nghiên cứu bào chế viên nén phân tán trong nước acyclovir 200mg

ĐẶT VẤN ĐỀTrong những năm gần đây, cùng với sự tiến bộ của ngành Dược thế giới và nước ta, thị trường Dược phẩm trong nước xuất hiện nhiều dạng bào chế mới. Dạng thuốc rắn là dạng thuốc được sử dụng nhiều nhất đặc biệt là thuốc viên, chiếm hơn 50%. Tuy nhiên, đối với hầu hết những bệnh nhân lớn tuổi và trẻ em, đặc biệt là bệnh nhân có những chứng bệnh về thực quản, bệnh nhân tâm thần phân liệt,… rất khó khăn khi uống những loại thuốc viên nén hoặc viên nang cứng.Viên nén phân tán trong nước là một dạng bào chế mới, thu hút sự quan tâm của nhiều nhà bào chế, do có nhiều ưu điểm nổi bật. Với đặc điểm thuốc phân tán nhanh và hoàn toàn trong nước trong thời gian dưới 3 phút giúp cho bênh nhân có thể uống một cách dễ dàng.Acyclovir (ACV) là một chất có cấu trúc hoá học tương tự nucleosid, có tác dụng chọn lọc trên tế bào nhiễm virus herpes. Tác dụng của ACV mạnh nhất trên virus herpes simplex typ 1 (HSV1) và kém hơn ở virus herpes simplex typ 2 (HSV2), virus varicellazoster (VZV), tác dụng yếu nhất trên cytomegalovirus (CMV). Ngoài ra, acyclovir còn có tác dụng ức chế virus viêm gan B. Acyclovir là lựa chọn hàng đầu cho các bệnh nhiễm virus, do có độc tính thấp và tác dụng phụ nhẹ. Các dạng thuốc chứa ACV có nhiều trên thị trường phần lớn là các dạng bào chế kinh điển. Các nghiên cứu về viên nén phân tán trong nước chứa ACV hầu như không có. Vì thế, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu bào chế viên nén phân tán trong nước acyclovir 200mg ” nhằm các mục tiêu sau: 1 Nghiên cứu ảnh hưởng của một số tá dược đến thời gian rã để xây dựng và tối ưu hoá công thức viên nén phân tán trong nước acyclovir 200mg. 2 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng và theo dõi độ ổn định của viên nén phân tán trong nước acyclovir 200mg.

ĐẶT VẤN ĐỀ

Trong những năm gần đây, cùng với sự tiến bộ của ngành Dược thếgiới và nước ta, thị trường Dược phẩm trong nước xuất hiện nhiều dạngbào chế mới Dạng thuốc rắn là dạng thuốc được sử dụng nhiều nhất đặcbiệt là thuốc viên, chiếm hơn 50% Tuy nhiên, đối với hầu hết những bệnhnhân lớn tuổi và trẻ em, đặc biệt là bệnh nhân có những chứng bệnh vềthực quản, bệnh nhân tâm thần phân liệt,… rất khó khăn khi uống nhữngloại thuốc viên nén hoặc viên nang cứng

Viên nén phân tán trong nước là một dạng bào chế mới, thu hút sựquan tâm của nhiều nhà bào chế, do có nhiều ưu điểm nổi bật Với đặcđiểm thuốc phân tán nhanh và hoàn toàn trong nước trong thời gian dưới 3phút giúp cho bênh nhân có thể uống một cách dễ dàng

Acyclovir (ACV) là một chất có cấu trúc hoá học tương tự nucleosid,

có tác dụng chọn lọc trên tế bào nhiễm virus herpes Tác dụng của ACVmạnh nhất trên virus herpes simplex typ 1 (HSV-1) và kém hơn ở virusherpes simplex typ 2 (HSV-2), virus varicella-zoster (VZV), tác dụng yếunhất trên cytomegalovirus (CMV) Ngoài ra, acyclovir còn có tác dụng ứcchế virus viêm gan B Acyclovir là lựa chọn hàng đầu cho các bệnh nhiễmvirus, do có độc tính thấp và tác dụng phụ nhẹ Các dạng thuốc chứa ACV

có nhiều trên thị trường phần lớn là các dạng bào chế kinh điển Các nghiêncứu về viên nén phân tán trong nước chứa ACV hầu như không có Vì thế,chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài:

“ Nghiên cứu bào chế viên nén phân tán trong nước acyclovir 200mg ”

nhằm các mục tiêu sau:

1 - Nghiên cứu ảnh hưởng của một số tá dược đến thời gian rã để xâydựng và tối ưu hoá công thức viên nén phân tán trong nước acyclovir200mg

2 - Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng và theo dõi độ ổn định của viênnén phân tán trong nước acyclovir 200mg

Viên phân tán có 2 loại

- Viên phân tán trong miệng (orodispersible tablets): là viên nén không

có màng bao, khi đặt vào miệng phải phân tán nhanh trước khi nuốt

- Viên nén phân tán (dispersible tablets): là viên nén có hoặc không cómàng bao, phân tán đồng đều trong nước tạo thành hỗn dịch đồng nhất

Cả 2 loại viên này gần như giống nhau về bào chế, các tiêu chuẩnchất lượng,…

Hiện nay, do viên phân tán có các ưu điểm nổi bật nên gần như tất cảcác nhóm dược chất đều có dạng bào chế này với nhiều biệt dược nổi tiếngtrên thị trường [17], [30]

1.1.2 Ưu nhược điểm của viên phân tán (VPT)

Dễ che dấu mùi vị của dược chất

Dược chất ổn định, nói chung tuổi thọ dài hơn các dạng thuốclỏng

Dễ đầu tư sản xuất lớn

Người bệnh dễ sử dụng

Do là viên phân tán nên nó có những ưu điểm vượt trội khác như:

Viên phân tán trước khi uống nên dược chất được hấp thunhanh, do đó nhanh chóng đạt dược hiệu quả điều trị Thích hợp với nhữngdược chất dùng cho các bệnh nhân cần hiệu quả tấn công nhanh: sốt, đau,viêm,…

Thuận tiện cho những bệnh nhân không thể nuốt một khối rắnnhưng có thể nuốt dịch lỏng, thuận lợi cho người già, trẻ nhỏ, một số bệnhnhân tâm thần phân liệt, những bệnh nhân có kèm bệnh ở đường thực quản,

…

Hạn chế được nhược điểm của một số dược chất mà khi hoàtan sẽ không bền vững, mùi vị khó uống hoặc gây kích ứng đường tiêuhoá[15]

1.1.2.2 Nhược điểm

Khi bào chế viên phân tán, một số thách thức đặt ra là:

Phải rã trong thời gian ngắn

Kích thước của viên không quá lớn

Trang thiết bị máy móc và đầu tư nghiên cứu

Tối thiểu hoặc không có dư lượng cắn trong cốc khi phân tán.Vấn đề bao gói, ảnh hưởng hương vị,… [15]

1.1.3 Kỹ thuật và tá dược trong bào chế viên phân tán

1.1.3.1 Sử dụng tá dược siêu rã

Trong những năm gần đây, một vài nhóm tá dược mới xuất hiện gọi

là tá dược siêu rã (TDSR) Gọi là TDSR vì chúng được dùng với tỷ lệ thấp(4 - 5%) trong thành phần viên nén nhưng vẫn đạt hiệu quả rã nhanh Sovới các tá dược rã thông thường, ngoài hiệu quả rã nhanh hơn, việc sử dụngvới tỷ lệ nhỏ sẽ hạn chế được ảnh hưởng đến độ trơn chảy và khả năng chịu

nén của khối bột dập viên Dựa vào cấu trúc hoá học, người ta chia TDSRthành 3 nhóm chính [14], [20].

* Tinh bột biến tính SSG (sodium starch glycolat)

Được sản xuất từ tinh bột bằng biến đổi hoá học, tạo ra các liên kếtchéo làm giảm khả năng hoà tan và carboxymethyl hoá làm tăng tính thânnước Tiểu phân dạng hình cầu, trơn chảy và chịu nén tốt Có thể trương nởgấp 300 lần thể tích Hàm lượng sử dụng làm tá dược rã trong viên nénthường là 2 - 8%, tốt nhất là 4% Khả năng rã của SSG ít bị ảnh hưởng củacác tá dược trộn sơ nước, có thể tương kị với acid ascorbic Sản phẩmthương mại: Explotab, primojel, Tablo…[14], [20]

* Cellulose biến tính (croscarmellose)

Là dạng polymer có liên kết chéo của natri carboxymethyl cellulosenên làm giảm khả năng hoà tan trong nước Tiểu phân dạng thô có cấu trúcsợi xoắn với độ dài khác nhau, độ trơn chảy kém Trương nở gấp 4 - 8 lầnkhi phân tán trong nước Được sử dụng làm tá dược rã trong viên nénthường với hàm lượng 2% với dập thẳng và 3% đối với xát hạt ướt Tươngđối ổn định, khá hút ẩm Những chất hút ẩm làm giảm hiệu quả rã củacroscarmellose Croscarmellose có tương kị với acid mạnh, muối tan củasắt, nhôm, thuỷ ngân Sản phẩm thương mại: Ac - Di - Sol, nymcel,primellose, disolcel…[14], [20]

* PVP liên kết chéo (cross-linked polyvinylpyrrolidon - crospovidon)

Được tạo ra bởi 2 liên kết chéo của monome n-vinyl-2-pyrrolidon.Tiểu phân dạng hình cầu, độ xốp cao, chịu nén tốt, tương đối ổn định,nhưng khả năng hút ẩm cao Làm tá dược rã trong viên nén với hàm lượngthường dùng từ 1 - 3% Sản phẩm thương mại: Polyplasdone XL,

polyplasdone XL10, polyplasdone INF-10, kollidon CL, kollidon CLM,crospovidone M ……[14], [20].

1.1.3.2 Sử dụng hệ sủi bọt

Trong công thức hệ sủi bọt nói chung và viên nén sủi bọt nói riêng,ngoài thành phần các dược chất, tá dược dính, tá dược trơn còn có tá dượcsủi bọt Tá dược sủi bọt được coi là tá dược rã của viên, gồm acid (hoặcanhydrid acid hữu cơ, muối acid…) và muối kiềm (muối carbonat vàbicarbonat của natri và kali, có thể cả calci carbonat vô định hình và một sốnguồn khác) Trong môi trường nước, hai thành phần này phản ứng vớinhau sinh ra khí CO2 phá vỡ cấu trúc viên

Ứng dụng của hệ sủi bọt là giảm kích ứng niêm mạc của một sốdược chất (ví dụ aspirin) do dược chất được pha loãng trước khi uống, tăngsinh khả dụng do dược chất đã được giải phóng, hoà tan sẵn trong nước nên

đi qua dạ dày nhanh Mặt khác, CO2 tạo ra có thể che dấu mùi vị khôngthích hợp của một số dược chất và tăng nhu động ruột, do đó làm tăng khảnăng hấp thu[14], [15]

Có thể giải thích: trong quá trình sấy, đường có nhiệt độ nóng chảy thấpchuyển thành pha lỏng bao quanh các hạt đường có nhiệt độ nóng chảy cao,khi để nguội và bảo quản, đường đông lại tạo ra những lỗ trống trong viên,

độ xốp của viên tăng lên làm cho viên rã nhanh, đồng thời độ cứng củaviên nén tăng (trước khi làm nóng, viên nén không có đủ độ cứng) Thờigian rã của viên nén thu được bằng phương pháp này có thể dưới 30 giây.Viên sử dụng xylitol và erythritol tốt nhất với độ xốp tăng lên, diện tích bềmặt tiếp xúc tăng và độ cứng không phụ thuộc vào trạng thái kết tinh củaxylitol[14], [15].

1.1.3.4 Sử dụng tá dược thăng hoa

Để bào chế viên nén có độ xốp cao, hoà tan nhanh nhưng vẫn đảmbảo các tính chất cơ lý khác nhau như độ cứng, độ mài mòn… người tathêm vào công thức dập viên tá dược thăng hoa Sau khi dập thành viên,viên nén được sấy làm tá dược thăng hoa tạo ra cấu trúc xốp cho viên, làmviên rã rất nhanh Các tá dược này thường có tác dụng dược lý riêng nênnếu quá trình thăng hoa không hoàn toàn thì tác dụng điều trị của thuốc sẽ

bị ảnh hưởng Các tá dược thăng hoa hay sử dụng là camphor, thymol,menthol…

Adel M Aly và cộng sự (2005) sử dụng 20% camphor trong viênnén tenoxicam Sau khi thăng hoa, viên có thời gian rã in vitro là 21 giây,

in vivo là 33 giây, ngắn hơn rất nhiều so với viên thông thường và tỷ lệdược chất hấp thu tại khoang miệng là 29% so với 18% của viên đối chứng

…[10], [31]

1.1.3.5 Sử dụng hạt rắn lỏng

Bào chế viên nén giải phóng nhanh bằng phương pháp tạo “hạt rắnlỏng” cải thiện được độ rã, độ hòa tan và sinh khả dụng của thuốc chứa cácdược chất ít tan trong nước Hạt rắn lỏng được tạo thành bằng sự phối hợpmột phần chất rắn với một phần chất lỏng không qua giai đoạn xát hạt vàsấy, có khả năng trơn chảy, chịu nén phù hợp với quá trình dập viên thôngthường

Thành phần viên gồm dược chất, dung môi lỏng thân nước khôngbay hơi như polyethylene glycol phân tử lượng thấp (300 - 400), propylenglycol, polysorbat 80, glycerin…, tá dược độn chịu nén tốt như dẫn xuấtcellulose, tá dược có khả năng trơn chảy tốt như Aerosil, tá dược rã có tínhtrương nở mạnh như SSG… Kỹ thuật tạo hạt rắn lỏng tiến hành như sau:dược chất được hoà tan trong hoặc phân tán trong dung môi lỏng khôngbay hơi tạo dung dịch hoặc hỗn dịch được gọi chung là thuốc lỏng Phốihợp tá dược độn với thuốc lỏng tạo thành hỗn hợp bột khô không dính Cho

tá dược Aerosil vào hỗn hợp bột để tạo khối hạt có khả năng chịu nén, trơnchảy tốt Thêm tá dược siêu rã rồi dập thành viên[10].

1.1.3.6 Sử dụng hệ phân tán rắn

Hệ phân tán rắn là một pha rắn trong đó dược chất được phân tántrong chất mang (carrier) hoặc cốt (matrix) trơ về mặt tác dụng dược lýđược điều chế bằng phương pháp thích hợp Tuỳ khả năng bền với nhiệtcủa dược chất, nhiệt độ nóng chảy của chất mang mà người ta áp dụng cácphương pháp đun chảy, dung môi hay nghiền

Các chất mang thường được sử dụng trong hệ phân tán rắn là cácpolymer thân nước như: polyethylene glycol, polyvinyl pyrrolidon,polyvinyl alcol…, các dẫn chất cellulose, polymethacrylat, cyclodextrin,urea

Về mặt cấu trúc hoá lý, hệ phân tán rắn có thể là hỗn hợp eutecticđơn giản, một dung dịch rắn hoặc hỗn dịch rắn trong đó dược chất (có thểtồn tại ở dạng vô định hình) được phân tán ở mức độ phân tử trong chấtmang kết tinh Hệ phân tán rắn có thể là phức hợp giữa dược chất và chấtmang

Ưu điểm chính của hệ phân tán rắn là làm tăng cả tốc độ và mức độhoà tan của dược chất khó tan và ít tan Nhược điểm là khó khăn trong sản

xuất quy mô lớn, sản phẩm có độ ổn định vật lý không cao, khó nghiền vàrây, có kích thước lớn do có lượng chất mang lớn[10], [32].

1.1.3.7 Kỹ thuật đông khô

Đông khô là quá trình làm khô dung dịch nước đã được đông lạnh ởnhiệt độ thấp hơn nhiệt độ eutectic của dung dịch, dung môi được loại trựctiếp từ pha rắn không qua pha lỏng dưới áp suất giảm cho ra sản phẩm khôxốp, háo nước, hoà tan nhanh và dược chất ít bị phân huỷ

Dược chất của viên đông khô (lyophilized tablet) hoà tan vào nước ởnhiệt độ thích hợp, sau đó phân tán vào dung dịch tá dược, rồi được chovào vỉ có khuôn theo yêu cầu Đặt vỉ thuốc vào thiết bị đông khô và tiếnhành các bước đông khô theo quy trình Nước làm dung môi hoà tan cácthành phần được thăng hoa trong quá trình đông khô để lại viên có cấu trúcviên rất xốp

Tá dược của viên đông khô thường là polymer: gelatin, alginat hoặcdextran tạo cốt cấu trúc vô định hình căng, làm viên đàn hồi Cácpolysaccarid như manitol, sorbitol tạo cấu trúc kết tinh giúp viên chắc đẹp

Ưu điểm của phương pháp là điều kiện sản xuất ở nhiệt độ, áp suấtthấp hạn chế phân huỷ dược chất Viên rất xốp, thân nước và đặc biệt háonước nên hoà tan nhanh Nhược điểm là chi phí sản xuất lớn, cần trangthiết bị đặc biệt, sản phẩm có độ bền cơ học kém, cần có điều kiện đónggói, bảo quản khắt khe nên có giá thành cao[10], [14].

1.1.3.8 Kỹ thuật phun sấy

Phun sấy được sử dụng rộng rãi trong bào chế dược phẩm và hoásinh vì phun sấy làm dung môi được bốc hơi nhanh nên tạo ra các hạt có độmịn và độ xốp cao Nguyên lý chung của phương pháp này là dược chất có

độ tan kém được hoà tan vào dung môi thích hợp Trong quá trình phun

sấy, dung môi được bốc hơi ngay và thu được hỗn hợp bột khô có cấu trúcsiêu mịn và ở dạng vô định hình Do đó đã cải thiện đáng kể tính thấm vàdiện tích bề mặt của dược chất Nhiều nghiên cứu cho rằng sản xuất hạt chedấu vị đắng cho viên rã nhanh bằng phương pháp phun sấy là thích hợpnhất[10], [14].

Có khả năng hoà loãng lớn với dược chất

Khả năng chịu nén tốt, viên có độ cứng tốt khi dập với lực nhỏ

Không có tác dụng dược lý, nên có sự tương hợp với dược chất Tádược nên không màu, không mùi và có vị tốt (ngon miệng)

Giá thành phải phù hợp, không nên quá đắt làm cho lợi thế về kinh tếkhông còn

Nên có tỷ trọng khô cao, vì nếu quá thấp làm cho khối lượng bột làmđầy cối thấp do đó viên sau khi nén sẽ mỏng

Thực tế trên thị trường không có 1 tá dược nào đáp ứng đủ các yêu cầutrên, do vậy trong quá trình làm thường xem xét phối hợp 2 hay nhiều loạivới nhau[1], [33]

+ Nhóm tá dược chảy tốt nhưng rã kém

Dibasic calci phosphate

+ Nhóm tá dược chảy tốt và rã tốt bằng phương pháp hoà tan

Ngoài ra, một số tá dược vừa được sử dụng như là chất tạo vị, chemùi là: Manitol, lactose, …

1.1.4 Đánh giá độ rã cho viên phân tán

Trong số các tiêu chí cần đánh giá viên phân tán thì độ rã là tiêu chíquan trọng nhất Có nhiều phương pháp để đánh giá độ rã.

1.1.4.1 Phương pháp 1

- Thiết bị: Sử dụng thiết bị thử độ rã thông thường

- Tiến hành: Theo chuyên luận về “dispersible tablets” ghi trong BP.

Phương pháp thử giống với phương pháp thử độ rã của viên nén và viênnang thông thường nhưng sử dụng nhiệt độ môi trường ở 15 - 25oC [17]

- Kết quả: Thời gian rã của viên được xác định là thời điểm mà không còn

cặn của viên trên mặt lưới của thiết bị thử

1.1.4.2 Phương pháp 2

100rpm

1

2 3

5

4

1 Móc treo 4 Bình chứa dung môi

2 Giỏ đựng viên thuốc 5 Cánh khuấy

- Tiến hành: Thể tích nước dùng làm môi trường thử là 900 ml ở 15 - 25o C

và tốc độ cánh khuấy là 100 vòng/phút

- Kết quả: Thời gian rã của viên được xác định là thời điểm mà viên rã và

lọt hoàn toàn qua lưới rây của giỏ đựng viên thuốc

1.1.4.3 Phương pháp 3

- Thiết bị:

+ Cốc có mỏ 1000 ml đường kính 100 ± 2 mm

+ Lưới rây đường kính 200 mm có đường kính mắt rây 2000 μm

+ Động cơ khuấy có thể điều chỉnh tốc độ

+ Cánh khuấy hình chân vịt bằng thép không gỉ gồm 4 thanh cố định tạovới nhau 1 góc 45o Kích thước thích hợp của cánh khuấy như sau:

Hình 1.2: Kích thước của cánh khuấy

- Tiến hành: Đổ vào cốc 1000 ml nước ở 30 ± 2oC Cánh khuấy được đặt ởtrung tâm sao cho khoảng cách từ cạnh đáy của cánh khuấy đến mặt đáycủa cốc là 60 mm Thả viên thuốc vào trong cốc khi không khuấy và để yêntrong 1 phút Sau đó khuấy với tốc độ khoảng 300 vòng/phút trong 2 phút

30 giây Ngừng khuấy và đổ nhanh hỗn dịch qua lưới rây 2000 μm rồi rửacốc với 50 ml nước, đổ tiếp phần còn lại này qua lưới rây

- Kết quả: Viên được coi là rã hoàn toàn nếu không còn cặn trên lưới rây.

1.1.4.4 Phương pháp 4

Với viên phân tán trong miệng thì viên rã trong môi trường nước bọt,tuy nhiên lượng nước bọt trong miệng là hạn chế và trong các dược điểnchưa có phương pháp đánh giá nào gần với điều kiện in vivo Phương phápsau đây là cải tiến của phương pháp thông thường, có thể sử dụng để xácđịnh thời gian rã của viên phân tán trong miệng tương tự điều kiện invivo[19]

4

1 Viên thuốc cần thử 3 Bình chứa môi trường

2 Lưới rây 4 Máy rung lắc

Hình 1.3: Thiết bị thử độ rã tương tự điều kiện in vivo

- Tiến hành: Cho 6 ml đệm Sorenson (pH 6,8) vào bình, như vậy 4 ml sẽ ở

dưới còn 2 ml sẽ ở trên lưới rây Đặt viên thuốc lên trên lưới và toàn bộ hệthống được đặt lên máy rung lắc

- Kết quả: Thời gian rã của viên là thời gian mà tất cả các mảnh vỡ lọt qua

lưới rây

1.1.5 Một số nghiên cứu gần đây về viên phân tán

Nguyễn Thị Nhung (2008) đã nghiên cứu bào chế viên nén tự phântán chứa natri diclofenac bằng phương pháp dập thẳng Tác giả đã khảo sátđược ảnh hưởng của crospovidon, chất diện hoạt và độ xốp đến thời gian rãcủa viên Tỷ lệ tối ưu của crospovidon là 5% Ở 2 lực dập 500 và 1000 kg,khi tỷ lệ gôm xanthan thay đổi từ 1 - 4%, các mẫu viên thu được đều cóthời gian rã đạt yêu cầu Tuy nhiên, với dạng thuốc viên nén tự phân tán thìviệc tạo ra được một hỗn dịch đủ độ nhớt là rất cần thiết Mặt khác khilượng gôm xanthan tăng lên thì độ nhớt của hỗn dịch tăng, giúp cho dượcchất phân tán đều hơn và ổn định hơn trong hỗn dịch Về ảnh hưởng củachất diện hoạt thì việc sử dụng natri lauryl sulfat trong công thức đập viênlàm cho thời gian rã tăng lên không đáng kể nhưng làm cho viên rã thànhcác tiểu phân mịn hơn, cải thiện được khả năng phân tán của viên vào môitrường phân tán Tác giả đã đưa ra được công thức tối ưu cho viên nén tựphân tán natri diclofenac với tỷ lệ crospovidon 5%, gôm xanthan 4% vànatri lauryl sulfat 1,5%, công thức tối ưu có thời gian rã là 17 giây và cáctiêu chí khác đều đạt yêu cầu[11].

Jashanjit Singh và Rajmeet Singh (2009), trường đại học Swift, Ấn

Độ đã thiết kế và tối ưu hoá công thức viên phân tán trong miệng chứameloxicam sử dụng thiết kế thí nghiệm 22 Viên được bào chế bằng phươngpháp tạo hạt ướt Hai biến độc lập là lượng crospovidon và lượng manitol.Manitol là một tá dược tan trong nước, dùng với mục đích che vị cho dượcchất Biến phụ thuộc là thời gian rã Viên tạo ra được khảo sát các chỉ tiêu:đồng đều khối lượng, độ cứng, thời gian rã, hàm lượng, thời gian thấm ướt,

tỷ lệ nước hấp thu và khả năng giải phóng dược chất in vitro Kết quả chỉ rarằng sự có mặt của TDSR và manitol là cần thiết với viên phân tán trongmiệng Thời gian rã của tất cả các công thức đều nhỏ hơn 60 giây và đềuđạt các chỉ tiêu trên Ví dụ công thức sử dụng 5% crospovidon và 44%

manitol có thời gian rã là 32 giây, độ cứng 4,93 kg/cm2, hàm lượng 98,5%

và giải phóng dược chất 99,5% trong 30 giây so với 49,5% của viên nénthông thường Kết quả thực nghiệm hoàn toàn phù hợp với lý thuyết Vớithời gian rã đảm bảo, khả năng giải phóng dược chất nhanh và độ bền cơhọc cao, viên phân tán meloxicam hoàn toàn có thể được tiến hành sản xuất

ở quy mô công nghiệp[26]

Snehalatha và các cộng sự (2009) đã nghiên cứu bào chế viên phântán piroxicam sử dụng các TDSR có nguồn gốc thiên nhiên chế biến từ cácloại cây cỏ như: Plantago ovata, Cassia tora,…Các tác giả đã bào chế 6công thức sử dụng các loại TDSR trên theo hai phương pháp là tạo hạt ướt

và dập thẳng nhằm mục đích thu được viên giải phóng dược chất nhanh với

tỷ lệ định trước Ảnh hưởng của tỷ lệ TDSR và phương pháp bào chế đượctiến hành khảo sát Các viên tạo ra được xác định nhiều thông số vật lýkhác nhau Kết quả của nghiên cứu chỉ ra rằng công thức chứa 5% Cassiatora bào chế bằng phương pháp dập thẳng có khả năng rã, hoà tan tốt hơncác các công thức khác với thời gian rã là 60 giây và độ hoà tan là 67,54 %sau 45 phút Thông số vật lý của các công thức đều nằm trong giới hạnchấp nhận được[27]

G D Gupta và các cộng sự (2009) đã tiến hành nghiên cứu bào chếviên phân tán chứa salbutamol sulfat Hen phế quản là bệnh có diễn biếnđột ngột và cần dược chất phải phát huy tác dụng nhanh chóng trong khicác viên nén thông thường lại có thời gian tiềm tàng dài và tác dụng bị trìhoãn Do vậy bào chế salbutamol dưới dạng viên phân tán sẽ làm cho dượcchất giải phóng nhanh, tăng hiệu quả điều trị bệnh hen phế quản Viên phântán được bào chế bằng hai phương pháp sử dụng TDSR và tá dược thănghoa Trong phương pháp sử dụng tá dược thăng hoa, sau khi dập thànhviên, viên nén được sấy làm tá dược thăng hoa tạo ra cấu trúc xốp cho viên,

làm viên rã rất nhanh Các tác giả đã kết luận rằng viên phân tánsalbutamol sử dụng tá dược thăng hoa (camphor, thymol, menthol, amonibicarbonat) có thời gian rã dài hơn so với sử dụng TDSR crospovidon vàtất cả các mẫu viên đã được bào chế có thời gian rã trong khoảng 51,66 -72,33 giây, thời gian thấm ướt trong khoảng 46,66 - 77,33 giây[19].

C M Setty và cộng sự (2004) đã bào chế viên phân tán aceclofenacbằng phương pháp dập thẳng có sử dụng TDSR Kết quả cho thấy khi viên

sử dụng 3 nhóm TDSR (tỷ lệ 2 - 12%) thì có thời gian rã ngắn, dưới 57,5giây Khi tăng lượng croscarmellose thì thời gian rã của viên giảm xuống(từ 28,5 giây xuống 17 giây), thời gian để dược chất giải phóng được 50%

và 80% (t50% và t80%) giảm đi Khi tăng lượng crospovidon thì không ảnhhưởng đến thời gian rã của viên và tốc độ hoà tan của dược chất Nếu tănglượng SSG thì thời gian rã của viên tăng lên và tốc độ hoà tan dược chấtgiảm đi (t50% và t80% tăng lên) Ngoài ra khi bảo quản viên trong điều kiệnthực và điều kiện lão hoá cấp tốc, thời gian rã của viên ngắn hơn và độcứng của viên giảm đi[25]

Sandeep B Patil và cộng sự (2009) đã nghiên cứu bào chế viên phântán olanzapin bằng phương pháp dập thẳng Các tác giả đã khảo sát ảnhhưởng của lượng crospovidon và hydroxypropyl cellulose - HPC lên thờigian rã, thời gian thấm ướt, hàm lượng và khả năng giải phóng dược chất invitro Thiết kế thí nghiệm đầy đủ 32 được sử dụng để thiết kế công thứcviên phân tán olanzapin Kết quả cho thấy khi lượng crospovidon tăng từ4% đến 8% thì thời gian rã của viên giảm và khả năng giải phóng dượcchất tăng lên Ngược lại, khi tăng lượng HPC từ 2,5% đến 4,5% thì thờigian rã tăng và khả năng giải phóng dược chất giảm Công thức bào chế sửdụng 8% crospovidon và 3,5% HPC có thời gian rã thấp nhất là 22,21 giây

và giải phóng 97,81% dược chất sau 45 phút[24]

Mukesh Gohel và cộng sự (2008) đã nghiên cứu bào chế viên phântán nimesulid bằng kỹ thuật sấy chân không Viên chứa nimesulid,camphor, crospovidon, silicon dioxid và lactose được bào chế bằng phươngpháp tạo hạt ướt Có 2 cách thức để bào chế viên phân tán nimesulid bằng

kỹ thuật sấy chân không Cách thứ nhất là hạt được đem sấy để camphorthăng hoa trước, hạt tạo ra có độ xốp cao được mang đi dập viên Cách thứhai là hạt được dập thành viên trước sau đó sấy viên để camphor thăng hoa.Viên tạo ra được đánh giá độ mài mòn, thời gian thấm ướt và thời gian rã.Trong quá trình nghiên cứu, thiết kế thí nghiệm đầy đủ 32 được sử dụng đểthiết kế công thức viên phân tán nimesulid Các tác giả đã khảo sát ảnhhưởng của 2 biến công thức là lượng crospovidon và lượng camphor đếnthời gian rã và độ mài mòn Các công thức đã bào chế có thời gian rã từ 20đến 120 giây, độ mài mòn từ 0,137% đến 0,400% và các viên bào chế theocách thứ hai có thời gian rã thấp hơn các viên bào chế theo cách thứ nhất

Kỹ thuật sấy chân không rất đơn giản và hiệu quả cao, có thể thay thế chocác kỹ thuật đắt tiền khác[17]

1.2 TỔNG QUAN VỀ ACYCLOVIR

1.2.1 Cấu trúc hoá học

- Công thức hoá học:

HNN

N

O

OHO

- Công thức phân tử: C8H11N5O3

- Khối lượng phân tử: 225,2

- Tên khoa học: purin-6-on[4], [5], [17].

2-amino-9-[(2-hydroxyethoxy)methyl]-1,9-dihydro-6H-1.2.2 Tính chất lý hoá

- Acyclovir (ACV) là dạng bột kết tinh màu trắng, khó tan trong nước, rấtkhó tan trong cồn, tan tự do trong dung môi dimethyl sulfoxid, tan đượctrong dung dịch kiềm và acid loãng

- Nhiệt độ nóng chảy khoảng 230oC, sau đó bị phân huỷ

- Các hằng số phân tích: ACV có 2 hằng số phân ly pKa1 = 2.47 ± 0,27 và pKa2 = 9,06 ± 0,88[4], [5], [6], [28].

1.2.3 Dược động học

- Hấp thu

+ Sinh khả dụng theo đường uống thấp, khoảng 20% (15 - 30%) Thức

ăn không ảnh hưởng đến hấp thu

+ Nồng độ đỉnh trong huyết tương đạt được sau khi uống là 1,5 - 2 giờ

- Phân bố

+ ACV được phân bố rộng rãi vào dịch cơ thể và các cơ quan khác nhưnão, thận, phổi, ruột, gan, lách, cơ, tử cung, niêm mạc, dịch âm đạo, nướcmắt, thuỷ dịch, tinh dịch, dịch não tuỷ Nồng độ trong dịch não tuỷ đạt tới50% nồng độ trong huyết tương

+ Liên kết với protein huyết tương thấp (9 - 33%)

+ Thuốc qua được rau thai và phân bố trong sữa với nồng độ gấp 3 lầntrong huyết thanh mẹ

- Chuyển hoá và thải trừ

+ Phần lớn thuốc được đào thải qua thận dưới dạng biến đổi 9-carboxymethoxy methyl guanine là chất chuyển hoá đáng kể duy nhất của ACV,chiếm khoảng 14% tổng lượng thuốc thấy trong nước tiểu

+ Thời gian bán thải

Người lớn: ~3 giờ.

Trẻ em: 2 - 3 giờ

Trẻ sơ sinh: 4 giờ

Bệnh nhân suy thận mạn: 19,5 giờ[3], [6]

1.2.4 Tác dụng dược lý

- ACV là một chất tương tự nucleosid, có tác dụng chọn lọc trên tế bàonhiễm virus herpes simplex typ 1 (HSV-1) và kém hơn ở herpes simplextyp 2 (HSV-2), virus varicella zoster (VZV)

- Để có tác dụng ACV phải được phosphoryl hoá, lần một dothymidinkynase đặc hiệu của virus HSV tạo ra dẫn xuất monophosphat, lầnthứ 2 và lần thứ 3 do các enzyme của tế bào vật chủ tạo thành dẫn xuấtdiphosphat và triphosphat Ái lực của HSV thimidinkynase mạnh gấp 200lần so với enzyme của tế bào vật chủ nên ACV được hoạt hoá hầu nhưchọn lọc trong các tế bào nhiễm HSV ACV triphosphat ức chế tổng hợpAND virus và sự nhân lên của virus mà không ảnh hưởng đến chuyển hoácủa tế bào bình thường[3], [6]

1.2.5 Chỉ định

- Dự phòng và điều trị các bệnh do nhiễm virus HSV-1 và HSV-2 ở da vàniêm mạc

- Điều trị nhiễm herpes zoster cấp tính ở mắt, phổi, thần kinh

- Điều trị khởi đầu và tái phát nhiễm herpes sinh dục

- Dự phòng và điều trị nhiễm virus ở người suy giảm miễn dịch, bệnh thuỷđậu[3], [6]

1.2.6 Liều dùng

- Người lớn: 200 mg/lần × 5 lần/ngày

- Người suy giảm miễn dịch: 400 mg/lần × 5 lần/ngày

- Trẻ em dưới 2 tuổi: nửa liều người lớn

- Trẻ em trên 2 tuổi: bằng liều người lớn.

- Bệnh nhân suy thận: hiệu chỉnh theo độ thanh thải creatinin (Clcr)[3], [6]

1.2.7 Chống chỉ định

- Bệnh nhân mẫn cảm với thuốc[3], [6]

1.2.8 Thận trọng

- Bệnh nhân suy thận, phụ nữ có thai, cho con bú

- Tiêm truyền tĩnh mạch chậm để tránh tủa ACV trong thận[3], [6]

1.2.9 Tác dụng không mong muốn

- Buồn nôn, tiêu chảy, đau bụng, nổi loạn, các phản ứng về thần kinh:chóng mặt, ảo giác, buồn ngủ

- Đường tiêm truyền tĩnh mạch có thể gặp các phản ứng như viêm, viêmtĩnh mạch ở vị trí tiêm

- Kem bôi có thể gặp cảm giác nóng bỏng hay nhói nhẹ ở vị trí kem bôikèm theo ban đỏ nhẹ[3], [6]

1.2.10 Tương tác thuốc

- Dùng đồng thời zidovudin, ACV có thể gây trạng thái ngủ lịm và lơ mơ

- Probenecid ức chế cạnh tranh đào thải ACV qua ống thận nên làm tăngthời gian bán thải của ACV và giảm thải trừ qua nước tiểu

- Interferon làm tăng tác dụng chống virus in vitro của ACV Thận trọngvới người bệnh trước đây đã có phản ứng thần kinh với interferon

- Amphotericin B và ketoconazol làm tăng hiệu lực chống virus củaACV[3], [6]

1.3.11 Một số chế phẩm của ACV trên thị trường

- Viên nén: Apo - Acyclovir, Cyclovir, Herpevir, Herpex, Medovir, Vacrax

200 mg, Acyclovir stada, Zovirax 200 mg, 400 mg, 800 mg

- Lọ bột pha tiêm: Zovirax 200 mg/5 ml

- Thuốc mỡ dùng ngoài Zovirax 5%, thuốc mỡ tra mắt Zovirax 3%

- Dịch truyền: Zovirax tiêm tĩnh mạch.

- Cream bôi ngoài da: Acyclovir stada 5%

- Viên phân tán: Zovirax 200 mg, 400 mg, 800 mg

- Viên tác dụng kéo dài: Genvir 600 mg[12]

1.3.12 Một số phương pháp định lượng ACV trong chế phẩm bào chế

+ D Paraskevas Tzanavaras và cộng sự đã nghiên cứu định lượngđồng thời ACV và tạp chất của nó là guanin trong các chế phẩm bào chế[38]

- Sử dụng máy HPLC Hewlett Packard (HP 1100)

- Cột monolithic RP-18e (100 mm x 4,6 mm), nhiệt độ cột: 25°C

- Pha động: acid acetic 0,2% (v/v)

- Dung dịch chuẩn: Dung dịch ACV chuẩn có nồng độ 1000 mg/l Dung dịch guanine chuẩn có nồng độ 100 mg/l

- Dung dịch thử: có nồng độ tương ứng với dung dịch chuẩn

- Detector quang phổ tử ngoại có λ=254 nm

- Dung dịch pha loãng: trộn acetonitril với nước theo tỷ lệ 40:60

- Dung dịch chuẩn và dung dịch thử: có nồng độ 198 µg/ml

Để xây dựng đường chuẩn của ACV trong nước cất: pha một dãydung dịch có nồng độ 2-20 µg/ml từ dung dịch chuẩn, đem đo độ hấp thụtại λ=253nm Từ kết quả đo được vẽ được đường chuẩn và rút ra đượcphương trình hồi quy [40]

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ TRANG THIẾT BỊ

2.1.1 Nguyên vật liệu

Nguyên vật liệu sử dụng trong nghiên cứu được ghi trong bảng 2.1

Bảng 2.1: Danh mục các nguyên vật liệu

Polyvinyl pyrolidon

2.1.2 Thiết bị

- Máy dập viên tâm sai KORSCH EKO – Đức

- Máy thử độ rã ERWEKA ZT4 – Đức

- Máy thử độ cứng ERWEKA – Đức

- Máy thử độ hoà tan ERWEKA DT600 – Đức.

- Máy xác định độ mài mòn PHARMA TEST - Ấn Độ

- Máy đo độ trơn chảy của hạt và bột ERWEKA GWF – Đức

- Máy siêu âm Ultrasonic LC 60H – Trung Quốc

- Máy đo quang phổ UV - VIS U1800 HITACHI – Trung Quốc

- Máy HPLC Waters – Mỹ

- Tủ vi khí hậu WTB Binder – Mỹ

- Cân kỹ thuật Sartorius TE412

- Cân phân tích Precisa XB 220A

- Cân xác định độ ẩm nhanh Sartorius

- Rây các cỡ: 180μm, 1000μm, 800μm

- Các dụng cụ thí nghiệm khác: Đũa thuỷ tinh, cối sứ,

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1 Phương pháp xây dựng đường chuẩn acyclovir

- Môi trường: Dung dịch HCl 0,1 N.

- Tiến hành:

+ Pha dung dịch HCl 0,1 N

+ Cân chính xác một lượng khoảng 100 mg acyclovir, hoà tan với 80 mlHCl 0,1 N, siêu âm khoảng 1 giờ, thêm HCl 0,1 N vừa đủ 100 ml dungdịch Sau đó pha loãng thành các dung dịch có nồng độ lần lượt 2, 4, 6,8,10, 12, 14 μg/ml Đem đo mật độ quang của các dung dịch trên ở bướcsóng 252 nm

+ Từ kết quả thu được, xây dựng phương trình hồi quy thực nghiệm, vẽ

đồ thị biểu diễn sự tương quan giữa mật độ quang và nồng độ dược chất

2.2.2 Phương pháp bào chế viên phân tán chứa acyclovir

Viên nén tự phân tán acyclovir được bào chế theo phương pháp xáthạt ướt phối hợp với dập thẳng, mỗi mẫu 100 viên với các thành phần nhưsau

Acyclovir 200 mg TDDT thay đổi TDSR thay đổi TDĐ thay đổi vđ 360 mg Natri saccarin 0,9 mg

Magnesi stearat 1,8 mg PVP 10%/EtOH 10 ml/100 viên

- Các yếu tố cố định: Acyclovir 200 mg, tá dược trơn 1,8 mg

magnesi stearat, 0,9 mg natri saccarin, 10 ml dung dịch PVP 10%/EtOH96%, khối lượng viên 360 mg ( không kể tá dược dính)

- Các yếu tố thay đổi: Tỷ lệ và chủng loại các loại tá dược siêu rã, tá

dược dập thẳng, tá dược độn

Các bước bào chế:

- Chuẩn bị nguyên liệu: Tất cả các nguyên liệu và dược chất được

rây qua rây 250 μm

- Trộn bột kép: ACV và manitol sau khi rây ở trên được trộn đều với

nhau trong cối sứ theo nguyên tắc trộn bột kép

- Tá dược dính: Hoà tan PVP trong cồn 96% với tỷ lệ 10%

- Tạo hạt: Hỗn hợp bột kép ở trên đem trộn đều với tá dược dính sau đó

xát hạt qua rây 1 mm, sấy se hạt ở 50oC trong 15 phút, sửa lại hạt qua rây0,8 mm và sấy tiếp hạt đến độ ẩm đạt từ 2 - 3% ( trong khoảng 2-3 giờ)

- Dập viên: Hạt sau khi sấy đạt độ ẩm được đem trộn với tá dược rã

ngoài, tá dược dập thẳng, tá dược trơn, tá dược điều vị Dập viên bằng máy

dập viên tâm sai KORSCH với chày bằng, đường kính chày Ф = 10 mm,khối lượng viên 360 mg, độ cứng 7 - 9 kP.

Sau khi dập viên, viên được bảo quản trong lọ kín, để ổn định trong

24 - 48 giờ rồi tiến hành các thí nghiệm tiếp theo

2.2.3 Phương pháp đánh giá tốc độ trơn chảy của khối hạt và hỗn hợp bột (gọi chung là hạt)

- Nguyên tắc: Đo tốc độ trơn chảy của khối hạt khi cho chảy qua một phễu

có đường kính lỗ phễu xác định lên một đĩa cân và ghi lại khối lượng hạttheo thời gian Nếu hạt chảy đều, đồ thị khối lượng hạt - thời gian là đườngthẳng, nếu không thì có hình dạng bất thường

v: tốc độ trơn chảy (g/giây).

α: góc giữa đường thẳng biểu diễn sự phụ thuộc của khối lượng hạtchảy theo thời gian và trục thời gian

2.2.4 Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng viên phân tán

2.2.4.1.Độ cứng

Xác định bằng máy đo độ cứng ERWEKA, thử với 6 viên lấy giá trịtrung bình

2.2.4.2 Độ mài mòn

- Nguyên tắc: Cân số viên chính xác khoảng 6,5 gam đã được loại hết bột

cho vào thiết bị quay trong thời gian thích hợp Lấy viên ra, sàng bột vàcân Độ mài mòn là phần trăm khối lượng bị giảm đi so với khối lượng banđầu

- Tiến hành:

+ Cân số viên chính xác khoảng 6,5 gam (m 1), làm sạch bụi

+ Cho vào trống quay của máy PHARMA TEST, cho máy quay 100vòng

+ Sàng viên qua rây 2000, cân lại khối lượng viên (m 2)

- Kết quả: Độ mài mòn được tính theo công thức:

X =

1

2 1

Được tiến hành theo 2 phương pháp:

- Phương pháp 1: Ghi trong mục 1.1.4.1, dùng máy thử độ rã ERWEKA

ZT4, yêu cầu viên phân tán phải rã trong vòng 3 phút

- Phương pháp 2: Ghi trong mục 1.1.4.2, dùng máy thử hoà tan ERWEKA

DT600 có thêm bộ phận giỏ đựng viên thuốc

2.2.4.5 Thời gian thấm ướt(hình2 1)

Hình 2.1: Dụng cụ đo thời gian thấm ướt

Đặt 5 tờ giấy lụa hình tròn đường kính 10 cm vào đĩa Petri đườngkính trong 10 cm Thêm 10 ml dung dịch xanh methylen 0,1% kl/tt vào đĩaPetri Đặt nhẹ nhàng viên thuốc lên bề mặt của giấy lụa Thời gian thấmướt được tính là khoảng thời gian từ lúc bắt đầu đặt viên thuốc đến khixanh methylen nhuộm màu hết bề mặt của viên Mỗi mẫu làm 3 lần lấy kếtquả trung bình

2.2.4.6 Độ đồng đều phân tán

Theo chuyên luận về “dispersible tablets” ghi trong BP Cho 2 viênvào 100 ml nước cất và khuấy đến khi hoàn toàn phân tán Độ phân tán đạtyêu cầu khi cho dung dịch phân tán chảy qua hết lỗ rây có kích thước 710μm

2.2.4.7 Độ hoà tan

Theo DĐVN IV, phụ lục 11.4

- Điều kiện:

+ Thiết bị: Kiểu cánh khuấy

+Môi trường hoà tan: 900 ml dung dịch HCl 0,1 N

+ Tốc độ khuấy: 50 vòng/phút

+ Nhiệt độ: 37 ± 0,5oC

+ Thời gian: 45 phút.

- Tiến hành: Định lượng acyclovir hoà tan bằng đo độ hấp thụ tử ngoại của

dịch hoà tan ở bước sóng hấp thụ cực đại 252 nm sau khi lọc, có thể phaloãng với dung dịch HCl 0,1 N và so sánh với dung dịch chuẩn đã biếtnồng độ của acyclovir trong cùng môi trường Mẫu trắng là dung dịch HCl0,1 N

- Yêu cầu: Không được ít hơn 70% lượng acyclovir, C8H11N5O3, so vớilượng ghi trên nhãn được hoà tan trong 45 phút

2.2.5 Định lượng acyclovir trong viên phân tán

Hàm lượng acyclovir trong viên phân tán được xác định bằng 2phương pháp: Đo độ hấp thụ tử ngoại và định lượng bằng HPLC theo USP30

* Đo độ hấp thụ tử ngoại

- Tiến hành:

+ Mẫu thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình m v, nghiền thành bột

mịn rồi cân m b (mg) bột (tương đương 10 mg acyclovir), cho vào bình địnhmức 100 ml, thêm tiếp 80 ml HCl 0,1 N, lắc đều Siêu âm 20 phút, thêmdung dịch HCl 0,1 N tới vạch 100 ml, lắc đều, lọc qua giấy lọc mịn, loại bỏ

20 ml dịch lọc đầu Dịch lọc được pha loãng 10 lần bằng HCl 0,1 N Đo độhấp thụ tử ngoại của dịch pha loãng ở bước sóng 252 nm, thu được kết quả

D t

+ Mẫu chuẩn: Cân chính xác 10 mg acyclovir chuẩn (m c) cho vào bìnhđịnh mức 100 ml, rồi xử lý giống như mẫu thử trong cùng điều kiện Đo độhấp thụ tử ngoại của dịch pha loãng ở bước sóng 252 nm, thu được kết quả

D c

+ Mẫu trắng: Dung dịch HCl 0,1 N

- Kết quả: Hàm lượng acyclovir trong viên phân tán được tính theo công

thức

H = D D m m m a

b c

c v t

a: khối lượng acyclovir có trong mỗi viên theo lý thuyết (mg).

H: hàm lượng acyclovir trong viên (%).

- Yêu cầu: Hàm lượng acyclovir, C8H11N5O3, từ 95,0 đến 105,0% so vớihàm lượng ghi trên nhãn

* Định lượng bằng HPLC theo USP 30

* Chuẩn bị dung dịch 2:

Hòa tan chính xác khoảng 50mg guanin bằng DD NaOH 0,1N trongbình định mức 50ml được DD có nồng độ khoảng 1mg/ml Hút chính xác1ml dung dịch trên vào bình định mức 50ml, hòa loãng với nước vừa đủđến vạch, được dung dịch có nồng độ khoảng 20mcg/ml Hút chính xác1ml dung dịch trên vào bình định mức 10ml, hòa loãng với nước vừa đủđến vạch, được dung dịch có nồng độ khoảng 2mcg/ml