2 NH4OH + HSO4 = (NH4)SO4 + HO Chuẩn HSO4dư bằng NaOH:
2.2.2.9Xác định hàm lượng polyphenol tổng số
Nguyên tắc
Xử lý mẫu với một hỗn hợp gồm Cacboxyl methyl cenlluloza (CMC) và Ethylen diamin tetraacetic acid (EDTA). Phản ứng của Polyphenol với các ion sắt trong môi trường kiềm sẽ tạo ra phức chất có màu đỏ. Đo độ hấp thụ của phức chất trên dựa trên một mẫu trắng.
Hoá chất
Cacboxyl methyl cenlluloza /Ethylen diamin tetraacetic acid 10g/l
Cho từ từ 10g Sodium Cacboxyl methyl cenlluloza (BDH ref 27649) và 2g
Disodium Ethylen diamin tetraacetic acid vào 500ml nước cất, khuấy đều. Khi toàn bộ hoá chất dạng rắn hoà tan hết, để yên trong 1-3 giờ hoặc khuấy hoặc làm đồng nhất, sau đó chuyển vào một bình định mức 1 lít và định mức
đến vạch bằng nước cất, nếu thấy cần thiết có thể làm trong dung dịch bằng cách ly tâm.
Dung dịch Fe3+ 5,6g/l
Hoà tan 3,5g Amonium citrat sắt (chứa 16% sắt) (BDH ref 27882) vào trong 100ml nước cất. Dung dịch này phải được chuẩn bị lại sau mỗi tuần (có thể thường xuyên hơn) để đảm bảo hoàn toàn trong.
Amoniac
Hoà tan 100ml amoniac đậm đặc ( d=0,92g/ml) thành 300ml bằng nước cất.
Dụng cụ
- Máy so màu quang phổ : bước sóng thuộc khoảng nhìn thấy, cuvét 10mm - Máy ly tâm
- Các bình định mức với các nút thuỷ tinh: 25ml, 50ml, 100ml, 1000ml - Pipet có chia vạch: 0,5ml; 1ml; 10ml; 25ml
- Các pipet 1ml và 10ml
Chuẩn bị mẫu
- Loại CO2của bia bằng cách lắc mẫu
- Làm trong bia đục hoặc dịch đường đục bằng cách ly tâm ( không làm trong bằng cách lọc).
- Nhịêt độ của bia đã loại CO2 là 20oC
Tiến hành
Dùng pipét hút chính xác 10ml bia hoặc dịch đường và 8 ml CMC/EDTA vào trong bình định mức 25ml , lắc đều.
Mẫu thí nghiệm:
- Thêm 0,5 ml Fe3+ vào mẫu đo ở trên và lắc đều
P = A. 820
- Định mức đến 25ml hoặc 50ml bằng nước cất và lắc đều.
Mẫu trắng:
- Làm tương tự mẫu thí nghiệm nhưng không cho Fe3+
Sau 10 phút đo độ hấp thụ tại 600nm bằng máy so màu quang phổ . Cần phải đảm bảo rằng dung dịch đo là trong suốt
Pha loãng mẫu: Nếu hàm lượng polyphenol trong mẫu lớn hơn 400mg/l thì cần pha loãng mẫu. ở đây là sử dụng bình định mức 50ml đối với tất cả dung dịch mẫu và mẫu trắng. Làm tương tự như phần xác định ở dưới đây chỉ khác là: sau khi thêm CMC và Fe3+, thêm 25ml nước, lắc đều sau đó thêm amoniac.
Tính toán kết quả
Hàm lượng Polyphenol được tính theo công thức:
Trong đó:
P : Hàm lượng polyphenol, mg/l A : Độ hấp thụ tại bước sóng 600nm 820 : Hệ số quy đổi
F : Hệ số pha loãng (=2 nếu sử dụng bình định mức 50ml)