IV. ENZYM TRONG TRAO ðỔ IL ƯU HUỲNH
2. Xác ñị nh sinh khối cacbon của vi sinh vật ñấ t * Nguyên tắc
2.2. Thủ tục tiến hành 1 Chiế t xông hơ
* Xông hơi: Lót hút bình ẩm bằng giấy lọc ẩm ựể xông hơi mẫu ựất. Cân ắt nhất ba mẫu ựất ẩm trong cốc ựốt thuỷ tinh (hoặc trong ựĩa perti), mỗi mẫu chứa khối lượng tương ựương với 25 ựến 50g ựất khô kiệt. Sau ựó ựặt chúng vào bình hút ẩm cùng với cốc ựốt chứa 25ml cloroform không chứa rượu etylic, cho một ắt hạt chống trào vào cốc cloroform và cốc ựốt chứa vôi. Tạo chân không cho bình hút ẩm cho tới khi cloroform bên trong bình sôi mạnh khoảng 2 phút. đóng khoá chân không của bình hút ẩm và ựể ở phòng ủ (25oC ổ 2 oC) trong bóng tối khoảng 22 - 24h.
Nếu như không có ựủ mẫu ựất thì dùng mẫu nhỏ hơn nhưng giữ cho tỉ lệ khối lượng ựất và dung môi chiết không ựổi (1: 4). Trong ựất có chứa chất hữu cơ nhiều hơn 20% thì tăng tỉ lệ ựất : dung môi trên 1: 4 (cho tới tối ựa là 1:30 ựối với ựất chứa 95% chất hữu cơ, vắ dụ tầng thảm mục) ựể thu ựược chất chiết. Ghi lại lượng ựất ựã sử dụng.
Sau khi xông hơi kết thúc, lấy cốc cloroform và giấy lọc ra khỏi bình hút ẩm. Sau ựó tiến hành tách hơi cloroform trong mẫu ựất bằng cách hút chân không bình hút ẩm (lặp lại 6 lần, mỗi lần 2 phút) và mẫu ựất có thể mang ựi chiết ựược.
Cho ba mẫu ựối chứng ẩm không xông hơi (50g khối lượng khô) vào chai nhựa PE và dùng 200ml dung dịch kalisunphat ựể chiết ngay.
* Chiết: để chiết tách cacbon hữu cơ, chuyển mẫu ựất vào chai nhựa PE thật cẩn thận, cho thêm 200ml dung dịch kalisunphat, lắc chai trên máy lắc nằm ngang ở tốc ựộ 200 vòng/phút trong 30 phút hoặc máy lắc ựứng ở tốc ựộ 60 vòng/phút trong 45 phút và lọc dung môi qua giấy lọc. Chiết ựối chứng không xông hơi và lọc dung môi chiết cũng như vậy.
Nếu như không phân tắch ngay, bảo quản dịch chiết của mẫu ựất xông hơi và không xông hơi ở tủ ựá và giữ ở nhiệt ựộ từ -15oC ựến -20oC. Trước khi sử dụng làm tan dịch chiết ựến nhiệt ựộ phòng và ựồng nhất chúng.
* Chú thắch:
1. Trong khi bảo quản dung môi chiết thường xuất hiện kết tủa trắng (ựặc biệt khi giữ ở nhiệt ựộ ựông lạnh) bởi vì chúng thường ựược bão hoà với canxisunphat (CaSO4). Không cần hoà tan lượng canxisunphat dư này vì nó không tác dụng với bất kỳ hoá chất nào trong quá trình tiến hành theo phương pháp này.
2. Các màng tế bào của các rễ non, sống cũng bị ảnh hưởng qua quá trình xông hơi bằng cloroform. Nếu như ựất có chứa nhiều rễ cây sống cần phải tiến hành thêm một qui trình xử lý trước khi chiết theo phụ lục.
* Xác ựịnh cacbon trong dịch chiết
Hàm lượng cacbon của vi sinh vật trong mẫu ựất ựược xác ựịnh bằng cách phân tắch và hàm lượng này có thể sử dụng ựể so sánh các mẫu ựất khác nhau. Nếu như cần số liệu về sinh khối vi sinh vật hiện tại, thì lúc ựó các phân tắch như vậy ựược nhân với hệ số chuyển ựổi ựược rút ra từ các thực nghiệm, tương quan giữa khối lượng tế bào ựã biết với lượng cacbon sau khi xông hơi và chiết tách. Tất cả các hệ số chuyển ựổi ựã sử dụng ựều tưong quan theo hệ số ban ựầu này.
Xác ựịnh hàm lượng cacbon trong dịch chiết bằng phương pháp oxy hoá dicromat hoặc phương pháp phân tắch trên máy.