Tỷ lệ đột biến của P falciparum kháng thuốc pyrimethamin

3.4. Đặc điểm KSTSR kháng thuốc tại 3 tỉnh Quảng Bình, Quảng Trị và

3.4.1. Tỷ lệ đột biến của P falciparum kháng thuốc pyrimethamin

Ký sinh trùng P. falciparum kháng pyrimethamin liên quan chặt chẽ

đến đột biến điểm tại các vị trí 51, 59, 108 và 164 trên gen dhfr. Trong đó vị

trí 108 là quan trọng nhất vì qua các nghiên cứu đánh giá mối t-ơng quan giữa các vị trí đột biến với kết quả đánh giá sự nhạy cảm của thuốc trên in vitro và

in vivo cho thấy nếu đồng thời đột biến tại các điểm 51, 59, 164 mà khơng có

đột biến tại điểm 108 thì KSTSR khơng kháng với pyrimethamin. Trong khi đó nếu chỉ đột biến đơn ở vị trí 108Ser108Asn thì KSTSR kháng với pyrimethamin. Tuy nhiên nếu đột biến điểm 108 kèm theo những đột biến điểm tại các vị trí khác thì mức độ kháng tăng lên 16-32 lần [124].

Kết quả phân tích đột biến ở 162 mẫu bệnh nhân nhiễm P. falciparum tại 3 tỉnh thuộc khu vực Bắc Tr-ờng Sơn đ-ợc trình bày ở Bảng 3.18.

Bảng 3.18. Kết quả phân tích đột biến trên gen dhfr của P. falciparum Vị Vị trí Kiểu gen/Tỷ lệ (%) Quảng Bình (n=67) Quảng Trị (n=81)

Thừa Thiên Huế (n=14) 51 S/R/M 43/20/4 53/23/5 9/5/0 % 64,18/29,85/5,97 65,43/28,40/6,17 64,29/35,71/0 59 S/R/M 20/39/8 28/43/10 5/7/2 % 29,85/58,21/11,94 34,57/53,09/12,35 35,71/50,00/14,92 108 S/R/M 13/36/18 18/45/18 3/8/3 % 19,40/53,73/26,87 22,22/55,56/22,22 21,43/57,14/21,43 164 S/R/M 61/6/0 73/8/0 13/1/0 % 91,04/8,96/0 90,12/9,88/0 92,86/7,14/0

Ghi chú: S: kiểu gen nhạy; R: kiểu đột biến và M: nhiễm phối hợp kiểu nhạy và đột biến Kết quả phân tích cho thấy đột biến điểm xảy ra ở cả bốn vị trí trên gen

dhfr tại 3 tỉnh Quảng Bình, Quảng Trị và Thừa Thiên Huế. Đánh giá kết quả

phân tích ở vị trí 108 của gen dhfr cho thấy trong 162 mẫu có 34 mẫu

(20,99%) mang kiểu gen nhạy, 89 mẫu (54,94%) mang kiểu gen đột biến và 39 mẫu (24,07%) nhiễm phối hợp kiểu nhạy và kiểu đột biến (Bảng 3.19).

Bảng 3.19. Tỷ lệ mẫu bệnh nhân nhạy, kháng với pyrimethamin Vị trí 108 Kiểu nhạy Kiểu đột biến Nhiễm phối hợp Vị trí 108 Kiểu nhạy Kiểu đột biến Nhiễm phối hợp

Số l-ợng mẫu (162 mẫu) 34 89 39

Tỷ lệ % 20,99 54,94 24,07

Đánh giá đáp ứng thuốc Nhạy Kháng (79,01%)

Tỷ lệ KST nhạy và kháng trong quần thể đ-ợc xác định dựa trên tần suất xuất hiện của kiểu gen nhạy, kiểu gen đột biến trên mẫu nhiễm đơn và nhiễm phối hợp. Tổng số xác định có 201 lần xuất hiện KST nhạy và kháng trong đó tỷ lệ KST mang kiểu gen đột biến của quần thể P. falciparum tại khu

vực Bắc Tr-ờng Sơn Việt Nam là 63,68% (Bảng 3.20). Kết quả này cho thấy mặc dù tỷ lệ bệnh nhân đ-ợc đánh giá kháng với pyrimethamin là 79,01% nh-ng thực tế tỷ lệ KST mang gen đột biến kháng trong quần thể thấp hơn.

Bảng 3.20. Tỷ lệ P. falciparum mang kiểu gen nhạy và đột biến

kháng pyrimethamin trong quần thể

Gen dhfr Kiểu gen nhạy Kiểu đột biến

Số l-ợng 73 128

Tỷ lệ % 36,32 63,68

Tổng 201

Kết quả điện di sản phẩm PCR một số mẫu bệnh nhân mang kiểu gen

đột biến kháng và kiểu gen nhạy ở vị trí 108 trên gen dhfr (Hình 3.25).

Hình 3.25. ảnh điện di phát hiện đột biến ở vị trí 108 của gen dhfr

L: thang chuẩn phi X174 DNA/BsuRI (HaeIII) Marker 9

K1, 3D7: Các đơn dòng chuẩn kháng và nhạy với pyrimethamin (-) : chứng âm

Mẫu B2: bệnh nhân nhiễm phối hợp KSTSR kháng và nhạy

Mẫu B10, 18, 21: các mẫu mang kiểu gen đột biến kháng pyrimethamin; Mẫu B14: bệnh nhân mang kiểu gen nhạy pyrimethamin

L K1 3D7 (-) B2 B10 B14 B18 B21

311 bp

R S R S R S R S R S R S R S R S

413bp

Theo kết quả nghiên cứu của nhiều tác giả cho thấy mức độ kháng tăng cao khi bệnh nhân nhiễm P. falciparum mang đột biến tại vị trí 108 kết hợp

với các vị trí đột biến khác [124, 126, 146]. Kết quả phân tích 162 mẫu tại khu vực Bắc Tr-ờng Sơn, Việt Nam cho thấy có nhiều mẫu bệnh nhân có đột biến tại 2 và 3 vị trí trên gen dhfr (Bảng 3.21).

Bảng 3.21. Số l-ợng đột biến điểm và mức độ đáp ứng với pyrimethamin

Kiểu phối hợp đột biến Số l-ợng mẫu

Tỷ lệ

(%) Đáp ứng thuốc

Khơng có đột biến 34 20,99 Nhạy 20,99% Đột biến đơn ở vị trí 108 12 7,41 Kháng trung bình (38,89%) Đột biến ở vị trí 108 và 51 3 1,85 Đột biến ở vị trí 108 và 59 44 27,16 Đột biến ở vị trí 108 và164 4 2,47 Đột biến ở vị trí 108, 59 và 164 11 6,79 Kháng cao (40,12%) Đột biến ở vị trí 108, 51 và 59 54 33,33

Trong 162 mẫu bệnh nhân có 34 mẫu (20,99%) mang kiểu gen nhạy ở cả 4 vị trí. Theo Peterson D.S. và cs [124] thì các mẫu này còn nhạy với pyrimethamin, đáp ứng thuốc t-ơng đ-ơng với IC50 < 0,7g/ml trong in vitro, (IC50 – Nồng độ ức chế 50%); có 63 mẫu (38,89%) mang đột biến đơn tại vị trí 108 hoặc đột biến tại vị trí 108 kết hợp với 1 vị trí đột biến ở vị trí khác, các mẫu này đ-ợc xác định là có mức độ kháng trung bình và có 65 mẫu (40,12%) mang đột biến tại vị trí 108 kết hợp với đột biến tại 2 vị trí khác, các mẫu này đ-ợc xác định có mức độ kháng cao với pyrimethamin.

Pyrimethamin ban đầu đ-ợc sử dụng d-ới dạng đơn thuần, sau đó đ-ợc sử dụng phối hợp với sulfadoxin gọi là thuốc Fansidar. Fansidar đ-ợc sử dụng rộng rãi ở Việt Nam cũng nh- trên thế giới do có khả năng điều trị và dự phòng. Sau thời gian dài sử dụng, đến những năm 1990, ng-ời ta đã nhận thấy

P. falciparum kháng cao với pyrimethamin [3, 5, 51]. Kết quả phân tích trên các mẫu bệnh nhân nhiễm P. falciparum tại ba tỉnh thuộc khu vực Bắc Tr-ờng Sơn, Việt Nam cho thấy tỷ lệ bệnh nhân kháng với pyrimethamin còn rất cao (79,01%), t-ơng tự nh- kết quả nghiên cứu của Ngơ Việt Thành (1998) [44], tại Bình Ph-ớc tỷ lệ bệnh nhân có đột biến kháng với pyrimethamin là 78,95% nh-ng thấp hơn so với kết quả nghiên cứu của Bùi Quang Phúc tại Ninh Thuận [36] tỷ lệ kháng là 89,6%; của Biswas S (2003) nghiên cứu tại ấn Độ tỷ lệ kháng là 87,5% [71]. Theo Rie Isozumi và cs nghiên cứu tại Bình Ph-ớc bằng ph-ơng pháp giải trình tự gen cho thấy tỷ lệ bệnh nhân mang đột biến kháng tại vị trí 108 ở giai đoạn từ 2001 đến 2007 tăng từ 94,7% năm 2001 lên đến 100% vào năm 2007 [131].

Với một số kết quả nghiên cứu đánh giá tỷ lệ kháng pyrimethamin trên

in vitro ở một số nghiên cứu tr-ớc đây nh- của Nguyễn Ph-ơng Dung (1996)

[5] tại Khánh Vĩnh Khánh Hòa cho thấy tỷ lệ kháng là 67,8%, Nông Thị Tiến (2003) [51] tại Đắc Lắc có tỷ lệ kháng là 71,8%. Tỷ lệ kháng đ-ợc phát hiện bằng kỹ thuật PCR của các tác giả khác tại Bình Ph-ớc là 78,95%, Ninh Thuận là 89,6% và kết quả nghiên cứu tại khu vực Bắc Tr-ờng Sơn là 79,01% cho thấy P. falciparum kháng cao với pyrimethamin ở hầu hết các vùng sốt rét l-u hành ở n-ớc ta.