VI NHÂN GIỐNG CÂY TRAI NAM BỘ
NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT NUƠI CẤY PHƠI GIẢ TRONG
NHÂN NHANH CÂY TRẦM HƯƠNG
(Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte)
Đinh Trung Chánh
ĐH Nơng Lâm TPHCM
Bùi Thị Tường Thu, Trần Văn Minh
PTNTĐ phía Nam về CNTBTV, Viện Sinh học Nhiệt đới
MỞ ĐẦU
Trong q trình tái sinh, cĩ những lồi thực vật tái sinh tương đối dễ dàng và trong
thời gian ngắn; tuy nhiên, cĩ những loài thực vật tái sinh chậm và cần thời gian dài, đơi khi phải nuơi cấy tái sinh qua nhiều giai đoạn (Zimmerman etal., 1986). Để nâng cao hiệu quả tái sinh, chồi tái sinh xuất hiện đ ược đưa vào nuơi cấy vi nhân giống hay nuơi cấy tăng sinh phơi soma hay phơi giả, nhằm mục tiêu nâng cao quá trình tái sinh và nâng cao hệ số nhân giống (Mantell etal., 1985). Tăng sinh phơi soma hay phơi giả thì
nhanh hơn nuơi cấy tăng sinh chồi. Ri êng đối với cây trầm hương, quá trình tái sinh phơi soma thường xuất hiện chồi đơn, và phải qua nhiều giai đoạn nuơi cấy mới phát
sinh cụm chồi, tốc độ nhân nhanh cụm chồi giảm dần theo thời gian, và khả năng phát sinh rễ cũng giảm dần (Minh & Thu, 2003). Nên, cần phải cĩ hệ thống nuơi cấy thích hợp sau khi tái sinh để tăng sinh nhanh in vitro, thì hệ thống nuơi cấy phát sinh phơi giả tỏ ra hiệu quả
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Vật liệu
Mẫu nuơi cấy: Chồi tái sinh từ phơi soma, cĩ hai lá tiền sinh, dịng ND (được thu thập ở nam đảo Phú Quốc). Chồi con được tách rời và dùng trong nghiên cứu
Điều kiện nuơi cấy: Mơi trường được vơ trùng ở 121oC và 1at trong 25 phút. Nhiệt độ phịng nuơi cấy 28+1oC. Cường độ chiếu sáng 34,2mol/m2
/s. Thời gian chiếu sáng 8giờ/ngày.
Mơi trường nuơi cấy: Mơi trường dinh dưỡng khống cơ bản WPM (Lloyd and McCown, 1981), đư ợc bổ sung BA (6-benzyl aminopurine), Kinetin (6 -
furfurylaminopurine), IBA (-indol butyric acid), NAA (α - naphthalene acetic acid), glycin, vitamin B1
Phương pháp
Thí nghiệm được bố trí theo RCBD (1 yếu tố), 4 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại nuơi cấy 5 bình tam giác 300ml, mỗi bình tam giác chứa 65ml mơi trường thí nghiệm và được
cấy 5 mẫu. Số liệu thu thập đ ợc phân tích thống kê bằng phần mềm MSTATC (P=005). Số phơi PLB nuơi cấy phát sinh / đ ơn vị (đơn vị là một chồi cĩ lá tiền sinh tái sinh từ phơi soma)
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Mẫu nuơi cấy: Trong quá trình tái sinh phơi soma trầm hương in vitro, chồi tái sinh thường xuất hiện đơn lẻ, khơng tạo thành cụm chồi, nên hiệu suất nhân giống sẽ khơng
cao. Chồi đơn xuất hiện cĩ 1-2 lá tiền sinh hay cĩ 2 lá thành thục. Những chồi đơn này
được tách rời, được sử dụng như protocol trong nghiên c ứu nuơI cấy phát sinh phơi giả
Ảnh hưởng của BA và kinetin (K) đến khả năng tạo phơi giả: Chồi đơn được nuơi cấy trên mơI trường WPM cĩ bổ sung BA (1-10mg/l) và kinetin (1-10mg/l). Kết quả
nghiên cứu cho thấy phơi giả phát sinh nhiều tr ên mơi trường nuơi cấy cĩ bổ sung BA (5mg/l) hay kinetin (5mg/l) . Phơi giả xuất hiện cĩ dạng hình cầu nhỏ, cĩ màu trắng, cĩ 1-2 lá tiền sinh cĩ màu xanh lá cây nhạt. Khả năng phát sinh phơi giả tr ên m6i trường cĩ bổ sung BA hay kinetin đều thích hợp
Ảnh hưởng của BA/NAA và K/NAA đến khả năng tạo phơi giả: Để nâng cao hiệu
suất nuơi cấy phát sinh phơi giả, mơi tr ường nuơi cấy WPM đ ược bổ sung các tổ hợp BA/NAA hay K/NAA. Kết quả nghiên cứu cho thấy, phơi giả phát sinh hiệu quả trên
mơi trường cĩ bổ sung BA (5mg/l) + NAA (0,2mg/l) hay K (3mg/l) + NAA (0,2mg/l)
so với BA hay kinetin tác động riêng lẻ. Phơi giả xuất hiện cĩ hình cầu trắng, cĩ 1-2 lá tiền sinh. Để nuơi cấy kéo dài sau hai tháng thì phơi giả đi vào quá trình tái sinh cĩ xuất
hiện lá thật. Khả năng phát sinh phơi giả cho thấy cĩ khả năng nâng cao tr ên mơi trường cĩ bổ sung BA + NAA hay K + NAA
Ảnh hưởng của BA/K/NAA đến khả năng tạo phơi giả: Nhằm mục đích nghiên cúu
đến sự hoàn hảo của mơi trường nuơi cấy. Trên mơI trường WPM cĩ bổ sung sự kết hợp
BA, kinetin và NAA. Kết quả nghiên cứu cho thấy, kết hợp BA (5mg/l) + K (3mg/l) + NAA (0,2mg/l) cho tần suất phát sinh phơi giả tăng lên rõ rệt (8,2 phơi giả / đơn vị). Kết quả cho thấy BA, kinetin v à NAA đĩng vai trị quan trọng trong quá trình nuơi cấy phát sinh phơi giả
Nhân nhanh phơi giả: Duy trì nuơi cấy phát sinh phơi giả in vitro để nhân nhanh là rất cần thiết. Mơi trường nuơi cấy WPM được bổ sung BA (5mg/l), kinetin (3mg/l) và NAA (0,2mg/l) riêng lẻ hay kết hợp. Kết quả nghiên cứu cho thấy phơi giả nuơi cấy phát sinh liên tục in vitro. Kết hợp BA + K + NAA cho hiệu quả nhân nhanh phơi giả rõ rệt (10,6 phơI giả / đơn vị) so với BA hay BA + K
Tái sinh phơi giả: Phơi giả được nuơi cấy tái sinh tr ên mơi trường WPM cĩ bổ sung
IBA (0,3-0,7mg/l). Kết quả nghiên cứu cho thấy IBA (0,7mg/l) thích hợp cho quá trình tái sinh cĩ chiều cao chồi 65mm và phát sinh rễ sau 45 ngày nuơi cấy
KẾT LUẬN
Chồi tái sinh từ phơi được sử dụng làm nguyên liệu cho các nghiên cứu nuơi cấy phát sinh phơi giả. Mơi trường thích hợp cho nuơi cấy phát sinh phơi giả: WPM + BA
(5mg/l) + Ki (3mg/l) + NAA (0,2mg/l). Phơi giả được tái sinh trên mơi trường WPM +
IBA (0,7mg/l), đạt chiều cao chồi 65mm sau 45 ngày nuơi cấy. Một hệ thống nhân nhanh cây dĩ bầu hiệu quả bằng kỹ thuật nuơi cấy phơi giả.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Lloyd G. & B. McCown (1980). Commercially feasible micropropagation of laurel, Kalmia latifolia, by use of shoot tip culture. Comb. Proc. Int. Plant Crop Soc. 30:421-427
2. Mantell S.H., Matthews J.A. & McKee R.A. (1985). Principles of plant biotechnology. Blackwell Scientific, Boston, pp130 -157
3. Zimmerman R.H., Griesbach R.J., Hmmerschlag F.A. & Lawson R.H. (ed s) (1986). Tissue culture as a production system for horticulture crops . Martinus Nijhoff, Dordrecht. ISBN:90-247-3378-2
4. Minh TV & BTT Thu (2003). Ứng dụng cơng nghệ tế bào thực vật phục hồi loàI cây đặc sản trầm hương (Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte). Kỷ yếu Hội nghị
NCCB 2003, Huế, pp358-360
SUMMARY