- Ảnh hưởng của ion kim loại lên hoạt tính lectin hạt Đậu ma
3.4.2.1. Sắc kí qua cột trao đổi ion DE-52 Cellulose
Thu dịch chiết lectin thô của cây Tú cầu đỏ bằng cách nghiền mẫu trong đệm Tris-HCl 20 mM pH 8,3 với tỉ lệ 1/10, khuấy từ 2h ở 40C, ly tâm 12 000 vòng/phút ở 40C trong 10 phút.
Cho 10 ml dịch chiết lectin thô lên cột sắc ký trao đổi ion DE-52 Cellulose. Phần lectin không gắn trên cột đƣợc rửa ra bằng đệm PB 0,02 M pH 7,4 với tốc độ 15 ml/h. Phần lectin gắn trên cột đƣợc đẩy ra bằng gradient nồng độ NaCl từ 0 – 1 M trong đệm glycin 0,05 M, pH 2,6 với tốc độ chảy 15 ml/h, tiến hành thu các phân đoạn. Kết quả cho thấy sau q trình sắc kí đã thu đƣợc 29 phân đoạn, mỗi phân đoạn 3 ml.
Sau đó từng phân đoạn thu nhận đã đƣợc kiểm tra hoạt tính ngƣng kết hồng cầu ngƣời và đo hàm lƣợng protein. Kết quả tinh chế lectin thân hành cây Tú cầu đỏ đƣợc thể hiện Hình 3.19.
Kết quả tại Hình 3.19 cho thấy dịch chiết thô Tú cầu đỏ sau khi đƣợc sắc ký qua cột DE - 52 Celulose cho 3 đỉnh có hàm lƣợng protein cao nhất, trong đó đỉnh P có hàm lƣợng protein cao nhƣng hoạt độ lectin lại thấp. Hai đỉnh L1 và L2 vừa có hàm lƣợng protein cao vừa có hoạt độ lectin cao, trong đó đỉnh L1 có hoạt độ lectin cao hơn nên đƣợc chọn làm đỉnh lectin chính và đƣợc gọi là chế phẩm Tú cầu đỏ 1. Chế phẩm này sau đó đƣợc kiểm tra độ tinh sạch bằng phƣơng pháp điện di biến tính (SDS-PAGE).
119
Hình 3.19. Sắc kí đồ cột DE - 52 Cellulose của dịch chiết thô Tú cầu đỏ
Chú thích: Kích thước cột 1,5 cm x 20 cm, thể tích lên cột 10 ml, đệm gắn Tris - HCl 0,02 M- pH 8.3, phản hấp phụ bằng gradient
NaCl 0 – 1 M, tốc độ chảy 15 ml/ h, thể tích mỗi phân đoạn 3 ml.