiệm

1.1.1.1 Bệnh hen

Trên thế giới, việc điều trị bệnh hen bằng liệu pháp thời khắc đã được nghiên cứu rộng rãi Vai trò của nhịp một lần trong ngày trong phòng và điều trị hen đã chỉ ra rằng: Nhịp diễn biến của bệnh thường xảy ra từ 3-5 giờ sáng

Sự tắc nghẽn đường thở tăng dần dần vào ban đêm và vào buổi sáng, nhịp thở chậm hơn Sự co thắt của cuống phổi phụ thuộc vào nhịp sinh học nên hen là một bệnh rất phù hợp để điều trị theo phương pháp thời khắc [19]

Năm 1989, lần đầu tiên, FDA (Mỹ) cho phép đưa ra thị trường viên theophylin dùng 1 lần trong ngày vào buổi tối để phòng cơn hen về đêm (viên Uniphyllin) [10]

1.1.1.2 Bệnh viêm khớp

Dược lý thời khắc và điều trị thời khắc đã ứng dụng nhịp sinh học trong quá trình điều trị Ví dụ, có nhịp 1 lần trong ngày của nồng độ protein creactive và interleukin-6 trong huyết tương ở các bệnh nhân viêm khớp dạng thấp [12] Trong bệnh viêm khớp, người ta đã nghiên cứu các thông số nhịp

để xác định được triệu chứng đau tại khớp và kích thước khớp Hơn nữa, liều lượng thuốc dùng để điều trị bệnh thấp khớp cần thay đổi, do độc tính của thuốc phụ thuộc vào thời gian dùng thuốc trong ngày [111]

Bệnh nhân bị viêm khớp xương mãn tính có xu hướng ít đau hơn vào buổi sáng, nhưng đau hơn vào ban đêm Ngược lại, các bệnh nhân viêm khớp cấp tính lại thường đau nhất vào buổi sáng Vì vậy , liệu pháp điều trị thời khắc đối với các bệnh viêm khớp khi dùng các NSAID (như ibuprofen) là: Phải xác định thời gian uống thuốc phù hợp sao cho nồng độ thuốc trong máu cao nhất đúng vào khi đau nhiều nhất

1.1.1.3 Bệnh tim mạch

Một số chức năng của hệ thống tim mạch (huyết áp, nhịp tim, tốc độ máu,…) đều có nhịp sinh học 1 lần/ngày Ví dụ, trong một ngày, kháng mao mạch và khả năng phản ứng của mạch máu vào buổi sáng cao nhất và sau đó giảm dần Sự kết tập tiểu cầu tăng và hoạt động của fibrinogen giảm vào buổi sáng, dẫn đến tăng khả năng đông máu Một loạt các nghiên cứu đã cho thấy: Bệnh nhồi máu cơ tim, tim ngừng hoạt động đột ngột, đột quỵ, thiếu máu cục

bộ thường diễn ra nhiều nhất vào lúc sáng sớm Huyết áp thấp nhất vào lúc ngủ và tăng nhanh vào sáng sớm sau khi ngủ dậy [105]

Nếu uống propranolol vào 8 giờ sáng, thì Cmax là cao nhất và Tmax là ngắn nhất Sau khi dùng propranolol vào lúc 2 giờ, nhịp tim chỉ bị tác động nhẹ trong vòng 6 giờ đầu [71]

Nhịp sinh học trong sự bài tiết dịch dạ dày - tá tràng đã gợi ý rằng: Các thuốc kháng H2 (ranitidin, cimetidin, famotidin, roxatidin, nizatidin) chỉ nên

uống một lần/ngày vào buổi chiều khi sự bài tiết acid tăng cao Ngoài ra, các nghiên cứu gần đây đã chỉ ra rằng: Truyền dung dịch ranitidin với tốc độ không đổi trong suốt 24 giờ không làm tăng tác dụng Vì khi truyền, khả năng nâng pH dạ dày vào ban đêm kém hơn ban ngày Điều này cho thấy, có thể xuất hiện một chất kháng một phần với các thuốc kháng H2 vào ban đêm

1.1.1.5 Một số bệnh khác

Ngoài 4 loại bệnh đã nêu trên, liệu pháp điều trị thời khắc cũng được sử dụng trong bệnh ung thư [54], bệnh tiểu đường [76] và bệnh cholesterol máu cao [69],…

1.1.2 Bào chế thời khắc

1.1.2.1 Khái niệm và đặc điểm

Theo S Arora: Thuốc giải phóng theo nhịp là một hệ thống phân phối

dược chất “đúng nơi”, “đúng thời điểm” và” đúng liều” Những thuốc này phù hợp với chu kỳ sinh học của cơ thể và chu kỳ của bệnh [11], [104]

Đặc điểm giải phóng dược chất của dạng thuốc giải phóng theo nhịp được trình bày ở hình 1.1

Hình 1.1: Đặc điểm giải phóng dược chất của thuốc giải phóng theo nhịp

Tỷ lệ (%) dược chất được giải phóng

Thời gian Thời gian tiềm tàng

- A: Dược chất giải phóng hoàn toàn sau pha tiềm tàng

- B: Dược chất giải phóng nhanh sau pha tiềm tàng

- C: Dược chất giải phóng kéo dài sau pha tiềm tàng

Thuốc giải phóng theo nhịp (GPTN) thực chất là dạng thuốc giải phóng

có kiểm soát Đặc điểm chính của dạng thuốc này là thời gian tiềm tàng (Tlag - lag time) Đây là khoảng thời gian không có sự giải phóng của dược chất (DC) và sau khoảng thời gian này, DC được giải phóng một cách nhanh chóng hoặc kéo dài để phù hợp với nhịp sinh học của bệnh, phòng cơn tiến triển của bệnh [47], [62]

1.1.2.2 Ưu, nhược điểm của thuốc giải phóng theo nhịp

Theo các tác giả [40], [77], thuốc GPTN có ưu và nhược điểm sau:

* Ưu điểm:

- Đạt được nồng độ điều trị tại thời điểm xảy ra biến chứng Do vậy, đạt được hiệu quả dự phòng tốt và giảm được các tác dụng phụ của thuốc

- Phù hợp với những bệnh có đích tác dụng, như ung thư đại tràng

- Phù hợp với thuốc gây kích ứng niêm mạc, thuốc chuyển hóa qua gan

lần đầu cao và các thuốc bị phân hủy qua đường tiêu hóa

* Nhược điểm: Kỹ thuật bào chế phức tạp, thử nghiệm in vitro và in vivo đòi

hỏi nhiều kỹ thuật, thiết bị hiện đại (như dùng phương pháp đồng vị phóng xạ

để xác định đường đi của thuốc trong đường tiêu hóa)

1.1.3 Kỹ thuật bào chế thuốc giải phóng theo nhịp

Hệ phân phối thuốc theo nhịp có thể được phân loại thành hệ đơn tiểu phân và hệ đa tiểu phân Người ta cũng có thể phân loại thuốc GPTN thành hệ kiểm soát theo thời gian và hệ phân phối thuốc tại đích [22] Tuy nhiên, hiện nay, hệ phân phối thuốc theo nhịp được phân loại thành 3 nhóm chính: hệ kiểm soát thời gian, hệ kiểm soát bởi tác nhân kích thích và hệ được điều khiển từ bên ngoài [70], [92]

1.1.3.1 Hệ kiểm soát thời gian

Đây là dạng phổ biến nhất, có yêu cầu cao trong điều trị và là hệ kiểm soát thời gian bắt đầu giải phóng DC [64], gồm có:

a Hệ màng bao theo cơ chế phá vỡ màng (ruptuable coatings layer)

* Mô hình: Hệ thống kiểm soát DC này bao gồm nhân (viên nén, viên

nang, pellet, vi nang, vi cầu…), được bao ngoài bằng một màng kiểm soát thấm nước, nhưng không tan trong nước Khi tiếp xúc với dịch tiêu hóa, nước thấm qua màng vào nhân, tạo ra áp lực làm vỡ màng và giải phóng DC nhanh chóng Áp lực cần thiết để phá vỡ màng bao do tá dược (TD) sinh khí, chất làm tăng áp suất thẩm thấu, TD trương nở, hoặc TD siêu rã [47], [77]

* Thành phần : Gồm màng bao (thường là các polyme không tan trong

nước) và nhân chứa TD gây vỡ màng (như: TD sinh khí, TD trương nở, TD thẩm thấu)

* Đặc điểm giải phóng:

Bản chất và thành phần màng bao ảnh hưởng nhiều đến Tlag và tốc độ giải phóng của DC Tốc độ giải phóng DC sau khi vỡ màng chủ yếu phụ thuộc vào TD rã của viên nhân

* Một số nghiên cứu theo mô hình này:

- Với tác nhân gây vỡ màng là TD trương nở, trong nghiên cứu của mình, Bussemmer T và cộng sự [20] đã nghiên cứu ảnh hưởng của các TD trương nở đến mức độ rách vỡ màng Kết quả nghiên cứu cho thấy: Khả năng phá vỡ màng của natri croscarmellose (Ac-Di-Sol) > L-HPC > natri starch glycolat (Explotab)) > crospovidon (Kollidon CL) > hydroxypropyl methylcellulose (Methocel K100M)

- Busemmer T và cộng sự [21] cũng đã bào chế viên GPTN với nhân là viên nang cứng chứa acetaminophen bằng cách bao lớp trương nở Ac-Di-Sol

12% (kl/kl) và Kollidon30 4% (kl/kl) trong isopropanol Đồng thời, bao màng kiểm soát bằng EC trong ethanol 96%

- Sungthongjeen S và cộng sự [103] đã nghiên cứu bào chế viên nén GPTN với DC là buflomedil với tác nhân gây vỡ màng là natri croscarmellose Kết quả nghiên cứu cho thấy: Khi tăng TD rã trong nhân, thì

Tlag giảm Và khi tăng độ dày lớp EC, thì Tlag tăng

Ngoài ra, Krogel I [67]; Zang Y [116]; Chih – Ming Chen và cộng sự [25] đã nghiên cứu bào chế viên nén chlorpheniramin maleat, terbulalin GPTN với hệ màng bao theo cơ chế phá vỡ màng

b Hệ màng bao theo cơ chế trương nở - ăn mòn (Swellable/erodible coatings layer)

Hệ thống này được kiểm soát bằng một màng có khả năng trương hòa tan hoặc ăn mòn trong đường tiêu hóa Người ta thường dùng HPMC, HEC, HPC để kiểm soát Tlag [63] Khi bào chế, có thể dùng phương pháp bao dập (press coating), bao màng mỏng hoặc phương pháp nhúng [44]

nở-* Mô hình: Hệ màng bao gồm nhân (viên nén, viên nang, pellet,…)

chứa DC được bao bởi màng kiểm soát giải phóng trương nở-ăn mòn

* Thành phần: Màng bao thường được sử dụng là polyme tan trong

nước (HPMC, HEC, HPC,…) và polyme có độ tan phụ thuộc vào pH (như: Eudragit E, L, RS hoặc các sáp có khả năng tan chảy và bị ăn mòn trong đường tiêu hoá )

* Đặc điểm giải phóng:

Khi tiếp xúc với môi trường, polyme thân nước sẽ được hydrat hóa, dẫn tới hiện tượng chuyển dạng nhiệt động từ thể kính sang thể dẻo Sau đó, là quá trình trương nở ăn mòn, hòa tan trong môi trường hoặc hình thành lớp gel thông qua sự phá vỡ liên kết chéo Tlag được tính từ lúc hệ tiếp xúc với nước đến khi lớp màng bị ăn mòn hoặc hòa tan hết Sau khoảng thời gian này, DC

sẽ giải phóng nhanh trong môi trường [43]

* Một số nghiên cứu theo mô hình này:

- Karavas E và cộng sự [60], [61] đã sử dụng HPMC để kiểm soát Tlagcủa viên nén felodipin GPTN Viên có hai lớp: Nhân chứa felodipin/PVP theo

tỷ lệ 10/90, lớp bao ngoài gồm HPMC và PVP Sự giải phóng DC qua 3 giai đoạn: Đầu tiên, nước được thấm vào lớp HPMC với khoảng 1 giờ Sau đó, lớp bao bị hòa tan và bị phá vỡ, tạo ra Tlag của quá trình giải phóng Cuối cùng, là giai đoạn giải phóng nhanh của DC Sự thay đổi của Tlag có thể kiểm soát bằng cách thay đổi tỷ lệ HPMC trong lớp bao

- Efentakis M và cộng sự [32] đã bào chế một hệ GPTN với một mô hình đặc biệt (dạng “cốc”) theo cơ chế ăn mòn với 2 DC được nghiên cứu là natri diclofenac và ketoprofen Hệ thống trên gồm 3 phần: Nhân chứa DC, lớp bao ngoài không thấm nước chứa thành phần là CAP và “nắp” đậy là một polyme thân nước có khả năng trương nở (như polyethylen oxid, natri alginat, hay NaCMC) “Nắp” sẽ bung ra khi hút nước và DC được giải phóng nhanh chóng Kết quả cho thấy, NaCMC trương nở lớn nhất, tạo lớp gel dày nhất và cho Tlag lâu nhất

- Gazzaniga và cộng sự [42] đã xây dựng mô hình hệ Chronotopic®gồm: Viên nhân chứa DC và lớp màng bao chứa một polyme thân nước (HPMC) Một màng bao tan trong ruột được bao bên ngoài lớp HPMC này để

hệ có thể chịu được sự thay đổi khi tháo rỗng dạ dày Cơ chế giải phóng của

hệ Chronotopic được giải thích như sau: Tlag trước khi DC giải phóng có thể được kiểm soát bởi độ dày và độ nhớt của lớp HPMC Đối với hệ này, tốt nhất nên dùng cho các DC ít tan trong nước

Hệ Time Clock® [90] là một hệ đưa thuốc dựa trên dạng thuốc rắn được bao bởi hỗn dịch gồm sáp Carnauba và sáp ong trắng được phân tán trong nước nhờ Tween 80 Sau khi tiếp xúc với môi trường hòa tan, hệ phân tán này được ăn mòn trong đường tiêu hoá

c Hệ màng bao với cơ chế làm thay đổi tính thấm của màng

Polyme acrylat có chứa nhóm -N(CH3)3+ (như Eudragit RS hoặc RL),

có khả năng làm tăng thấm ẩm khi có mặt của các anion hữu cơ (anion succinat; anion acetat, anion format…) Hệ này được thiết kế dựa trên việc sử dụng polyme Eudragit RS hoặc Eudragit RL bao quanh hạt có chứa DC và acid hữu cơ Khi tiếp xúc với môi trường hoà tan, nước thấm qua màng vào nhân, hoà tan acid hữu cơ Ở dạng phân ly, nhóm RCOO-

liên kết với nhóm -N(CH3)3

+ bằng phản ứng thay thế ion Cl- của nhóm -N(CH3)3

+

Cl- Ở dạng không phân ly, acid hữu cơ sẽ liên kết với vị trí thân dầu của polyme và làm tăng tính thân nước của màng Kết quả của các phản ứng hóa lý này đều thúc đẩy quá trình hydrat hóa màng film Do đó, làm tăng tính thấm của màng Trong khoảng thời gian xảy ra quá trình trên, DC hầu như không giải phóng, nên tạo ra Tlag Khi tính thấm của màng tăng, DC được giải phóng nhanh vào môi trường Cơ chế của phản ứng hóa lý giữa acid hữu cơ và lớp màng film chứa nhóm -N(CH3)3+ được thể hiện ở hình 1.2 [17], [47], [83]

Hình 1.2: Mô hình về cơ chế của phản ứng hóa lý giữa acid hữu cơ và lớp

màng film chứa nhóm -N(CH 3 ) 3

+

- Niraswa S và cộng sự [83] đã nghiên cứu sự giải phóng theophylin qua màng Eudragit RS thông qua cơ chế làm tăng tính thấm của màng bao quanh hạt có chứa DC được trộn với acid succinic Nhóm -COOH của acid sẽ phản ứng với nhóm amoni bậc 4 (-N+

(CH3)3Cl-) của Eudragit RS tạo ra ion

Cl-, có vai trò làm tăng áp lực thẩm thấu Vì vậy, làm tăng tính thấm của màng nhờ làm tăng quá trình hydrat hóa màng Eudragit RS Kết quả của quá trình này là nước được thấm qua màng và sau đó, DC được giải phóng nhanh [84]

d Hệ kiểm soát viên nang

* Mô hình: Cấu tạo của hệ này gồm: Thân nang không tan trong nước

chứa DC, nắp nang và nút ngăn giải phóng tạo ra Tlag

* Thành phần: Nắp là vỏ gelatin dễ tan, có thể sản xuất bằng cách nén

polyme tan và trương nở trong nước như: HPMC, PVA, hoặc polyethylen oxid

* Đặc điểm giải phóng: Sau khi uống, nắp sẽ hòa tan khi tiếp xúc với

môi trường giải phóng, tạo điều kiện cho nút trương nở và bị đẩy ra khỏi thân

nang Tlag được kiểm soát bởi bản chất, kích thước, vị trí của nắp và cơ chế

mở nắp Để DC được giải phóng nhanh, người ta sử dụng TD rã hoặc TD sinh khí trong công thức bào chế [63]

* Một số nghiên cứu theo mô hình này:

- Hệ PulsincapTM là hệ nang kiểm soát GPTN đầu tiên được phát triển bởi Scherer DDS, Ltd Hệ bao gồm một vỏ nang không tan trong nước (nang gelatin cứng được bao với polyvinyl clorid) Bên trong hệ chứa DC và một nút có khả năng trương nở được sử dụng để bịt kín đầu nang Khi viên nang tiếp xúc với môi trường hòa tan, nút này sẽ trương nở và sau một khoảng Tlag, nút tự đẩy ra khỏi nang và DC được giải phóng nhanh chóng Hệ Pulsincap®chứa dofetilide được nghiên cứu trên người tình nguyện và cho kết quả tốt [101] Thời gian giải phóng DC phụ thuộc vào vị trí và kích cỡ của nút trong nang [44], [47]

Hệ PORT (The Programmable Oral Release Technologies system) lại dựa trên cơ chế đẩy nút bằng áp lực thẩm thấu Hệ gồm 1 vỏ nang gelatin được bao bởi cellulose acetat (CA) chứa 2 liều thuốc được ngăn cách bằng

một nút thân dầu (Gelucire) Liều thứ nhất giải phóng tức thì sau khi nắp nang hòa tan và liều thứ hai giải phóng sau khi nút bật ra khỏi nang Ở liều thứ hai, trong công thức thuốc có thêm TD thẩm thấu, để tạo ra áp lực đẩy nút ra khỏi nang Tlag phụ thuộc vào độ dày màng CA, bề dày của nút và lượng TD thẩm thấu Kết quả nghiên cứu invivo trên 6 người tình nguyện cho thấy: Sự giải phóng liều 2 không phụ thuộc vào thức ăn, Tlag in vivo tương ứng với Tlag in vitro [64], [77]

Với nang được bào chế từ EC, Li B và cộng sự [72] đã chế tạo được viên nang giải phóng gồm 3 nhịp gồm: Lớp giải phóng nhanh DC gồm natri diclofenac, crospovidon và lactose, lớp đệm điều chỉnh có thể là HPMC, natri alginat, carbopol hay natri carboxymethyl starch Lớp này kiểm soát khoảng cách thời gian giải phóng DC Natri clorid, acid citric/ natri hydrocarbonat, lactose làm TD độn ở đáy nang Với hệ thống như vậy, DC được giải phóng theo 3 “nhịp” Tlag phụ thuộc vào tỷ lệ HPMC/natri alginat và tăng khi tăng tỷ

lệ của HPMC/natri alginat trong lớp điều chỉnh Độ cứng của các lớp không

ảnh hưởng đến sự giải phóng DC

e Hệ bơm thẩm thấu

Hệ được thiết kế nhằm phân phối thuốc theo động học bậc 0 sau một khoảng Tlag thích hợp Về cơ bản, hệ gồm một nhân chứa thuốc, một lớp thẩm thấu và/hoặc một lớp trương nở được bao bằng màng bán thấm Sau một khoảng thời gian hoạt hóa được thiết lập, DC sẽ được bơm với tốc độ hằng định vào môi trường qua một lỗ khoan trên màng bán thấm Tlag phụ thuộc vào

TD thẩm thấu, độ bày của màng và đường kính của lỗ giải phóng [44], [77]

Hệ bơm thẩm thấu đầu tiên với đích giải phóng ở đại tràng là hệ thống Osmet Pump Mặc dù thử nghiệm invivo trên người tình nguyện, kết quả khả quan, nhưng tính ứng dụng của hệ còn hạn chế do kích cỡ dạng bào chế lớn

và hiệu suất sản xuất thấp [42]

- Quadros và cộng sự đã thiết kế một hệ bơm thẩm thấu khác, dạng viên nén 3 lớp: Lớp HEC/dextran trong cùng được dập viên Sau đó, bao lớp màng bán thấm CA ở giữa, trên có khoan 1 lỗ đường kính 1mm và lớp bao tan trong ruột ngoài cùng Kết quả thử nghiệm invivo trên chó cho thấy: Tlag trung bình

và lượng thuốc còn lại sau 24 giờ phù hợp với kết quả in vitro [42]

- Alza Corporation phát triển hệ bơm thẩm thấu gồm một lõi nhân có 2 ngăn (một ngăn chứa thuốc, một ngăn chứa polyme trương nở) được bao bằng

3 lớp Tính từ trong ra ngoài, lớp thứ nhất có khả năng trì hoãn giải phóng DC nhờ đặc tính trương nở của polyme; lớp thứ 2 có tính bán thấm và lớp thứ 3

có khả năng tan trong môi trường ruột, không tan trong môi trường acid Trên màng bán thấm có khoan 1 lỗ có đường kính 6,35µm Cơ chế kiểm soát giải phóng DC cũng tương tự các hệ trên, chỉ khác ở giai đoạn giải phóng của DC

là do vai trò của ngăn chứa polyme trương nở Hệ có Tlag khoảng 2-4 giờ [49]

Một trong các thuốc GPTN theo cơ chế thẩm thấu là hệ Push-PullTM Push-Pull là hệ giải phóng kéo dài kiểm soát thời gian bắt đầu giải phóng DC (controlled-onset extended-releae, COER ) Hệ này làm chậm giải phóng DC

để đạt được nồng độ cao nhất tại những thời điểm nhất định [92]

1.1.3.2 Hệ kiểm soát với tác nhân gây kích thích

a Hệ nhạy cảm với tác nhân hóa học

Điển hình là các chế phẩm insulin GPTN và các thuốc chống viêm GPTN

* Thuốc insulin GPTN: Đối với bệnh tiểu đường, sự gia tăng nồng độ

glucose theo nhịp sinh học đòi hỏi phải tiêm insulin vào thời điểm thích hợp Một số dạng bào chế được nghiên cứu có thể đáp ứng với sự thay đổi nồng độ glucose Một hệ bao gồm hydrogel nhạy cảm với pH chứa glucose oxidase bất hoạt trong hydrogel Khi nồng độ glucose trong máu tăng, glucose oxidase chuyển glucose thành acid gluconic dưới tác động của pH Sự thay đổi pH làm polyme trương nở và dẫn đến giải phóng insulin

* Thuốc chống viêm GPTN: Trong trường hợp cơ thể bị viêm do chấn thương, gãy xương…, các tế bào bị viêm sẽ sản sinh ra các gốc hydroxyl Yui

và cộng sự [92] đã thiết kế một hệ phân phối thuốc dựa trên các gốc hydroxyl được tạo ra do viêm Các tác giả đã sử dụng acid hyaluronic được làm giảm hoạt tính bởi men hyaluronidase hoặc các gốc tự do Do đó, có thể điều trị cho các bệnh nhân bị viêm nhiễm (như bệnh nhân viêm khớp) bằng cách sử dụng các chất chống viêm liên kết với các gel acid hyaluronic

b Hệ nhạy cảm với nhiệt độ

DC được kiểm soát do sự trương nở hay không trương nở của hệ dưới

sự thay đổi của nhiệt độ Poly (N-isopropyl acrylamid) (PIPAAm) trương nở

ở nhiệt độ dưới 320 C và giải phóng DC do sự khuếch tán Khi nhiệt độ tăng đột ngột, hydrogel co lại và tạo thành trên bề mặt gel một lớp có mật độ dày,

có khả năng ngăn cản giải phóng DC [17]

Coughlan D C và cộng sự [30] khi nghiên cứu ảnh hưởng của đặc tính vật lý, hóa học đến sự trương nở của hydrogel (PIPAAm) và thuốc GPTN dùng (PIPAAm), thấy rằng: DC sơ nước làm giảm trương nở và những DC thấm nước làm tăng khả năng trương nở của (PIPAAm)

1.1.3.3 Hệ kiểm soát với tác nhân điều chỉnh từ bên ngoài

Trong hệ thống này, DC được giải phóng theo chương trình bởi sự tác động của các tác nhân bên ngoài như: Lực từ trường, sóng siêu âm và ảnh hưởng của dòng điện [92]

Đối với DC được giải phóng (in vitro) do được kích thích bởi từ trường,

Saslawski và cộng sự đã thiết kế hệ trị liệu gồm các vi cầu alginat chứa insulin Đối với các hệ được điều khiển bởi sóng siêu âm, Miyazaki và cộng

sự đã đánh giá ảnh hưởng của sóng siêu âm (cường độ 1 MHz) lên tốc độ giải phóng của insulin bò từ cốt polymer alcol ethylenevinyl Các tác giả thấy rằng, có sự giảm mạnh nồng độ glucose trong máu khi sử dụng sóng siêu âm [81]

1.2 DILTIAZEM VÀ BÀO CHẾ DILTIAZEM GIẢI PHÓNG THEO NHỊP

1.2.1 Diltiazem hydroclorid

1.2.1.1 Công thức hoá học

- Công thức phân tử: C22H26N2O4S HCl

- Khối lượng phân tử: 450,98

- Công thức cấu tạo:

- Tên khoa học: 2,3-dihydro-2-(4-methoxyphenyl)-1,5-benzothiazepin-4(5 H)-on,hydrochlorid [6], [78]

(2-S-cis)-3-(Acetyloxy)-5-[2-(dimethylamino)ethyl]-1.2.1.2 Tính chất lý, hoá

Diltiazem hydroclorid (DIL) là bột kết tinh hoặc tinh thể nhỏ, trắng, không mùi, dễ tan trong nước, acid formic, methanol và chloroform, hơi tan trong alcol khan, không tan trong ether và benzen Dung dịch 1% trong nước

có pH từ 4,5 đến 5,3 Nhiệt độ nóng chảy từ 207,5-212°C, [α]D

24= +98,3±1,4° (nồng độ 1,002% trong methanol) DIL nhạy cảm với ánh sáng, bảo quản trong đồ đựng kín, tránh ánh sáng [9], [107]

Theo Y Zhu, DIL bền với nhiệt: Ở nhiệt độ thấp hơn nhiệt độ chảy (2500C), trên sắc ký đồ sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) không xuất hiện đỉnh tạp [117]

1.2.1.3 Phương pháp định lượng

Theo USP 30 [110], định lượng DIL hydroclorid trong nguyên liệu và trong chế phẩm bằng phương pháp HPLC với cột là C18, pha động là hỗn hợp đệm phosphat (pH = 6,2), acetonitril, methanol và detector UV

Ngoài ra, một số tác giả đã định lượng DIL trong các chế phẩm bằng phương pháp HPLC với các điều kiện sắc ký khác nhau: Cột có thể là Rexchrome ODS, Silica (Phenomenex) hoặc Supelcosil LC-DP, [66], [97], [98] Pha động có thể là hỗn hợp hexan và isopropanol [57] hoặc acetonitril

- DIL chuyển hoá chủ yếu ở gan bởi cytochrom P450, isoenzym

CYP3A4 Hai chất chuyển hoá chính của DIL là N- monodesmethyl và desacetyl diltiazem Hai chất chuyển hoá nay đều có tác dụng dược lý, nhưng hiệu lực tác dụng chỉ bằng 25 - 50% so với DIL Thời gian bán thải sinh học (t1/2) của DIL trung bình từ 6 - 8 giờ [4], [5], [99]

b Tác dụng dược lý

DIL là thuốc chẹn kênh calci, có tác dụng giãn động mạch vành và mạch ngoại vi, làm chậm nhịp tim, giảm sức co bóp cơ tim và làm chậm dẫn truyền nút nhĩ thất DIL có tác dụng ức chế enzym nucleotid phosphodiesterase vòng ở tế bào cơ trơn, dẫn đến tăng nucleotid vòng, gây giãn cơ trơn mạch máu làm giảm huyết áp

DIL dùng để điều trị đau thắt ngực và cao huyết áp DIL còn được tiêm tĩnh mạch để điều trị loạn nhịp tim Liều thay đổi theo dạng dùng, giảm ở người cao tuổi và ở người suy giảm chức năng gan, thận [4], [78]

c Chỉ định

- DIL được sử dụng để dự phòng và điều trị đau thắt ngực, kể cả đau thắt ngực Prinzmetal Đối với người đau thắt ngực không ổn định, dùng viên giải phóng kéo dài với liều 360 - 480 mg/ngày

- Điều trị cao huyết áp: Thường dùng viên nén hoặc viên nang giải phóng kéo dài, liều ban đầu là 60 – 120 mg, 2 lần/ngày

- Điều trị loạn nhịp: Liều ban đầu là 250 g/kg thể trọng, tiêm tĩnh mạch Liều có thể tăng lên 350 g/kg thể trọng, tuỳ thuộc vào từng người bệnh [5], [99]

1.2.1.5 Tương tác thuốc

DIL có thể phối hợp được với các thuốc chẹn beta, thuốc lợi tiểu, thuốc

ức chế men chuyển và các thuốc hạ huyết áp khác Khi dùng đồng thời với các thuốc chẹn thụ thể alpha, cần phải theo dõi chặt chẽ huyết áp động mạch,

vì DIL gây tác dụng hiệp đồng, làm giảm huyết áp [5], [99]

1.2.1.6 Một số biệt dược kiểm soát giải phóng

- Trên thị trường có nhiều biệt dược chứa DIL được lưu hành Trong

đó, chủ yếu là nang cứng chứa pellet tác dụng kéo dài Còn dạng GPTN gần như là chưa thấy xuất hiện ở Việt Nam Một số biệt dược dạng giải phóng theo nhịp được trình bày ở bảng 1.1

Bảng 1.1: Một số biệt dược GPTN lưu hành trên thị trường

Dƣợc chất Biệt Dƣợc Chỉ định Điều trị thời khắc

Theophyllin Uniphyl® Hen suyễn tăng co thắt phế quản trong buổi sáng Famotidin Pepcid® Loét dạ dày tăng tiết acid dạ dày

vào buổi tối Simvastatin Zocor® Tăng cholesterol

máu

cholesterol tăng tổng hợp qua đêm Verapamil HCl Covera®HS Cao huyết áp

tăng huyết áp vào đầu

buổi sáng

Verapamil HCl Verelan®PM Cao huyết áp

Diltiazem HCl Cardizem®LA Cao huyết áp

Propranolol HCl InnoPran®XL Cao huyết áp

- Hiện nay, thị trường thuốc Việt Nam đang lưu hành 1 số biệt dược DIL tác dụng kéo dài như: viên nang Herbessser R 100mg và 200mg (Nhật Bản), Kaizem-CD 90mg, 120mg và Dilzem SR 90mg (Ấn độ), Diltahexal retard 90mg (Đức)

1.2.2 Một số nghiên cứu về kỹ thuật bào chế dạng thuốc giải phóng theo nhịp của diltiazem

1.2.2.1 Dạng viên nén

* Ishino R và cộng sự [58] đã bào chế viên DIL GPTN theo phương pháp

bao khô Thành phần màng bao gồm: PVC, PEG và dầu hydrogen hoá Đánh giá độ hoà tan theo phương pháp của JP XII Các tác giả cũng tiến hành nghiên cứu SKD của chế phẩm trên chó thực nghiệm Kết quả nghiên cứu cho thấy:

- Trong thử nghiệm in vitro, tất cả các viên nén đều thể hiện đặc tính GPTN điển hình (thuốc giải phóng nhanh sau pha tiềm tàng) Đặc tính này là

do cơ chế kiểm soát được thời gian rã Viên nén có Tlag là 7 ± 1 giờ DIL giải phóng sau Tlag khá nhanh (khoảng 15 phút)

Trong thử nghiệm invivo, nồng độ của DIL trong máu tăng nhanh từ 4 -

8 giờ sau khi uống và Tlag trung bình phù hợp với độ hoà tan in vitro Tlag ở những chó khác nhau cũng khác nhau đáng kể

* Nakano M và cộng sự [82] đã nghiên cứu viên GPTN theo cơ chế hòa tan khi sử dụng polyme hydroxylethyl cellulose (HEC) Viên nhân chứa 30mg DIL được bao màng bằng cách bao khô Thành phần màng bao là HEC (AL-15, CM-L4, CM-L3, CM-L, CM-G, CM-H)

Thử nghiệm in vivo được thực hiện trên người tình nguyện Kết quả thu được cho thấy:

- Thuốc giải phóng nhanh chóng sau pha tiềm tàng trong tất cả các công thức bào chế Tlag kéo dài khi độ nhớt của HEC loại CM tăng và lâu nhất

là ở HEC loại CM-L2 Mặt khác, tỷ lệ giải phóng DIL có xu hướng giảm khi kéo dài Tlag theo thứ tự CM-L4 <CM-L3 < CM-L2

- Tlag có thể được kiểm soát bằng cách thay đổi kích thước phân tử,

độ dày và độ nhớt của polymer, do ảnh hưởng đến sự thẩm thấu của nước và

DC qua lớp gel [45], [80], [109] Mặt khác, DC giải phóng ra khỏi viên là do

sự khuếch tán của nước vào viên qua lớp gel [15]

Kết quả khi đo độ hoà tan của DIL từ viên HEC-CM với 3 độ nhớt khác nhau trong môi trường pH 1,2 và pH 6,8, cho thấy: Có sự khác biệt không đáng kể về Tlag Tuy nhiên, sau vài giờ, tỷ lệ thấm nước giảm khi tăng

độ nhơt của HEC Kết quả này phù hợp với nghiên cứu của Wan và cộng sự [113]

* Fan T Y và cộng sự [33] đã nghiên cứu viên nén GPTN theo mô hình phá vỡ màng bao bằng TD trương nở Thành phần viên gồm: DIL, PVP liên kết chéo hoặc natri carboxymethyl starch và bột talc Viên nhân được bao màng kiểm soát giải phóng bằng cách bao dung dịch gồm: EC và Eudragit L (1:2) trong ethanol Kết quả đánh giá độ hoà tan và SKD của các chế phẩm trên người tình nguyện cho thấy: Với viên nhân sử dụng natri carboxymethylstarch, khi tăng độ dày màng bao, thì Tlag tăng và tốc độ giải phóng giảm Tlag tăng theo thứ tự tỷ lệ màng bao lần lượt là: 9,5%>7,4%>5,7% Với viên sử dụng PVP, khi tăng độ dày màng bao, Tlagtăng theo tỷ lệ màng bao là: 6,0%, 7,2% và 8,4%.Đối với thử nghiêm in vivo, viên qui ước không có Tlag , còn viên GPTN có Tlag là 4,9 giờ So sánh các thông số DĐH giữa 2 viên cho thấy: Không có sự khác nhau đáng kể về: ke,

t1/2, Cmax, AUC, nhưng có sự khác nhau rõ rệt về Tmax (viên qui ước là 3,1 giờ còn viên GPTN là 8 giờ) Điều này chứng tỏ viên GPTN đã kéo dài Tlag , nhưng tốc độ giải phóng DIL vẫn không giảm SKD của viên GPTN tương đương với viên qui ước

* Fukui E và cộng sự [38] đã nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến Tlag

và tốc độ giải phóng của viên DIL GPTN theo cơ chế hòa tan viên nhân Kết quả nghiên cứu cho thấy: Tất cả các viên nén bao khô đều có pha tiềm tàng với lực nén lần lượt là 600, 1060và 1820 KG/cm2

Tlag và tốc độ giải phóng DIL sau pha tiềm tàng không bị ảnh hưởng nhiều bởi lực nén Tlag tăng khi khối lượng phân tử HPC tăng Viên L3 (có thành phần là L-HPC) và viên L6 (có thành phần là hỗn hợp 70% HPC-L, 30% HPC-M) được thử in vivo trên chó Viên L3 và L6 được so sánh với viên nhân và so với thử nghiệm hòa tan Kết quả đánh giá tương quan in vivo và in vitro cho thấy: Tlag in vitro của viên L3 là 3 giờ và L6 là 6 giờ Tlag in vivo của L3 là 3,5±0,3 giờ; còn của L6 là 4,3±0,2 giờ Viên nhân không có Tlag Giá trị của Cmax viên nhâncao hơn so với viên bao Tmax trung bình của L3 và L6 là 5,5 giờ và 7 giờ Trong khi đó,

Tmax của viên nhân là 1giờ

* Conte U và cộng sự [27] đã bào chế viên GPTN theo phương pháp bao khô Thành phần viên nhân gồm có DIL, lactose, dầu hydrogen hóa, PVP

và magnesi stearat Thành phần màng bao gồm có: HPMC, lactose, PVP, magnesi stearat và titan dioxyd Kết quả nghiên cứu cho thấy: Khi thử độ hoà tan, sau 1 giờ, các viên không bao đã bắt đầu giải phóng DIL Đối với các viên bao khô, DIL chỉ giải phóng sau một Tlag Với các viên sử dụng màng bao theo cơ chế ăn mòn, viên nhân chỉ giải phóng DIL khi màng bao hoà tan

từ từ Viên bao khô với màng bao theo cơ chế ăn mòn có động học giải phóng giống như viên nhân, nhưng kéo dài giải phóng DC

* Fukui E và cộng sự [39] đã nghiên cứu bào chế viên nén DIL hydroclorid giải phóng tại đại tràng bằng phương pháp bao khô, sử dụng vỏ bao có thành phần chính là hydroxypropylmethylcellulose acetat succinat (HPMCAS) Bào chế viên nhân theo phương pháp tạo hạt ướt Thành phần gồm: DIL, tinh bột ngô, dung dịch PVP 33% trong ethanol, calci citrat, calci carboxymethylcellulos và magnesi stearat Bào chế viên nén DIL GPTN theo

phương pháp bao khô với thành phần màng bao là HPMCAS hoặc HPMCAS

và một chất sơ nước Kết quả cho thấy: DIL hoà tan tốt trong viên nén GPTN

có màng bao chứa HPMCAS Viên nén có khả năng kháng acid do lớp bao ngoài không hoà tan trong acid, nên thuốc giải phóng thông qua cơ chế khuếch tán Trong môi trường acid, tỷ lệ giải phóng DC giảm và Tlag tăng khi tăng lực nén Trong môi truờng pH 6,8, hầu hết các TD có tác dụng kéo dài

Tlag so với chỉ dùng HPMCAS đơn thuần Calci stearat, bari stearat, sắt stearat

và myristic stearat tạo ra Tlag lớn hơn 3 giờ

1.2.2.2 Dạng hạt và pellet

* Bodmeier R và cộng sự [17] đã nghiên cứu ảnh hưởng của loại hệ

đệm và cường độ đệm đến sự giải phóng DIL từ hạt được bao bởi Eudragit

RS, RL 30 Kết quả cho thấy: Độ hoà tan của DIL không phụ thuộc vào pH

của môi trường Tốc độ giải phóng DIL chủ yếu phụ thuộc vào các cation của polyme tạo màng Đường cong hoà tan của DIL tuân theo đường sigma gồm

3 pha Ở pha tiềm tàng, chỉ có 1 lượng rất ít DIL được giải phóng Tlag và tốc

độ giải phóng DC bị ảnh hưởng lớn của môi trường đệm DIL giải phóng nhanh nhất và Tlag ngắn nhất trong hệ đệm acetat (pH 5,0), tiếp đó là format (pH 3,5), phosphat (pH 7,4) và HCl (pH 1,0)

* Về cơ chế vỡ màng, Ching-Cheng Kao và cộng sự [26] đã nghiên cứu

hệ pellet DIL GPTN theo cơ chế phá vỡ màng với màng bao là polyme Eudragit RS 30D Pellet nhân DIL được bào chế bằng cách bồi dung dịch DIL 10% trong ethanol 60% lên hạt trơ trong thiết bị tầng sôi Pellet DIL GPTN được bào chế theo phương pháp bao màng bao kiểm soát giải phóng, gồm có các thành phần sau: Eudragit RS 30D, TEC (10-20% so với Eudragit), talc và polysorbat 80 Hỗn dịch bao chứa 30% chất rắn, được bao ở 4 mức: 5; 7,5; 10

và 12,5% khối lượng pellet Các tác giả đã thu được kết quả sau: Nếu tăng tỷ

lệ chất hoá dẻo trong polymer, thì Tlag giảm Chất hóa dẻo TEC dùng ở nồng

độ 20% là phù hợp, cho phép tạo ra màng bao mịn màng trên pellet Sự giải

phóng DIL không phụ thuộc vào pH, mà chỉ phụ thuộc vào nồng độ hoặc loại ion Vỏ bao càng dày, càng làm chậm quá trình giải phóng DIL và tạo ra một

Tlag dài hơn

* Heinicke G và cộng sự [51], [53] đã nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường và cách giải phóng DC từ pellet DIL được bao bằng hỗn hợp Eudragit

R và Eudragit L Pellet nhân được bào chế bằng cách bồi lớp DIL lên các hạt đường nhờ dung dịch HPC trong ethanol Thành phần pellet GPTN gồm: Pellet DIL nhân được bao với hỗn hợp Eudragit RS và RL với sự có mặt của triethyl citrat (TEC), natri lauryl sulfat (NLS) theo tỉ lệ 83,3; 5,9; 8,8 và 2% Bột talc được dùng làm TD chống dính với tỉ lệ 50% chất khô của dịch bao Pellet được bao trong thiết bị tầng sôi ở 7 mức: 7, 9, 11, 13, 15, 17 và 19% khối lượng vỏ bao so với pellet Các tác giả đã thu được kết quả sau: Cơ chế giải phóng theo đồ thị giải phóng hình sigma Đầu tiên là pha tiềm tàng, DC giải phóng rất ít (khoảng 1% trong 2 giờ), Tlag phụ thuộc vào độ dày màng bao (với mức bao 11% Tlag là 2 giờ) Tiếp theo pha tiềm tàng là pha giải phóng nhanh (giải phóng khoảng 90% DIL trong vòng 5 giờ)

* Đối với ảnh hưởng của chất diện hoạt lên khả năng giải phóng DC, Heinicke G và cộng sự [52] cũng đã bào chế pellet nhân Sau đó, bào chế pellet GPTN bằng phương pháp bao màng với thành phần màng bao như trên Natri lauryl sulfat được thêm vào vỏ bao ở hàm lượng 0 - 11% để nghiên cứu tác động đến giải phóng DC Một số TD khác, như natri hexanesulfonat, acid stearic, natri stearat, Tween 80, được dùng thay thế natri lauryl sulfat Kết quả nghiên cứu cho thấy: Ở hàm lượng 0,5 - 5% trong thành phần màng bao, natri lauryl sulfat kéo dài Tlag cả trong môi trường acid và đệm phosphat pH 6,8 Khi tỉ lệ natri lauryl sulfat trong màng tăng, thì tốc độ giải phóng DC tăng Trong môi trường acid, các chất có khả năng trao đổi ion (như natri hexanesulfonat, natri stearat, Tween 80, ) đều làm giảm Tlag Sự giải phóng

DC có liên quan đến khả năng trương nở của pellet trong môi trường hòa tan

* Đối với viên 3 lớp, Klokkers-Bethke K và Fischer W [65] đã bào chế viên nang GPTN chứa pellet DIL bằng cách phun hỗn dịch DIL lên các hạt đường trong thiết bị tầng sôi để tạo ra pellet Sau đó, pellet được bao 3 lớp: Lớp 1, lớp bao tan ở ruột (gồm: polyme là cellulose acetat phtalat, hỗn hợp Eudragit S100, L30D); lớp 2, lớp acid (gồm: acid succinic, hỗn hợp EC-HPC) và lớp 3, lớp polyme không thấm nước (gồm polyme không thấm nước

có EC và chất hoá dẻo thân dầu) Từ các thành phần của 3 lớp bao, các tác giả

đã thiết kế được 5 công thức Sau đó, đánh giá độ hoà tan và SKD của các chế phẩm công thức trên người tình nguyện Kết quả cho thấy: Từ các công thức khác nhau của pellet, sự tồn tại của pha tiềm tàng khi pH của môi trường hoà tan thay đổi phụ thuộc vào thành phần pellet Pellet I phù hợp với công thức bao tan ở ruột quy ước và xuất hiện Tlag sau khi pH thay đổi từ acid sang kiềm Pellet II và III chứa lớp bao acid có đặc tính hoà tan giống như pellet I Pellet IV được bao bởi lớp acid và màng bao phối hợp có pha tiềm tàng ngắn hơn sau khi pH thay đổi Ngược lại với pellet loại I, II và III, sau khi pH thay đổi 2 giờ, khả năng giải phóng DC của pellet IV tăng lên Pellet loại V có thêm 1 lớp màng dưới lớp acid, có khả năng giải phóng DC hoàn toàn trong 2 giờ sau khi pH thay đổi từ acid sang kiềm yếu

* Sharma Vinay K và cộng sự [95] đã bào chế viên nang DIL GPTN chứa 3 loại pellet (giải phóng nhanh, trung bình và chậm) được bao bởi Eudragit RS 30D với tỷ lệ 16, 39 và 63% Các pellet được bao lót bởi HPMC 10% và sấy ở 45-50°C trong 24 giờ Kết quả cho thấy: Từ viên nang, DC được giải phóng theo 3 nhịp, 0-33% DC giải phóng sau 6h, 33-66% giải phóng sau 12 giờ và 66-100% giải phóng sau 18 giờ

1.3 TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VÀ MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC CỦA CHẾ PHẨM DILTIAZEM GIẢI PHÓNG THEO NHỊP

1.3.1 Đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học

1.3.1.1 Đánh giá sinh khả dụng in vitro

a Thử nghiệm hòa tan:

Lần đầu tiên, Dược điển Mỹ USP 18 đã chính thức đưa phép thử độ hoà tan (Dissolution Test) vào áp dụng Một số tác giả còn đánh giá mức độ và tốc

độ hoà tan in vitro (Diện tích dưới đường cong hoà tan AUC in-vitro và thời gian hoà tan trung bình MDT) và coi đây là những thông số SKD in vitro Thông số này có ý nghĩa quan trọng trong dự báo hấp thu cũng như trong nghiên cứu về tương đương sinh học (TĐSH) Một tiêu chuẩn giới hạn về độ hoà tan có thể áp dụng được cho nhiều DC hay nhiều dạng bào chế qui ước Nhưng đối với dạng bào chế giải phóng kiểm soát, mỗi chế phẩm đều được nghiên cứu sản xuất để có một tốc độ giải phóng DC riêng theo chủ định từ trước Vì vậy, không có một tiêu chuẩn thử chung nào được quy định

Dược điển Mỹ USP 23 mô tả 7 loại thiết bị để đánh giá độ hoà tan cho các loại chế phẩm khác nhau Trong đó, 4 loại có thể sử dụng để đánh giá độ hoà tan cho các dạng bào chế giải phóng kiểm soát qua đường uống USP 30 [110] cũng quy định về mức, số đơn vị và các tiêu chuẩn khi thử độ hoà tan của các chế phẩm giải phóng kiểm soát

- Nhóm các phương pháp phụ thuộc vào mô hình: Các phương pháp này có thể sử dụng các mô hình được mô tả ở trên hoặc các mô hình ít phổ

biến hơn như mô hình bậc hai (quadratic), mô hình logistic và mô hình Gompertz

- Nhóm các phương pháp độc lập với mô hình

* Chỉ số đặc trưng cho sự khác nhau (difference factor, f1) giữa hai đồ thị giải phóng ở tất cả các điểm lấy mẫu được tính theo công thức sau:

n

j

j j

R

T R f

1

1 1

Trong đó:

- j: Số thứ tự điểm lấy mẫu; n: Số điểm lấy mẫu

- Rj và Tj: Tỷ lệ (%) giải phóng DC của chế phẩm đối chiếu và chế phẩm thử tại thời điểm lấy mẫu thứ j

* f1 = 0, khi đồ thị giải phóng DC của chế phẩm đối chiếu và chế phẩm thử giống hệt nhau và f1 càng lớn khi đồ thị giải phóng DC của chế phẩm đối chiếu và chế phẩm thử càng khác nhau

* Chỉ số đặc trưng cho sự giống nhau (similarity factor, f2) giữa hai đồ thị giải phóng được tính theo công thức sau:

5 , 0

1

2 2

* Phương pháp tính f1 và f2 như sau:

- Xác định đồ thị hòa tan 2 chế phẩm (mỗi chế phẩm 12 đơn vị) và mỗi

Ngoài ra, có thể dùng mô hình độc lập khoảng tin cậy đa biến hay mô hình phụ thuộc Tuy nhiên, dùng f2 đơn giản và sử dụng rộng rãi nhất [28]

1.3.1.2 Đánh giá sinh khả dụng in vivo

b Các phương pháp đánh giá sinh khả dụng

* Phương pháp DĐH: Là phương pháp định lượng DC trong dịch sinh

học (máu, nước tiểu, nước bọt, ) Từ đó, vẽ đồ thị biến thiên của nồng độ DC theo thời gian và đánh giá, so sánh các thông số DĐH [41], [110] Các thông

số DĐH thường được đánh giá:

- Diện tích dưới đường cong AUC được tính theo công thức sau:

e

n i

i i

t C

- Cmax (nồng độ cực đại của DC trong máu), T max (là thời gian để đạt được Cmax), t1/2 (là thời gian bán thải), Ke (là hằng số tốc độ thải trừ) và MRT (là thời gian lưu trú trung bình của DC trong cơ thể)

* Phương pháp dược lực học (Pharmacodynamic study)

Phương pháp này áp dụng trong trường hợp không ứng dụng được phương pháp DĐH Đánh giá SKD bằng phương pháp so sánh tác dụng của thuốc thử và thuốc đối chiếu trên các thông số dược lực học có thể đo đếm