Vật liệu nghiên cứu

2.3.1. Dụng cụ và hóa chất cho kỹ thuật xét nghiệm lam máu

+ Kính hiển vi, lam kính, kim chích máu, giá để lam, bơng + Dung dịch giemsa mẹ, dung dịch đệm, n-ớc cất, cồn 90o và 70o + Giấy thấm Whatman 3MM (để thu thập mẫu máu)

2.3.2. Thiết bị và hóa chất tách chiết ADN

+Tủ lạnh - 40C, -200C bảo quản mẫu và hóa chất

+ Các bộ micropipet (hãng Gilson – Pháp, Eppendorf - Đức)

+ Máy ly tâm tốc độ cao (Centrifuge 5415R - hãng Eppendorf - Đức) + Tủ ấm (hãng Menmert – Thổ Nhĩ Kỳ)

+ Máy lắc, máy khuấy từ Rotolab (hãng OSI, Pháp) + Cân phân tích kỹ thuật (hãng Sartorius - Đức) + Máy đo pH (HM-16S của hãng TOA, Nhật Bản)

+ ống Eppendorf 1,5 ml (hãng Corning -Mỹ, Watson-Nhật)

+ Đầu típ 1ml, 200l, 20l và 10l (Corning, Thermoscientific -Mỹ) + PBS; Saponin; Chelex resin 100, Ethanol... (hãng Sigma, Takara) + Bộ kít tách ADN (QIAamp DNA blood mini KIT - QIAGEN -Mỹ).

2.3.3. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất để tiến hành phản ứng PCR

+ Máy PCR (AB 9700 hãng Applied Biosystems, Eppendorf Đức). + Các bộ micropipet (hãng Gilson – Pháp, Eppendorf-Đức)

+ Máy lắc Rotolab (hãng OSI- Pháp)

+ Tube PCR 0,2ml (hãng Corning, Thermoscientific- Mỹ)

+ Đầu típ 1ml, 200l, 20l và 10l (Corning, Thermoscientific -Mỹ) + Các cặp mồi để chẩn đốn, phân biệt 4 lồi KSTSR P. falciparum, P.

vivax, P. malariae, P. ovale.

+ Các cặp mồi xác định kiểu gen của P. falciparum ở locus msp1, msp2 và glurp.

+ Các cặp mồi xác định kiểu gen của P. vivax ở locus Pvcs và Pvmsp1. + Các cặp mồi xác định đột biến của P. falciparum kháng với một số

loại thuốc sốt rét.

Các mồi đ-ợc đặt tổng hợp từ hãng Geneworks - úc; Sigma, Invitrogen- Mỹ, Takara - Nhật. (Trình tự các cặp mồi đ-ợc trình bày ở phần sau) + dNTPs ( dATP, dCTP, dGTP, dTTP) (hãng Fermentas - Đức)

+ Taq DNA- polymerase (Viện Sốt rét - KST - CTTƯ sản xuất)

+ 10 X PCR buffers, MgCl2 25 mM (hãng Fermentas - Đức) + Các enzym giới hạn AluI và BstNI (hãng Fermentas)

+ N-ớc khử ion (Viện Sốt rét - KST - CTTƯ sản xuất bằng hệ thống EASYpure II- hãng Thermoscientific- Đức)

+ Chứng d-ơng là các đơn dòng chuẩn nh-: K1, 3D7, D10, 7G8, W2, T96 (Nguồn từ Viện nghiên cứu Y học nhiệt đới, Tr-ờng đại học Nagasaki, Nhật Bản và Khoa Y học nhiệt đới, Tr-ờng đại học Mahidol, Thái Lan)

2.3.4. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất cho điện di phân tích kết quả PCR

+ Lị vi sóng

+ Bộ điện di (Mulpid-one- Nhật Bản, Apelex-Pháp) + Bộ micropipet (hãng Gilson), đèn soi gel (đèn UV)

+ Hệ thống chụp và phân tích ảnh Bioimaging systems SDS – 8000 + Máy in nhiệt Mitsubishi, giấy in nhiệt (Nhật)

+ Dung dịch đệm điện di TBE (1X, 10X)- Invitrogen-Mỹ + Agarose (TopVisionTM LE GQ, hãng Fermentas)

+ Dung dịch ethidium bromide 10mg/ml (hãng Sigma)

+ Các loại thang đo kích th-ớc phân tử ADN nh-: GenrulerTM100bp, 1kb, 50bp DNA ladder, Marker BR322 DNA/BsuRI, phiX174 DNA/BsuRI (HaeIII) Marker (hãng Fermentas)