VI NHÂN GIỐNG CÂY LIM XANH
THƠNG ĐỎ (Taxus wallichiana Zucc) invitro
Bùi Thị Tường Thu, Trần Văn Minh
PTNTĐ phía Nam về CNTBTV, Viện Sinh học Nhiệt đới
MỞ ĐẦU
Cây thơng đỏ dịng Taxus sp. var wallichiana (Zucc.) Hook là lồi cây bản địa của Việt
Nam, cịn sĩt lại khơng quá 16 cây tại Cao nguyên lâm viên Liang Biang, cĩ đư ờng kính
thân trên 75cm, là lồi cây sinh trư ởng chậm. Bảo tồn và phát triển cây thơng đỏ Đà Lạt là
một yêu cầu cấp thiết đối với loài cây quý hiếm cĩ giá trị chiết xuất taxol phịng chống bệnh
ung thư. Phương thức nhân giống truyền thống hiện nay là gieo hạt hoặc giâm cành hoặc ghép cành (Ho, 1998). Tuy nhiên, hạt mau mất sức nẩy mầm và số lượng hạt cho một mùa
trái rất thấp; hơn nữa cây giâm cành thường cĩ hiện tượng sinh trưởng chậm và ngã nghiêng (plagiotropically) và khơng thẳng đứng (Chang etal, 2001). Nuơi cấy vi nhân giống cây
thơng đỏ dịng Taxus media và Taxus mairei đĩ được ghi nhận trong những năm gần đây
(Cerdeira, 1994; Chang etal, 1998), tuy nhiên cây con in vitro sinh trư ởng chậm và bảo lưu
cục bộ tính ngả nghiêng. Nuơi cấy phơi soma là một kỹ thuật nuơi cấy in vitro để v ượt qua
khả năng nẩy mầm kém của hạt giống và hạn chế vấn đề sinh trưởng chậm cây con in vitro nhất là đối với cây thân gỗ lá kim (Gupta & Durzan, 1987). Kết hợp kỹ thuật nuơi cấy phát sinh, tái sinh phơi soma và dịng hĩa in vitro sẽ hạn chế ở mức thấp nhất tính bảo l ưu ngả nghiêng cục bộ bằng kỹ thuật vi nhân giống nâng cao hiệu suất nhân nhanh cây thơng đỏ in vitro (Amos & McCown, 1981; Chee, 1995)
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Vật liệu
Vật liệu được đưa vào nuơi cấy phát sinh tế bào soma là thân và lá cây thơng đ ỏ đã
được dịng hĩa in vitro. Tế bào soma thu nhận được qua nuơi cấy từ thân được đưa vào
nghiên cứu nuơi cấy tăng sinh tr ên mơi trường agar và lỏng. Dịch huyền phù thu nhận
được sau 6 tuần nuơi cấy đ ược xác định mật độ v à được sử dụng trong nuơi cấy phát
sinh và tái sinh phơi soma
Mật độ tế bào: được đếm bằng buồng đếm hồng cầu (cĩ cấu tạo khung đếm Thoma, bao gồm 25 ơ lớn và mỗi ơ lớn cĩ 16 ơ nhỏ, diện tích mỗi ơ nhỏ là 1/400mm2, chiều cao mỗi ơ là 0,1mm) trong một giọt dung dịch, sau đĩ đ ược tính ra trong 1ml dung dịch với nồng độ pha lỗng là 10-1 với cơng thức tính: Số tế bào / ml mẫu = [ a x 4000 x 1000 ] / H
Với:
a: số tế bào trung bình cĩ trong một diện tích vi trường (ơ nhỏ).
4000: số quy đổi 1/400mm2 thành 1mm3. 1000: số quy đổi từ 1mm3 thành 1ml. H: hệ số pha loãng.
Mơi trường nuơi cấy cơ bản trong nghiên cứu phát sinh và tăng sinh t ế bào soma
trên agar và lỏng, phát sinh và tái sinh phơi: WPM + Cw (10%) + vitaminB1 (5mg/l) + Glycin (5mg/l) + sucrose (30g/l).
Điều kiện nuơi cấy: mơi trường được vơ trùngở 121oC, 1at, trong 25 phút. Nhiệt độ
phịng 28+2oC, cường độ chiếu sáng 33,4μmol/m2/s, thời gian chiếu sáng 8 giờ/ngày.
Hạt nhân tạo: Phơi soma được trộn vào hỗn hợp: dung dịch alginate(3o/oo) + mơi
trường nuơi cấy cơ bản WPM, hỗn hợp được nhỏ giọt vào dung dịch CaCl2(2%). Hạt
nhân tạo chứa phơi được tồn trữ trong phytotron ở nhiệt độ 15oC, thời gian chiếu sáng 8giờ/ngày, và cường độ chiếu sáng 11,1µmol/m2/s.
Phương pháp:
Thí nghiệm được bố trí theo CBD một yếu tố, mỗi nghiệm thức cĩ 5 lần lặp lại. Mỗi lần lặp lại được nuơi cấy trong 3 bình tam giác 300ml. Mỗi bình tam giác nuơi cấy 7 mẫu. Số liệu được xử lý bằng phần mềm thống kê MSTATC
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN