VI SINH VẬT TRONG MÔI TRƯỜNG M ục ñích yêu cầu:
2.Nấm men (Yeasts)
Nấm thuộc loại tế bào eukaryota và có thể tồn tại dưới dạng ñơn hoặc ña bào. Chúng là loại dị dưỡng và lấy dinh dưỡng nhờ hấp thụ các vật chất hữu cơ hoà tan thông qua vách tế bào và màng nguyên sinh chất. Nấm (ngoại trừ nấm men) là VSV hảo khí. Nấm men ñơn bào, nấm mốc ña bào và các loài vĩ mô như nấm mũ thuộc giới nấm. Nấm thường ưa ñiều kiện axit, chịu áp suất cao và ñộ ẩm thấp hơn vi khuẩn. Chúng có kích thước tế bào và hình thái chi tiết lớn hơn vi khuẩn. Ngược lại với các ñặc trưng của vi khuẩn, các ñặc trưng cơ sở như chi tiết hình thái và tế bào ñược sử dụng ñể phân loại nấm, với sự tham dự chút ít của các ñặc trưng thứ cấp như trao ñổi chất và thành phần kháng nguyên. Nấm có cấu trúc phức tạp hơn vi khuẩn nhưng lại trao ñổi chất thay ñổi ít hơn.
Nấm men là loại nấm ñơn bào, không có thể hình sợi, có dạng hình cầu hoặc ovan ñiển hình. Nấm men ñược phân bố rộng rãi trong tự nhiên, thường tìm thấy trên hoa quả và lá cây như lớp phủ ngoài dạng bột màu trắng. Nấm men sinh sản vô tính bằng nảy chồi, là quá trình trong ñó một tế bào mới hình thành một u lồi (nảy chồi) từ tế bào mẹ. Trong nhiều trường hợp, các chồi không thể tự tách ra, một chuỗi ngắn các tế bào ñược gọi là dạng giả khuẩn ty. Khi nấm men sinh sản hữu tính, chúng có thể sinh ra một hoặc vài loại bào tử giới tính. Loại bào tử giới tính ñược sản xuất bởi một loài nấm men ñược sử dụng ñể phân loại như sự phân chia (ngành). Hoạt ñộng trao ñổi chất cũng ñược sử dụng ñể xác ñịnh các giống nấm men.
Nấm men là loại yếm khí không bắt buộc. Hoạt ñộng trao ñổi chất của chúng thường ñược sử dụng trong nhiều quá trình lên men công nghiệp. Nấm men thường ñược dùng ñể chuẩn bị nhiều loại thức ăn gồm có bánh mì, ñồ uống như rượu vang và bia.
Trong phòng thí nghiệm, môi trường lựa chọn thạch Sabouraud thường ñược sử dụng ñể phân lập nấm men. Thạch Sabouraud có các chất dinh dưỡng ñơn giản (glucoza và pepton) và pH thấp, hạn chế sự sinh trưởng của hầu hết các sinh vật khác. Rất nhiều kỹ thuật hữu ích với vi khuẩn có thể áp dụng với nấm men.
2.1. Vật liệu
ống lên men glucoza ống lên men saccharoza
ðĩa Petri chứa môi trường Sabouraud
Chai chứa môi trường cao nấm men -glucoza
Gạc bông khử trùng, lam kính, ống nghiệm, xanh methylen, bình cầu, hoa quả hoặc lá cây. 2.2. Dịch nuôi cấy Men bánh mì Rhodotorula rubra Candida albicans Saccharomyces cerevisiae 2.3. Thủ tục tiến hành 2.3.1. Nấm men
a. Nhẹ nhàng hoà một ít men bánh mì trong một ít nước ấm trong ống nghiệm ñể tạo ra dung dịch trắng ñục.
b. Mỗi cặp sinh viên sẽ sử dụng một loại dịch nuôi cấy nấm men và dịch men bánh mì
- Chia một ñĩa môi trường Sabouraud thành hai nửa. Ria cấy dịch nấm men ñã biết trên nửa môi trường và men bánh mì ở nửa còn lại.
- Nhiễm mỗi loại dịch VSV vào một ống lên men glucoza và một ống lên men saccharoza.
c. Nuôi tất cả các môi trường ở 35oC tới khi xuất hiện dấu hiệu sinh trưởng.
d. Nhỏ một giọt xanh methylen vào một ít mỗi loại dịch nuôi cấy. Ghi lại kết quả quan sát ñược.
e. Sau khi nấm men sinh trưởng, ghi lại kết quả. Kiểm tra dịch nấm men không nuôi cấy và xác ñịnh kết quả.
2.3.2. Phân lập nấm men
a- Cắt hoa quả và lá cây thành các miếng nhỏ. ðặt chúng trong chai môi trường cao nấm men-glucoza. ðậy miệng chai bằng một quả bóng. Nuôi ở nhiệt ñộ phòng tới khi xuất hiện sự sinh trưởng. Ghi lại sự xuất hiện của cả hai loại mẫu sau khi nuôi cấy.
b- Chia ñĩa môi trường Sabouraud thành 2 nửa. Mỗi loại mẫu nuôi cấy trên một nửa ñĩa.
+ Lau bề mặt cái kéo cắt mẫu bằng miếng gạc vô trùng. ðặt miếng gạc trên nửa ñĩa môi trường. Một số vi khuẩn sẽ mọc trên môi trường này.
+ Sử dụng que cấy vô trùng cấy ria một vòng que cấy dịch chiết từ chai vừa chuẩn bị ở phần a.
c. ðặt ñĩa cấy ñảo ngược, nuôi ở nhiệt ñộ phòng cho tới khi sự sinh trưởng xuất hiện. Chuẩn bị dịch thử với xanh methylen từ các khuẩn lạc khác nhau. Ghi lại kết quả.