VI SINH VẬT TRONG MÔI TRƯỜNG M ục ñích yêu cầu:
3.Quá trình cố ñị nh nitơ phân tử
3.1. Vật liệu
ðĩa petri chứa môi trường thạch nấm men-manitol Xanh methylen, dao lam, cây họ ñậu
3.2. Thủ tục tiến hành
- Cắt 1 nốt sần từ rễ cây ñậu ñỗ và rửa sạch dưới vòi nước chảy. Quan sát nốt sần.
- Cắt nốt sần thành 2 nửa bằng dao lam. Quan sát bên trong. Nghiền nốt sần giữa 2 lam kính và tạo vết bôi bằng cách quay 2 lam kính với nhau.
- Cấy ria 1 vòng que cấy dịch nghiền trên môi trường thạch. Nuôi ở nhiệt ñộ phòng khoảng 7 ngày.
- Làm khô trong không khí lam kính có vết bôi và cố ñịnh lại bằng nhiệt. Nhuộm tiêu bản trong 1 phút bằng xanh methylen. Rửa và quan sát dưới vật kính dầu.
- Quan sát sự sinh trưởng của vi khuẩn trên ñĩa. Nhuộm ñơn bằng xanh methylen. So sánh hình thái vi khuẩn trên tiêu bản với tiêu bản ñã chuẩn bị sẵn từ nốt sần.
* Câu hỏi ôn tập: Bài số 13
1 Cơ chế của từng quá trình cốñịnh, chuyển hóa nitơ?
2. Phương pháp lập lập, ñánh giá hiệu quả của quá trình chuyển hóa nitơ dưới tác dụng của VSV?
3. Kết quả phân tích, tính toán hiệu quả của quá trình chuyển hóa nitơ dưới tác dụng của VSV?
Bài số 14
CHUYỂN HOÁ LƯU HUỲNH DƯỚI TÁC DỤNG CỦA VI SINH VẬT Mục ñích và yêu cầu: Mục ñích và yêu cầu:
+ Hiểu ñược vai trò của VSV trong việc ñảm bảo vòng tuần hoàn lưu huỳnh. + Vẽ biểu ñồ vòng tuần hoàn lưu huỳnh xảy ra trong cột Vinogradskii.
Nội dung kiến tập:
+ Quan sát sự sinh trưởng của vi khuẩn chuyển hoá lưu huỳnh trong cột Vinogradskii.
1. Nguyên lý chung
Một trong những hướng nghiên cứu vi sinh vật ñất là vòng tuần hoàn lưu huỳnh. Vi khuẩn lam và màu tía tham gia vào vòng tuần hoàn sinh hoá lưu huỳnh. Mặc dù sắc tố quang hợp của vi khuẩn lam ñược quyết ñịnh bởi sắc tố vi khuẩn , chúng vẫn có thể xuất hiện màu nâu do sự có mặt thêm của sắc tố quang hợp màu ñỏ gọi là carotenoit. Vi khuẩn quang hợp màu tía xuất hiện màu tía hoặc ñỏ bởi vì có số lượng lớn carotenoit. Vi khuẩn màu tía cũng có sắc tố vi khuẩn.
Vi khuẩn quang hợp sử dụng sắc tố ñể sinh ra ñiện tử cho tổng hợp ATP và sử dụng lưu huỳnh, các hợp chất chứa lưu huỳnh, khí hydro hoặc các phân tử hữu cơ là nguồn cung cấp ñiện tử. Phương trình tổng quát cho quang hợp ở vi khuẩn là:
CO2 + H2S Bacteriocholorophyll C6H12O6 + S-2
cung cấp ñiện tử trong quá trình quang hợp, kết quả là tạo ra sulphat. Trong tự nhiên, sunfit hydro ñược sinh ra từ sự biến ñổi sulphat trong hô hấp yếm khí và sự phân rã các amino axit có chứa lưu huỳnh. Sunphat có thể bị biến ñổi thành sunphit hydro bởi 5 giống vi khuẩn chuyển hoá sunphát (rõ nhất là
Desulfovibrio). CO2 mà vi khuẩn quang hợp sử dụng ñược cung cấp bởi quá trình lên men hydratcacbon trong môi trường yếm khí.
Kỹ thuật nuôi cấy làm giàu bao gồm phương thức tái tạo môi trường ñược gọi là cột Vinogradsky sẽ ñược dùng cho bài tập này. Chúng ta sẽ sử dụng nó ñể tăng cường sự sinh trưởng của vi khuẩn chuyển hoá lưu huỳnh trong ñiều kiện yếm khí. Một vài loại vi sinh vật ñược nuôi cấy phụ thuộc vào sự phản ứng với ánh sáng và oxy sẵn có của chúng.
2. Vật liệu
Hỗn hợp bùn (bùn, CaCO3, cỏ khô hay giấy và CaSO4) ống nghiệm to hoặc ống ñong
Que gạt Bùn ñất
ðệm Vinogradsky (NH4Cl, Na2S, KH2PO4, K2HPO4) Giấy nhôm, nguồn sáng
3. Dịch nuôi cấy
Pseudomonas aecruginosa
4. Thủ tục tiến hành (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
a. Xếp chặt hỗn hợp bùn ñến 2/3 chiều cao của một ống nghiệm lớn hoặc ống ñong. Xếp chặt ñể hạn chế bọt khí trong ống.
b. Cẩn thận xếp một lớp mỏng bùn ñất lên trên cùng của lớp hỗn hợp bùn ñầu tiên.
c. Nhẹ nhàng ñổ dung dịch ñệm xuống cạnh của ống ñong, chú ý không làm xáo trộn bề mặt bùn. ðổ ñầy ống ñong ñến mức có thể.
d. ðậy miệng ống bằng giấy nhôm và ñặt ở phía trước một nguồn sáng. Người hướng dẫn có thể ấn ñịnh các nguồn sáng khác nhau (ví dụ như ánh sáng nóng, huỳnh quang, ñỏ hoặc xanh).
e. Quan sát ống thí nghiệm mỗi tuần một lần trong 4 tuần. Ghi lại sự xuất hiện các khu vực màu sắc. Bùn hảo khí sẽ có màu hơi nâu và bùn yếm khí có màu ñen. (Hình…).
g. Sau 4 tuần, chuẩn bị tiêu bản giọt treo từ các vết xanh hoặc tím trong ống. Quan sát dưới kính hiển vi sự xuất hiện của vi khuẩn và xem có các hạt lưu huỳnh hay không?
* Câu hỏi ôn tập: Bài số 14
1 Cơ chế của từng quá trình cốñịnh, chuyển hóa lưu huỳnh?
2. Phương pháp lập lập, ñánh giá hiệu quả của quá trình chuyển hóa lưu huỳnh dưới tác dụng của VSV?
3. Kết quả phân tích, tính toán hiệu quả của quá trình chuyển hóa S dưới tác dụng của VSV?
Bài số 15
VI SINH VẬT PHÂN GIẢI LÂN (PHOSPHO) Mục ñích và yêu cầu: