Nghiên cứu hoá mô miễn dịch

Một phần của tài liệu nghiên cứu hình thái học u biểu mô buồng trứng (Trang 54 - 55)

- Xơ hoá Phù buồng trứng

U bao gồm một hoặc hai buồng trứng có di căn vi thể vào phúc mạc di căn ra ngoài khung chậu và/hoặc di căn hạch lympho.

2.2.5. Nghiên cứu hoá mô miễn dịch

+ 102 tr−ờng hợp đ−ợc chọn ngẫu nhiên để nhuộm HMMD với các dấu ấn CK7, CK20, P53, Ki67, ER, PR và Her2/neu với 914 tiêu bản (gồm 714 tiêu bản bệnh và 200 tiêu bản chứng) tại Trung tâm Giải phẫu bệnh - Tế bào học Bạch mai và Khoa GPB Bệnh viện K Hà nội theo ph−ơng pháp ABC bao gồm:

• 15 tr−ờng hợp u chế nhầy ác tính • 22 tr−ờng hợp u thanh dịch ác tính • 12 tr−ờng hợp u tế bào sáng ác tính • 05 tr−ờng hợp u Brenner ác tính

• 16 tr−ờng hợp ung th− biểu mô không biệt hoá • 05 tr−ờng hợp u giáp biên chế nhầy

• 10 tr−ờng hợp u giáp biên thanh dịch

Quy trình nhuộm HMMD đợc tiến hành theo các bớc sau :

* Bệnh phẩm sau khi cố định trong formol 10%, chuyển đúc trong paraffin, cắt mảnh dày 3-4 μm và dán lên lam kính (lam kính đã xử lý với dung dịch Silane). * Sấy khô tiêu bản có lát cắt ở tủ ấm 37 độ C: 12 giờ (qua đêm).

* Sau đó đ−ợc tẩy paraffin rồi nhúng vào n−ớc cất 2 lần, mỗi lần 5 phút. * Khử peroxidase nội sinh bằng dung dịch 0,6% H2O2 trong 5 phút. * Rửa tiêu bản bằng n−ớc cất 2 lần, mỗi lần 2 phút.

* Bộc lộ kháng nguyên bằng nồi áp suất hoặc lò vi sóng * Rửa tiêu bản bằng n−ớc cất 2 lần, mỗi lần 2 phút.

* Rửa tiêu bản bằng dung dịch TBS 2 lần, mỗi lần 5 phút.

* Khử các protein không đặc hiệu với huyết thanh ngựa th−ờng 1% trong 5 phút * Phủ kháng thể thứ nhất (primary antibody) trong 60 phút.

* Rửa tiêu bản bằng dung dịch TBS 2 lần, mỗi lần 5 phút.

* Phủ kháng thể bắc cầu (biotinylated secondary antibody) trong 30 phút. * Rửa tiêu bản bằng dung dịch TBS 2 lần, mỗi lần 5 phút.

* Phủ phức hợp Avidin-Biotin Complex (ABC) trong 30 phút. * Rửa tiêu bản bằng dung dịch TBS 2 lần, mỗi lần 5 phút.

* Làm hiện màu bằng dung dịch 3-3’diaminobenzidine (DAB) 10 phút. * Rửa n−ớc chảy 5 phút.

* Nhuộm nhân bằng hematoxylin trong 30 giây, khử n−ớc, gắn lamen.

Một phần của tài liệu nghiên cứu hình thái học u biểu mô buồng trứng (Trang 54 - 55)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(178 trang)