ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.5. Định lượng acyclovir trong viờn phõn tỏn
Hàm lượng acyclovir trong viờn phõn tỏn được xỏc định bằng 2 phương phỏp: Đo độ hấp thụ tử ngoại và định lượng bằng HPLC theo USP 30.
* Đo độ hấp thụ tử ngoại
- Tiến hành:
+ Mẫu thử: Cõn 20 viờn, tớnh khối lượng trung bỡnh mv, nghiền thành bột mịn rồi cõn mb (mg) bột (tương đương 10 mg acyclovir), cho vào bỡnh định mức 100 ml, thờm tiếp 80 ml HCl 0,1 N, lắc đều. Siờu õm 20 phỳt, thờm dung dịch HCl 0,1 N tới vạch 100 ml, lắc đều, lọc qua giấy lọc mịn, loại bỏ 20 ml dịch lọc đầu. Dịch lọc được pha loóng 10 lần bằng HCl 0,1 N. Đo độ hấp thụ tử ngoại của dịch pha loóng ở bước súng 252 nm, thu được kết quả
Dt.
+ Mẫu chuẩn: Cõn chớnh xỏc 10 mg acyclovir chuẩn (mc) cho vào bỡnh định mức 100 ml, rồi xử lý giống như mẫu thử trong cựng điều kiện. Đo độ hấp thụ tử ngoại của dịch pha loóng ở bước súng 252 nm, thu được kết quả
Dc.
- Kết quả: Hàm lượng acyclovir trong viờn phõn tỏn được tớnh theo cụng thức H = DD mm ma b c c v t ì ì ì ì ì100 % Trong đú:
a: khối lượng acyclovir cú trong mỗi viờn theo lý thuyết (mg). H: hàm lượng acyclovir trong viờn (%).
- Yờu cầu: Hàm lượng acyclovir, C8H11N5O3, từ 95,0 đến 105,0% so với
hàm lượng ghi trờn nhón.
* Định lượng bằng HPLC theo USP 30
* Pha động:
Chuẩn bị dung dịch 0,02M acid acetic (được lọc và loại khớ). Thực hiện sự điều chỉnh nếu cần.
* Chuẩn bị dung dịch 1:
Hũa tan chớnh xỏc khoảng 50mg acyclovir RS và 50mg guanine bằng DD NaOH 0,1N trong bỡnh định mức 50ml được DD cú nồng độ khoảng 1mg/ml. Hỳt chớnh xỏc 1ml dung dịch trờn vào bỡnh định mức 10ml, hũa loóng với nước vừa đủ đến vạch, được dung dịch cú nồng độ khoảng 0,1mg/ml từng chất.
* Chuẩn bị dung dịch 2:
Hũa tan chớnh xỏc khoảng 50mg guanin bằng DD NaOH 0,1N trong bỡnh định mức 50ml được DD cú nồng độ khoảng 1mg/ml. Hỳt chớnh xỏc 1ml dung dịch trờn vào bỡnh định mức 50ml, hũa loóng với nước vừa đủ đến vạch, được dung dịch cú nồng độ khoảng 20mcg/ml. Hỳt chớnh xỏc 1ml dung dịch trờn vào bỡnh định mức 10ml, hũa loóng với nước vừa đủ đến vạch, được dung dịch cú nồng độ khoảng 2mcg/ml.
* Dung dịch chuẩn:
Hũa tan chớnh xỏc khoảng 50mg acyclovir tinh khiết bằng DD NaOH 0,1N trong bỡnh định mức 50ml được DD cú nồng độ khoảng 1mg/ml. Hỳt chớnh xỏc 1ml dung dịch trờn, hũa loóng với nước trong bỡnh định mức 10ml, được dung dịch cú nồng độ khoảng 0,1mg/ml.
* Mẫu thử:
Cân 20 viên. Xác định khối lợng trung bình viên. Nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lợng bột viên tương đương với khoảng 10mg acyclovir vào bỡnh định mức 100ml, thờm 10ml DD NaOH 0,1N, siờu õm trong 10 phỳt và thờm nước vừa đủ đến vạch, trộn, lọc qua màng lọc 0,45àm.
* Quy trỡnh sắc ký:
Tiờm riờng từng 20mcl dung dịch chuẩn và dung dịch thử vào hệ thống sắc ký, ghi lại sắc ký đồ, và đo diện tớch peak. Tớnh lượng acyclovir (mg) theo cụng thức:
m = 100 x C x (ru/rs)
Trong đú: C là nồng độ mg/ml của dung dịch chuẩn;
ru và rs lần lượt là diện tớch peak cú được từ dung dịch mẫu thử và dung dịch chuẩn.
* Hệ thống sắc ký:
- Điều kiện sắc ký:
Detector: 254nm; cột 4,6x25cm; chứa hạt RP-C18, đường kớnh từ 1,5 – 10 mcm;
Nhiệt độ cột: 400C; Tốc độ dũng 1,5ml/phỳt.
- Tiến hành sắc ký dung dịch 1 và ghi lại diện tớch peak của acyclovir. - Tiến hành sắc ký dung dịch 2 và ghi lại diện tớch peak của guanin.