IV. ENZYM TRONG TRAO ðỔ IL ƯU HUỲNH
2. Xác ñị nh sinh khối cacbon của vi sinh vật ñấ t * Nguyên tắc
2.2.4. Xác ñịnh cacbon sinh khối vi sinh vật bằng phân tích cacbon theo
phương pháp quang phổ
* Nguyên tắc
Với sự có mặt của kali persunphat (K2S2O8), cacbon hữu cơ chiết ñược của ñất bị oxy hoá thành cacbon dioxit và lượng cacbon dioxit ñược ño bằng phổ (IR) và (UV).
- Thuốc thử bổ sung
+ Kali persunphat (K2S2O8.). + Axit photphoric.
+ Natri polyphosphat [(NaPO3)m], rất tinh khiết
- Thuốc thử Kali persunphat: Hoà tan 20 g kali sunphat trong 90 ml nước cất, dùng axit phosphoric ñiều chỉnh pH của dung dịch bằng 2 và sau ñó cho nước cất vừa ñủ ñến 1000ml.
- Thuốc thử natri polyphosphat: Hoà tan 50 g natri polyphosphat trong 90 ml nước cất, dùng axit phosphoric ñiều chỉnh pH của dung dịch trên ñến 2 sau ñó thêm nước cất ñến 1000ml
- Thiết bị bổ sung
+ Máy phân tích cacbon tự ñộng với bộ phát hiện hồng ngoại hoặc với hệ thống dòng liên tục với ñầu ño so màu.
Trong tiêu chuẩn này việc xác ñịnh cacbon sinh khối vi sinh vật dựa trên cơ sở oxy hoá cacbon hữu cơ bằng persunphat ñược hoạt hoá tia cực tím.
- Cách tiến hành
ðối với phương pháp oxy hoá tự ñộng bằng persunphat – tia cực tím, trộn 5ml phần chiết từ ñất bằng dung dịch kali sunphat với 5 ml thuỗc thử natri polyphosphat. Bất kỳ kết tủa nào của CaSO4 ñều ñược hoà tan trong quá trình này. Thuốc thử kali persunphat ñược ñưa một cách tự ñộng vào buồng oxy hoá UV, ở ñây sự oxy hoá thành CO2 ñược thực hiện bằng tia cực tím. CO2 ñược tạo thành ñược ño bằng hấp thụ hồng ngoại hay bằng quang phổ UV.
2.2.5. Tính toán kết quả
- Tính lượng cacbon hữu cơ chiết ñược (C) theo công thức (4):
C (g/g ñất khô) = [(V x DV) – (B x DV)] x (Pk/ Dw + Sw) …(4) Trong ñó:
V: C(g/ ml) của mẫu B: C(g/ ml) của mẫu trắng
DV: ðộ pha loãng của mẫu bằng natri phosphat (ml) DB: ðộ pha loãng của mẫu trắng bằng natri phosphat (ml) PK : Khối lượng dung môi chiết (g)
DW: Khối lượng ñất khô (g)
SW : Nước trong ñất (g nước/ g ñất khô) - Tính lượng sinh khối BC sử dụng công thức:
BC = Ec/kEC (5) Trong ñó:
EC = (cácbon hữu cơ chiết ñược từ ñất xông hơi) – (cácbon hữu cơ chiết ñược từ ñất không xông hơi)
KEC = 0,35
Hệ số KEC ñược tính từ mối liên quan giữa kết quả của phương pháp ủ xông hơi và kết quả của phương pháp chiết – xông hơi (23 loại ñất)
Có thể sử dụng phương pháp chiết - xông hơi kết hợp với phương pháp nghiên cứu phân huỷ của các chất hữu cơ ñánh dấu 14C.
* Qui trình chiết sơ bộ với ñất có chứa nhiều rễ cây sống
Cho ñất ẩm (25 ñến 50 g khối lượng khô) vào bình thuỷ tinh 250 ml có chứa 100 ml dung dịch kali sunphat ñể chiết trong vòng 20 phút trên máy lắc và sàng (ñối với ñất canh tác kích thước lỗ là 2mm, còn ñối với ñất ñồng cỏ là 3mm). Rửa thật sạch rễ cây (và hạt ñá nhỏ) trên sàng bằng 75 ml dung dịch kali sunphat bổ sung thêm và sấy khô, cân chúng. Ly tâm khoảng 500 g huyền phù gồm ñất và dung dịch kali sunphat trong bình thuỷ tinh trong 15 phút. Sau ñó chắt nước lọc phía trên. Cho thêm 3 giọt cloroform vào ñất ñể xông hơi. Qui trình như trên.
Nếu có các rễ cây sống trong ñất thì nhất thiết phải sử dụng qui trình trên. Hơn nữa, qui trình nay tạo cho việc ño nitơ sinh khối vi sinh vật dễ dàng hơn bằng việc giảm nitơ vô cơ nền có trong ñất. Nó còn giảm những khó khăn khi ño sinh khối vi sinh vật trong ñất khô và vì vậy rất tiện lợi cho việc ño sự dao ñộng của cacbon sinh khối vi sinh vật ñất và nitơ trong năm. Sinh khối vi sinh vật ño ñược không bị chiết tách ra khỏi ñất bằng qui trình chiết sơ bộ này.