- Định loại giun sán dựa trên đặc điểm hình thái học quan sát, mô tả, đo và vẽ
2.4.4Nghiên cứu bệnh lý lâm sàng
2.4.4.1 Triệu chứng lâm sàng ở gà mắc bệnh giun sán
Theo dõi các biểu hiện lâm sàng ở những gà nhiễm giun sán nặng (gà mắc bệnh giun sán), thực hiện cùng với thí nghiệm 1 và nghiên cứu một số tài liệu liên quan.
2.4.4.2 Nghiên cứu biến đổi bệnh tích đại thể và vi thể ở các tổ chức của gà do giun sán ký sinh gây ra bằng phương pháp cắt cúp tổ chức
Nghiên cứu bệnh tích vi thể theo phương pháp làm tiêu bản tổ chức học của Jones và cs., (1969) [71]. Cắt lạnh và nhuộm tiêu bản theo phương pháp của Culling C.F.A., (1974) [61], đọc kết quả và chụp ảnh dưới kính hiển vi.
- Phương pháp lấy mẫu và bảo quản mẫu làm tiêu bản
Lẫy mẫu bệnh phẩm làm tiêu bản vi thể: Các tổ chức bệnh phẩm được lấy và ngâm trong dung dịch Formaline 10% với tỉ lệ 1 phần bệnh phẩm với 9 phần Formaline. Chú ý không bảo quản lạnh đối với tổ chức bệnh phẩm làm tiêu bản vi thể.
* Phương pháp Parafin (cắt nến), cắt lạnh để chẩn đoán vi thể:
Dùng phương pháp Parafin, cắt lạnh để kiểm tra vi thể và siêu vi thể của Dunn A. M., (1978) [63].
- Trước tiên cắt tổ chức có độ dày 0,5 - 1 cm, sau đó cố định bằng dung dịch đệm trung tính Formaline 10% với tỉ lệ 1 phần tổ chức: 9 phần dung dịch Formaline, thời gian bảo quản ít nhất từ 24 - 36 giờ nhằm giữ cho tổ chức và các tế bào có dạng giống như lúc bình thường.
- Sau khi cố định, rửa tổ chức qua vòi nước chảy 1 - 3 giờ để loại bớt Formalin có trong tổ chức.
- Từ từ rút nước trong tổ chức bằng cách ngâm tổ chức vào dung dịch cồn có nồng độ từ thấp đến cao theo trình tự: Cồn 700 trong 2 giờ, cồn 90o trong 2 giờ, cồn 1000 trong 6 giờ.
- Loại cồn ra khỏi tổ chức bằng ngâm vào Xylen với thời gian 2 giờ.
- Tiếp tục loại bỏ Xylen ra khỏi tổ chức bằng Parafin nóng chảy với thời gian 1 giờ.
- Để Parafin ngấm vào trong tổ chức, tiếp tục ngâm tổ chức trong Parafin 3 lần, mỗi lần 30 phút.
- Đúc thành khuôn Parafin và để nguội.
- Tổ chức trong khuôn được cắt lát trên máy cắt tiêu bản, mỗi lát cắt dày từ 3 - 4 µm.
- Lát cắt được làm phẳng và gắn trên lam kính bằng dung dịch Mayer.
* Nhuộm tiêu bản tổ chức bằng phương pháp Hematoxylin - Eosin (HE):
- Tẩy nến: Dùng các nồng độ cồn Ethanol 960 đến 700 trong thời gian tương ứng giảm dần từ 5 phút đến 2 phút.
- Tiêu bản tổ chức được rửa qua nước chảy trong 5 phút và nhuộm Hematoxylin trong 5 phút, sau đó lại rửa qua nước chảy trong 15 phút và nhuộm Eosin trong 1 - 2 phút. Rửa qua nước chảy và làm khô tiêu bản trong dung dịch cồn có nồng độ tăng dần từ 96% đến 100% với thời gian giảm dần từ 5 phút đến 2 phút.
- Làm trong tiêu bản bằng dung dịch Xylen với thời gian giảm dần 5 phút, 2 phút. Sau đó nhỏ một giọt Bom Canada lên lát cắt trên lam kính, đậy lamen lên, để khô và kiểm tra bệnh tích vi thể dưới kính hiển vi quang học.