Trong phòng thí nghiệm, VSV ñược nuôi cấy nhằm ñể dễ dàng xác ñịnh và kiểm tra khả năng sinh trưởng cũng như trao ñổi chất của chúng. VSV ñược nhiễm hoặc ñưa vào trong vài dạng môi trường nuôi cấy giúp giữ cho chúng sống, hoạt ñộng và ñể nghiên cứu sự sinh trưởng của chúng. Việc nhiễm VSV phải ñược thực hiện trong ñiều kiện không có các VSV không mong muốn khác hoặc không bị tạp nhiễm trong môi trường nuôi cấy. Kỹ thuật vô trùng ñược sử dụng trong nghiên cứu VSV nhằm loại trừ các sự tạp nhiễm.
Tất cả các môi trường nuôi cấy ñược khử trùng trước khi sử dụng. Việc khử trùng thường ñược thực hiện bằng sử dụng nồi hấp áp lực. Các dụng cụ chứa môi trường như ống nghiệm hay ñĩa Petri không nên mở ra cho tới khi thực sự làm việc với chúng, và thậm chí sau ñó cũng vậy.
Cả hai phương pháp nuôi cấy trên ñĩa petri hay trong ống nghiệm cung cấp số lượng lớn VSV trong một diện tích nhỏ và dễ dàng cho việc vận chuyển. Thạch nghiêng là các ống nghiệm chứa môi trường ñặc ñã ñược ñặt nghiêng trong khi thạch ñông lại. Thạch nghiêng giống như ñĩa Petri cung cấp một bề mặt sinh trưởng cho VSV nhưng ống thạch nghiêng thì dễ bảo quản và vận chuyển hơn. Thạch cho phép làm ñông cứng ở tận ñáy ống nghiệm tạo ra một môi trường thạch sâu. ðộ sâu thường ñược sử dụng cho VSV cần ít oxy hơn lượng ñang có trên bề mặt môi trường. Môi trường thạch bán rắn chỉ chứa 0,5- 0,7% thạch thay cho 1,5% thạch có thể thường sử dụng ñể xác ñịnh liệu VSV có di ñộng ñược hay không. Vi khuẩn di ñộng ñược sẽ chuyển ñộng từ ñiểm nuôi cấy tạo ra sự xuất hiện của “cây noen” ñảo ngược.
Sự cấy truyền và nhiễm VSV thường ñược thực hiện với một que cấy vô trùng, ñược phủ một dây Niken-crom không bị ăn mòn, chịu nhiệt. Trong ñó, ñoạn cuối của dây ñược uốn cong thành một cái móc vòng, nó ñược gọi là một que cấy tròn, nếu ñầu dây kim loại thẳng thì gọi là qua cấy thẳng. ðối với những
mục ñích ñặc biệt, sự nuôi cấy có thể cũng ñược cấy chuyền với các miếng gạc cotton, pipet, que gạt thuỷ tinh hoặc xilanh vô trùng. Những kỹ thuật này rất thông dụng trong nghiên cứu VSV.
Một que cấy tròn hay thẳng ñược sử dụng phụ thuộc vào dạng (trạng thái) của môi trường. Người ta có thể quyết ñịnh trong khi làm thí nghiệm tuỳ ñiều kiện và mục ñích thí nghiệm.
1. Vật liệu thí nghiệm
- Ống nghiệm chứa môi trường nước thịt - Ống môi trường thạch nghiêng
- Ống môi trường thạch bán rắn - Que cấy ñầu tròn, que cấy ñầu thẳng - Giá ống nghiệm, thuốc nhuộm Gram
- Nuôi cấy: dịch vi khuẩn Lactococcus lactic, Pseudomonas
2. Kỹ thuật yêu cầu
Tiến hành thí nghiệm theo thủ tục sau:
a) Thực hiện với chỉ một loại dịch vi khuẩn trong 1 lần, ngăn chặn bất kỳ sự trộn lẫn hoặc nhiễm chéo. Bắt ñầu với một loại nước canh thang, nhẹ nhàng khoá ñáy và lắc ñều lắng cặn.
b) ðể cấy vào dung dịch nước thịt, giữ que cấy có giống VSV trong tay thuận, một ống môi trường ở tay kia.
B1- Khử trùng ñầu que cấy tròn bằng cách giữ trên ngọn lửa (ñèn gas hoặc ñèn cồn) cho ñến khi nóng ñỏ.
B2- Giữ que cấy giống như một cái bút, uốn cong ngón tay út phối hợp với lòng bàn tay nhẹ nhàng rút nút ra khỏi ống nghiệm trong khi quay ống. Không ñược ñặt nút lấy ra xuống mặt bàn làm việc.
B3- Giữ ống nghiệm nghiêng một góc, chuyển miệng của ống nghiệm hướng về ngọn lửa. Luôn giữ ống nuôi cấy và ống môi trường mới ở ñộ nghiêng ñể giảm thiểu lượng bụi bẩn có thể rơi vào trong ống. Không ñể ñầu ống nghiệm quá xa hoặc dung dịch sẽ cấy rời khỏi nút.
B4- Nhúng ñầu que cấy tròn ñã khử trùng, ñược làm nguội vào dung dịch nước thịt ñể lấy một vòng sức căng bề mặt dịch nuôi cấy. ðưa que cấy ra ngoài, trong khi cầm que cấy ñốt miệng ống nghiệm và ñút nút lại bằng cách quay ống vào nút. ðặt ống nghiệm vào giá.
B5- Lấy ñầu nút ra khỏi một ống nghiệm chứa môi trường nước thịt ñã khử trùng, hơ miệng ống trên ngọn lửa. Nhúng ñầu que cấy có giống VSV vào môi trường và sau ñó vẽ một ñường từ ñáy ống. Hơ miệng ống môi trường và ñậy nút lại trước khi ñặt lên giá.
Không nằm ngoài mục ñích giữ và cấy chuyền giữa các ống nghiệm nhưng phải thực hiện ñược kỹ thuật cấy chuyền vô trùng.
c) ðối với môi trường thạch nghiêng, lặp lại bước 1-4 và cấy trên thạch nghiêng bằng cách di chuyển ñầu que cấy nhẹ nhàng ngang trên mặt thạch từ ñáy ống lên phía ñỉnh, phải cẩn thận ñể không chọc thủng mặt thạch. Hơ miệng ống nghiệm trên ngọn lửa và ñút nút lại. Khử trùng ñầu que cấy, ñể nguội, dán nhãn trên ống nuôi cấy.
d) ðối với môi trường thạch bán rắn, sử dụng que cấy thẳng, lặp lại bước 1-4. Cấy sâu vào môi trường bằng cách ñâm sâu ñầu que cấy thẳng vào giữa, sau ñó rút ra. Hơ miệng ống nghiệm trên ngọn lửa và ñậy nút lại. ðốt nóng que cấy, ñể nguội, dán nhãn ống nuôi cấy.
e) Nuôi các ống nuôi cấy ở 35oC với thời gian thích hợp.
g) Ghi nhận hiện tượng xuất hiện ở mỗi ống nuôi cấy, tham khảo các hình mẫu. h) Xem mùi vị xuất hiện của các ống nuôi cấy. Nhuộm Gram và so sánh chúng.