2.4. Ph-ơng pháp nghiên cứu
2.4.2. Mẫu nghiên cứu
2.4.2.1. Ph-ơng pháp thu thập mẫu
- Tiến hành điều tra thu thập lam máu và mẫu máu trên giấy thấm Whatman 3 MM ở ng-ời dân sống trong vùng sốt rét l-u hành tại 7 xã thuộc 3 huyện Lệ Thủy tỉnh Quảng Bình, H-ớng Hóa tỉnh Quảng Trị và huyện A L-ới tỉnh Thừa Thiên Huế. Lam máu và mẫu máu trên giấy thấm đ-ợc thu thập bằng cách lấy máu đầu ngón tay để làm tiêu bản lam máu, đồng thời lấy 30- 50 l máu nhỏ lên giấy Whatman3MM.
- Sử dụng kỹ thuật xét nghiệm lam máu nhuộm giemsa theo kỹ thuật th-ờng quy của Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung -ơng [55] để phát hiện và định loại KSTSR, bệnh nhân có KSTSR đ-ợc điều trị thuốc sốt rét theo phác đồ h-ớng dẫn điều trị của Bộ Y tế [2].
- Mẫu máu trên giấy thấm đ-ợc để khô tự nhiên. Mỗi mẫu máu bảo quản riêng biệt trong túi nylon. Do điều kiện khó khăn ở thực địa và do những chuyến đi dài ngày vào vùng sâu, vùng xa nên chúng tôi chú ý:
a/ Để tách rời riêng từng mẫu trong túi nylon tránh tạp nhiễm chéo.
b/ Điều kiện thực địa máu lâu khô, việc bảo quản mẫu địi hỏi để khơ hoàn toàn nhằm tránh đ-ợc vi khuẩn và nấm mốc phát triển. Khi để khô tự nhiên ở điều kiện thực địa phải tránh các loại côn trùng đến ăn (ruồi, muỗi, kiến …).
2.4.2.2. Ph-ơng pháp chọn mẫu
Chọn mẫu nghiên cứu có chủ đích
- Chọn mẫu để phân tích thành phần, cơ cấu lồi theo kỹ thuật PCR gồm: + 210 mẫu có KSTSR theo kết quả xét nghiệm lam máu nhuộm giemsa ở 3
tỉnh đ-ợc phân tích định loại lồi bằng kỹ thuật PCR lồng.
+ Phân tích 1.174 mẫu âm tính theo kết quả xét nghiệm lam máu nhuộm giemsa thu ở tỉnh Thừa Thiên Huế bằng kỹ thuật PCR.
- Chọn mẫu để phân tích kiểu gen, xác định tính đa hình của KSTSR gồm các mẫu bệnh nhân nhiễm P. falciparum và P. vivax (ở cả mẫu nhiễm
đơn và nhiễm phối hợp) đ-ợc lựa chọn. Cụ thể nh- sau:
+ 162 mẫu bệnh nhân nhiễm P. falciparum đ-ợc sử dụng để phân tích tính đa hình di truyền của quần thể P. falciparum.
+ 85 mẫu bệnh nhân nhiễm P. vivax đ-ợc sử dụng để phân tích tính đa hình di truyền của quần thể P. vivax.
- Lựa chọn mẫu phân tích đột biến kháng thuốc: 162 mẫu bệnh nhân nhiễm P. falciparum đ-ợc sử dụng để phân tích đột biến điểm liên quan đến tính kháng một số loại thuốc sốt rét.