VI NHÂN GIỐNG CÂY TRAI NAM BỘ
ỨNG DỤNG CƠNG NGHỆ PHƠI soma TRONG CƠNG
TÁC GIỐNG CÂY LÁT HOA (Chukrasia tabularis A. Juss)
Bùi Thị Tường Thu, Trần Văn Minh
PTNTĐ phía Nam về CNTBTV, Viện Sinh học Nhiệt đới
MỞ ĐẦU
Cây lát hoa là lồi cây cây gỗ lớn, quý hiếm, quý vì cĩ vân rất đẹp, thớ gỗ mịn, khơng bị mối mọt, rất được ưa chuộng để đĩng các đồ gia dụng cao cấp, chính vì vậylát
hoa đã bị săn tìm ráo riết để khai thác gỗ, cả thân lẫn rễ khơng chừa lại cây giống, nên hiện nay lát hoa trong tình trạng cạn kiệt khơng cĩ khả năng tự phục hồi trên phạm vi cả
nước (Nguyễn Bá Chất, 1998; Nguyễn Hồng Nghĩa, 1999; Trần Đình Huệ, 1998).
Được liệt kê trong Sách Đỏ Việt Nam (Bộ KH&CN, 2000). Khả năng tái sinh bằng hạt
trong tự nhiên kém. Năm 1997, cơn b ảo Linda (cơn bảo số 5) đãđổ bộ vào Cơn Đảo gây
thiệt hại nghiêm trọng, trong đĩ cĩ 2.200ha rừng thuộc V ườn QG Cơn Đảo, đã làm suy giảm về số lượng và chất lượng các loài cây gỗ quý bản địa và đặc hữu như lát hoa,
găng néo, quăng lơng, d ầu Cơn Sơn… Trong bối cảnh đĩ, thực trạng loài cây lát hoa cịn lại rất ít, tái sinh tự nhiên kém, khả năng gieo giống rất hạn chế. Cây mẹ đầu dịng
cĩ đời sống dài nhiều năm, rất khĩ trẻ hĩa (Mamood, 1993). Nhằm mục tiêu bảo tồn, trẻ hĩa và dịng hĩa, kỹ thuật nuơi cấy phơi soma đã tỏ ra thích hợp (Thorpe, 1980; Phillips, 1988), mà hiện nay chưa cĩ báo cáo về việc ứng dụng kỹ thuật này.Ứng dụng
cơng nghệ phơisoma trong cơng tác giống cây lát hoa là cần thiết
VẬTLIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Vật liệu
Mẫu nuơi cấy: cây lát hoa in vitro. Mẫu cây con in vitro đ ược chọn đang sinh
trưởng khỏe và cĩ thân lá rễ đầy đủ. Thân lá rễ cịn non được sử dụng trong nuơi cấy.
Thân và rễ được cắt từng đọan 1cm, lá đ ược cắt thành từng mảnh 1cm2,
Điều kiện nuơi cấy: Mơi trường được vơ trùngở 121oC và 1at trong 25 phút. Nhiệt độ phịng nuơi cấy 28+1oC. Cường độ chiếu sáng 34,2mol/m2
/s. Thời gian chiếu sáng 8giờ/ngày.
Mơi trờngnuơi cấy:Mơi trường dinh dưỡng khống cơ bản MS (Murashige-Skoog,
1962) và WPM (Lloyd and McCown, 1981), đư ợc bổ sung BA (6-benzyl aminopurine),
Kinetin (6-furfurylaminopurine), IAA (-indol acetic acid), NAA (-naphthalene acetic
acid), glycin, vitamin B1 và nước dừa (CW)
Phương pháp
Thí nghiệm được bố trí theo RCBD (1 yếu tố), 4 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại nuơi cấy 5 bình tam giác 300ml, mỗi bình tam giác chứa 65ml mơi trường thí nghiệm và được cấy 5 mẫu. Số liệu thu thập được phân tích thống kê bằng phần mềm MSTATC (P=005). Tỷ lệ phát
sinh tế bào soma (%), sinh khối tế bào sau 15 ngày nuơi cấy (g), tăng sinh khối tế bào (g), mật
độ tế bào (tbx104/ml), số chồi / cụm (chồi), chiều cao chồi (mm), rễ (+/-)
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Nuơi cấy phát sinh tế bào soma: Mẫu thân lá rễ được nuơi cấy trên mơi trường MS
cĩ bổ sung BA, kinetin, NAA. Kết quả nghiên cứu cho thấy tế bào soma phát sinh trực tiếp trên vết cắt sau 10 ngày nuơi cấy. Thân và lá cho phát sinh tế bào soma cao.
Nghiệm thức A1 cĩ bổ sung BA (4mg/l) + Kin (2mg/l) + NAA (0,5mg/l) thích hợp cho nuơi cấy phát sinh phơi soma trực tiếp trên mẫu thân và lá nuơi cấy (bảng 1), tế bào phơi soma cĩ dạng hình trịn và cĩ màu trắng sữa. Tế bào phơi soma từ nghiệm thức A1 với
mẫu nuơi cấy từ lá đượcsử dụng cho những nghiên cứu về sau
Nhân sinh khối dịch huyền phù phơi soma trên mơi trư ờng agar: Tế bào phơi so ma
được nuơi cấy tăng sinh tr ên mơi trường agar MS cĩ bổ sung BA, kinetin, NAA. Kết
quả nghiên cứu cho thấy, tế bào phơi soma phân chia và biệt hĩa tốt trên mơi trường nghiệm thức B1: BA (4mg/l) + Kin (2mg/l) + NAA (0,5mg/l) (bảng 2). Trên mơi trường
nghiệm thức B1, tế bào phơi soma biệt hĩa sâu sắc, tế bào cĩ màu xanh nhạt và cĩ vài
chồi được tái sinh trong giai đoạn này
Nhân sinh khối dịch huyền phù phơi soma trên mơi trư ờng lỏng: Tế bào phơi soma
phát sinh trên mơi trư ờng nghiệm thức A1 đ ược đưa vào nuơi cấy trên lỏng. Mơi trường
nuơi cấy lỏng là MS cĩ bổ sung BA, kinetin, NAA. Kết quả nghiên cứu cho thấy, tế bào phân chia và biệt hĩa nhanh trên mơi trường nghiệm thức C1: BA (4mg/l) + Kin (2mg/l) + NAA (0,5mg/l) (bảng 3). Trên mơi trường này, tế bào phơi phân chia và biệt hĩa tế bào phơi thành hình cầu, hình tim và hình thủy lơi; chuẩn bị đầy đủ điều kiện cho quá
trình tái sinh
Trải dịch huyền phù phơi soma trên mơi trư ờng agar: Tế bào dịch huyền phù được
nuơi cấy trong mơi trường lỏng trên nghiệm thức C1 được sử dụng trải tế bào. Mơi
trường trải tế bào là MS cĩ bổ sung BA (4mg/l) + Kin (2mg/l) + NAA (0,5mg/l). Sau 3 tuần nuơi cấy, lớp tế bào phủ đầy mặt agar, tế bào phơi mịn và hầu hết cĩ dạng hình cầu.
Tế bào phơi trong giai đo ạn này thích hợp cho nuơi cấy tái sinh
Tái sinh phơi soma: Tế bào phơi soma được nuơi cấy tái sinh tr ên mơi trường MS
cĩ bổ sung BA, kinetin và CW. Kết quả nghiên cứu cho thấy, tế bào phơi soma biệt hĩa nhanh chĩng phát sinh hình thành chồi, chồi xuất hiện vừa cĩ chồi đ ơn và vừa cĩ cụm
chồi. Chồi đơn phát sinh dễ dàng phát sinh thành cụm chồi. Nghiệm thức B1: MS + BA (0,1mg/l) + CW (10%) thích hợp cho quá trình tái sinh phát sinh cụm chồi
Nhân nhanh cây lát hoa in vitro : cụm cồi hay chồi đơn tái sinh được nuơi cấy trên
mơi trường vi nhân giống MS + Kin (1mg/l) + CW (10%). Chồi phát sinh liên tục trong
quá trình vi nhân giống trên mơi trường nghiệm thức E4
KẾT LUẬN
Thân, lá, rễ cây lát hoa nuơi cấy mơ được sử dụng làm vật liệu nuơi cấy. Thân và lá thích hợp cho các nghiên cứu nuơi cấy phát sinh tế bào soma và phơi soma. Lá được sử dụng trong nghiên cứu nuơi cấy phát sinh tế bào soma, nhân sinh khối tế bào trên mơi trường bánrắn và
lỏng, và được trải nuơi cấy phát sinh phơi soma tr ên mơi trường MS + BA (4mg/l) + Ki
(2mg/l) + NAA (0,5mg/l). Phơi soma đư ợc nuơi cấy tái sinh sau 30 ngày trên mơi trường MS
+ BA (0,1mg/l) + CW (10%) hình thành chồi đơn hay cụm chồi. Cụm chồi được sử dụng
trong vi nhân giống trên mơi trường MS + Ki (1mg/l) + CW (10%). Một hệ thống nhân nhanh cây lát hoa bằng kỹ thuật nuơi cấy phơi soma được xác định
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Bộ Khoa học và Cơng nghệ (2000). Sách Đỏ Việt Nam, phần Thực vật. NXB KH&KT, Hà Nội
2. Lloyd G, McCown B (1980). Commercially feasible micropropagation of laurel, Kalmia latifolia, by use of shoot tip culture. Comb. Proc. Int. Plant Crop Soc. 30:421-427
3. Mamood M. (1993). Application of plant in vitro technology. Proc., 16-18 Nov
1993, Univ. of Malaysia, Malaysia.
4. Murashige T. & R. Skoog (1962). A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 15: 431-497
5. Nguyễn Bá Chất (1998). Nghiên cứu một số đặc điểm lâm học và biện pháp kỹ thuật gây trồng nuơI dưỡng cây lát hoa (Chukrasia tabularis A. Juss). Luận án Tiến
sĩ Lâm nghiệp.
6. Nguyễn Hoàng Nghĩa (1999).Một số loài cây bị đe dọa ở Việt Nam. NXB Nơng nghiệp 7. Phillips GC (1988). Developmental models f or the expression of totipotency and
plant regeneration in vitro. South Assoc. Agri. Sci. Bull. Biochem. Biotech. 1:12-16 8. Trần Đình Huệ (1998).Nghiên cứu ưu hợp thực vật lát hoa + găng néo + chi êu liêu nước
+ trường trái nhỏ tại khu vực Đất Thắm, V ườn QG Cơn Đảo. Báo cáo Cơn Đảo 2001
9. Thorpe T. A. (1980). Organogenesis in vitro: structural, physiological and biochemical aspects. Int. Rev. Cytol. Suppl. 11A: 71-112
SUMMARY
Application of somatic embryogenesis culture techniques in