III. MÔI TRƯỜNG CHUYÊN TÍNH
2. Trao ñổ i Protein
Protein là các phân tử hữu cơ chứa cacbon, hydro, oxy và nitơ; một vài loại protein cũng chứa lưu huỳnh. Các đơn vị phụ tạo nên protein được gọi là amino axit. Amino axit gắn chặt với nhau bởi liên kết peptit, hình thành nên một chuỗi nhỏ (peptit) hoặc một phân tử lớn (polypeptit).
VSV cĩ thể thuỷ phân peptit hoặc polypeptit để giải phĩng ra các amino axit. Chúng sử dụng các amino axit là nguồn cacbon và năng lượng khi hydratcacbon khơng cĩ sẵn. Tuy nhiên, amino axit được sử dụng trước tiên trong các phản ứng đồng hố.
Các phân tử protein lớn như gelatin, được thuỷ phân bởi enzim ngoại bào và các sản phẩm nhỏ hơn của sự thuỷ phân được chuyển vận vào trong tế bào. Sự thuỷ phân gelatin cĩ thể được chứng minh bằng sự sinh trưởng của vi khuẩn trong dinh dưỡng gelatin. Dinh dưỡng gelatin được làm tan trong nước ấm (50oC), đơng lại (tạo gel) khi được làm lạnh dưới 25oC và hố lỏng (tạo sol) khi gia nhiệt đến khoảng 25oC. Khi một enzim ngoại bào thuỷ phân gelatin sẽ làm
Một số vi khuẩn cĩ thể thuỷ phân protein trong sữa được gọi là cazein. Sự thuỷ phân cazein cĩ thể được xác định trong sữa cĩ giấy quỳ. Sữa giấy quỳ chứa đục váng sữa và chỉ thị giấy quỳ. Mơi trường bị mờ đục, do cazein ở dạng keo huyền phù và giấy quỳ cĩ màu xanh. Sau khi pepton hố (sự thuỷ phân các protein sữa), mơi trường trở nên trong là kết quả của sự thuỷ phân cazein thành các amino axit hồ tan và các mảnh peptit. Kết quả của sự dị hố các amino axit sẽ tạo ra một phản ứng alkan (màu tía). Sữa giấy quỳ cũng được sử dụng để xác định quá trình lên men lactoza, trong đĩ giấy quỳ chuyển màu hồng trong sự cĩ mặt của axit. Lượng axit thừa sẽ gây ra sự hố đơng (sự hình thành sữa đơng) sữa. Thêm vào đĩ, một số vi khuẩn cĩ thể làm biến đổi giấy quỳ làm cho chỉ thị giấy quỳ trở thành màu trắng ở dưới đáy của ống nghiệm.
Ure là một sản phẩm loại thải khĩ tiêu hố protein trong hầu hết các động vật cĩ xương sống và được bài tiết ở dạng urin. Sự cĩ mặt của enzim ureaza (giải phĩng NH3 từ ure) là một thử nghiệm chẩn đốn để xác định vi khuẩn. Thạch-ure chứa pepton, glucoza, ure và đỏ phenol. pH của mơi trường chuẩn bị là 6,8 (đỏ phenol chuyển thành vàng). Trong khi nuơi cấy, vi khuẩn chuyển hố ure sẽ sinh ra NH3 làm tăng pH của mơi trường, chuyển màu chỉ thị fuchine (hồng đậm) ở pH 8,4.
Chúng ta cĩ thể khảo sát hoạt động của vi khuẩn trên dinh dưỡng gelatin, sữa giấy quỳ và thạch-ure trong bài tập này.
2.1. Vật liệu
ống nghiệm chứa dinh dưỡng gelatin. ống nghiệm chứa sữa giấy quỳ
ống nghiệm thạch nghiêng chứa thạch -ure
2.2. Dịch nuơi cấy
Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris
2.3. Thủ tục, kỹ thuật yêu cầu
a. Dán nhãn mỗi mơi trường 1 ống nghiệm là Pseudomonas và 1 ống khác là Proteus.
b. Sự thuỷ phân gelatin. Xác định dinh dưỡng gelatin, ở dạng rắn hay lỏng? Nhiệt độ của phịng thí nghiệm là bao nhiêu? Nếu gelatin ở dạng rắn cần phải làm hố lỏng. Sau đĩ lại làm hố đơng.
- Sử dụng que cấy thẳng nhiễm vào một ống nghiệm Pseudomonas và một ống khác là Proteus.
- Nuơi ở nhiệt độ phịng và ghi lại sự quan sát ở 2-4 ngày và 4-7 ngày. Khơng lắc mạnh ống nghiệm khi gelatin ở dạng lỏng.
- Nếu gelatin đã hố lỏng, đặt ống nghiệm trong một cái cốc đá nghiền vài phút. Ghi lại kết quả chỉ rõ sự hố lỏng hoặc sự thuỷ phân bằng dấu (+).
- Nhiễm Pseudomonas vào một ống mơi trường, Proteus vào một ống mơi trường khác.
- Nuơi ở 35oC trong 24-48h và ghi lại kết quả. Giấy quỳ cĩ màu hồng trong điều kiện cĩ axit, màu tím trong điều kiện kiềm và màu trắng khi bị biến đổi. So sánh kết quả với những ống sữa giấy quỳ khơng nhiễm VSV.
d. Test thử ure
- Nhiễm Pseudomonas vào một ống mơi trường thạch nghiêng ure-agar và
Proteus vào ống khác.
- Nuơi ở 35oC trong 24-48h. Ghi lại kết quả: (+) cho sự cĩ mặt của ureaza (màu đỏ) và (-) cho các ống khơng cĩ ureaza.
- Sử dụng đỏ phenol và fuschine để xác định pH mơi trường sau nuơi cấy chứng tỏ hoạt động của vi khuẩn cĩ khả năng chuyển hố ure.
* Câu hỏi ơn tập: Bài số 10
1. Trình bày các tiêu trí để xác định nhanh khả năng chuyên hĩa các hợp chất của VSV?
2. Các loại thuốc thử, các test cho từng loại cơ chất mà VSV chuyển hĩa?
Bài số 11
VI SINH VẬT TRONG MƠI TRƯỜNG Mục đích yêu cầu: