VI NHÂN GIỐNG CÂY LIM XANH
1. Nuơi cấy phát sinh tế bào soma
Mục tiêu của thí nghiệm là tìm mơi trường thích hợp cho nuơi cấy phát sinh tế bào soma và khả năng tăng sinh khối. Mẫu nuơi cấy ban đầu là thân và lá cây in vitro, với trọng lượng lượng mẫu ban đầu đ ưa vào nuơi cấy là 0,5g. Trọng lượng
tươi tăng lên được tính bằng cách lấy trọng lượng tươi 8 tuần sau nuơi cấy trừ đi cho trọng lượng ban đầu.
Nuơi cấy phát sinh tế bào soma trong điều kiện che tối hoàn tồn: mơi trường nuơi
cấy cơ bản: WPM + Cw (10%) + vitaminB1(5mg/l) + Glycin (5mg/l) + sucrose (30g/l) + BA (0,1mg/l) + NAA (0 -1-3-5-7mg/l). Tỷ lệ phát sinh phơi soma cao nhất 93.33% (với mẫu nuơi cấy là thân) và 96.67% (với mẫu nuơi cấy là lá)ở nồng độ NAA (3mg/l),
kết quả tương tự 90% (mẫu thân) và 93.33% (mẫu lá) được ghi nhận với nồng độ NAA (5mg/l). Trọng lượng tươi tế bào soma tăng lên cao nh ất 2.10g (với mẫu nuơi cấy là thân) và 2.23g (với mẫu nuơi cấy là lá)ở nồng độ NAA (3mg/l), kết quả được ghi nhận thấp hơn 1.57g (mẫu thân) và 1.67g (mẫu lá) ở nồng độ NAA (5mg/l). Vậy với mơi
trường cơ bản ban đầu, cĩ bổ sung nồng độ NAA biến thiên khác nhau (0-7mg/l), cho thấy mẫu thân hay lá đều cĩ khả năng phát sinh tế bào soma cao (90-96.67%)ở nồng độ
NAA (3-5mg/l); và trọng lượng tươi tăng lên sau 8 tuần nuơi cấy được ghi nhận ở mức 2.10-1.57g (mẫu thân) và 2.23-1.67g (mẫu lá) với nồng độ NAA (3-5mg/l).
Nuơi cấy phát sinh tế bào soma trong điều kiện cĩ chiếu sáng (22,2μmol/m2/s): mơi
(30g/l) + BA (0,1mg/l) + NAA (0-1-3-5-7mg/l). Tỷ lệ phát sinh phơi soma cao nhất 86.67% (với mẫu nuơi cấy là thân) và 90% (với mẫu nuơi cấy là lá )ở nồng độ NAA (3mg/l), kết
quả tương tự 73.33% (mẫu thân) và 76.67% (mẫu lá) được ghi nhận với nồng độ NAA (5mg/l). Trọng lượng tươi tế bào soma tăng lên cao nhất 1.53g (với mẫu nuơi cấy là thân) và 1.90g (với mẫu nuơi cấy là lá)ở nồng độ NAA (3mg/l), kết quả đ ược ghi nhận thấp hơn
1.27g (mẫu thân) và 1.60g (mẫu lá) ở nồng độ NAA (5mg/l). Vậy với mơi tr ường cơ bản
ban đầu, cĩ bổ sung nồng độ NAA biến thiên khác nhau (0-7mg/l), cho thấy mẫu thân hay
lá đều cĩ khả năng phát sinh tế bào soma cao (73.33-90%)ở nồng độ NAA (3-5mg/l); và
trọng lượng tươi tăng lên sau 8 tuần nuơi cấy được ghi nhận ở mức 1.53-1.27g (mẫu thân) và 1.90-1.60g (mẫu lá) với nồng độ NAA (3-5mg/l).
Kết luận: với mơi trường nuơi cấy cơ bản ban đầu cĩ thay đổi nồng độ NAA (0- 7mg/l) bổ sung, kết quả cho thấy mẫu thân và lá được đưa vào nuơi cấy đều cĩ khả năng
phát sinh và tăng sinh kh ối tế bào soma; với mẫu nuơi cấy là lá cho tỷ lệ phát sinh tế bào
soma và khả năng tăng sinh khối cao ở nồng độ NAA (3-5mg/l) ở cả hai điều kiện nuơi
cấy trong tối hoàn tồn và cĩ chiếu sáng 2000lux. Và đây là mơi trường cơ bản ban đầu
được sử dụng cho các nghiên cứu tiếp sau.