gia cầm
4.2.3.1. Triệu chứng lâm sàng của gà gây nhiểm virus cúm A/H5 biến chủng mới
Sau khi công cường độc, kết quả theo dõi triệu chứng lâm sàng đánh giá theo thang điểm của OIE của gà được gây nhiễm virus CGC H5N1 clade 2.3.2.1c, virus CGC H5N6 clade 2.3.4.4 a, clade 2.3.4.4 b được tổng hợp chi tiết ở phụ lục 12 và biểu diễn ở hình 4.24.
Qua theo dõi thí nghiệm cho thấy:
Gà đối chứng đều khỏe mạnh, tăng trọng tốt và không có bất cứ biểu hiện bất thường nào. Trong khi tất cả gà gây bệnh thực nghiệm với virus CGC chết với tỷ lệ 100% vào ngày thứ 5, cụ thể:
Gà gây nhiễm virus H5N1 clade 2.3.2.1c có điểm lâm sàng trung bình cao nhất là 2.72, một nửa số gà gây nhiễm virus có biểu hiện triệu chứng bệnh vào ngày đầu tiên sau CCĐ với triệu chứng: sốt cao, ủ rũ, mệt mỏi, chảy nước mắt, nước mũi, thở khò khè, vảy mỏ. Có 2/10 gà chết đột ngột không quan sát thấy triệu chứng lâm sàng. 70% (7/10 con) số gà chết vào ngày thứ 2 và 30% (3/10 con) còn lại chết vào ngày thứ 3. Như vậy, gà có biểu hiện triệu chứng rất sớm và chết nhanh, tỷ lệ chết 100% sau 3 ngày CCĐ.
Gà gây nhiễm virus CGC H5N6 clade 2.3.4.4 a có điểm lâm sàng trung bình thấp nhất là 2.29, diễn biến về biểu hiện lâm sàng chậm. Gà bắt đầu có biểu hiện triệu chứng vào ngày thứ 2 sau gây bệnh với tỷ lệ 30% (3/10 con), 70% gà đến ngày thứ 3 mới biểu hiện triệu chứng. Các triệu chứng gồm: ủ rũ, mệt mỏi, nước mắt, nước mũi chảy, thở khò khè, vảy mỏ, gà phải rướn cao mỏ để thở, mắt bị viêm, mặt phù nề, mào tích tím tái dày lên do thủy thũng, dưới da vùng chân có xuất huyết. Ngoài ra, gia cầm còn có biểu hiện thần kinh như run rẩy, đi không vững, ủ rũ, nằm li bì tụ đống với nhau, một số bãi phân và lẫn máu. Gà chết nhiều nhất vào ngày thứ 4 với tỷ lệ 60% (6/10 con) và đạt đến 100% vào ngày thứ 5.
Gà gây nhiễm virus CGC H5N6 clade 2.3.4.4b có điểm lâm sàng trung bình là 2.50, các biểu hiện lâm sàng biểu hiện tương tự nhưng xảy ra chậm hơn so với gà gây nhiễm virus H5N1 clade 2.3.2.1c và nhanh hơn so với gà gây nhiễm virus H5N1 clade 2.3.4.4a.
Qua kết quả trên cho thấy các virus H5N1 2.3.2.1c, H5N6 2.3.4.4a, 2.3.4.4b gây triệu chứng trên gà khá tương đồng với các chủng virus H5N6 ở các nước khác như Trung Quốc, Lào với các triệu chứng chủ yếu là: ủ rũ, lông dựng, sưng mặt, sung huyết, xuất huyết mào tích và chân, xuất huyết dưới da, phù xung quanh cẳng chân, khuỷu chân và triệu chứng thần kinh (Sun & cs., 2016; Xiang & cs., 2017; Butler & cs., 2016). Nhiều triệu chứng do virus H5N6 cũng xảy ra tương tự như do virus H5N6 clade 2.3.2.1 gây ra như phù mí mắt, ít vận động, giảm ăn, khát nước, lông dựng, tím mào, ngoẹo cổ và các triệu chứng thần kinh
(Jiao & cs., 2016). Tuy nhiên ngoài các triệu chứng trên, các triệu chứng viêm mắt, sưng phù mặt là các triệu chứng khá phổ biến ở gà nhiễm virus H5N6 của Việt Nam. Điều đáng chú ý là với các virus H5N1 2.3.2.1c thường có triệu chứng hô hấp nặng như chảy nhiều nước mắt, nước mũi, hen khẹc, vảy mỏ... thì các virus H5N6 ít có hiện tượng này. Sự khác biệt về kiểu gây bệnh này cũng có thể giải thích cho hiện tượng gà nhiễm virus H5N1 2.3.2.1c chết nhanh hơn gà nhiễm virus H5N6 do các dịch tiết ở đường hô hấp quá nhiều làm tắc đường thở và gây chết đột ngột gà. Hiện tượng này cũng được thấy ở trong các nghiên cứu gây bệnh trên gà trước đây với các virus H5N1 (Suzuki & cs., 2009). Từ kết quả trên cho thấy, điểm trung bình về triệu chứng giữa 3 nhóm gà thí nghiệm có sự khác nhau nhưng các triệu chứng tương tự nhau. Những triệu chứng lâm sàng quan sát được trong thí nghiệm đều phù hợp với đặc điểm của gà bị nhiễm CGC độc lực cao đã được nêu ra (OIE, 2015; Nguyễn Bá Hiên, 2014). Như vậy trong chẩn đoán bệnh CGC ở gà, những biểu hiện bệnh như gà xù lông, ít vận động, mào tích tím tái, ngoẹo cổ, xuất huyết dưới da, chết ồ ạt, cho phép suy đoán nguyên nhân của bệnh là do nhiễm virus CGC.
4.2.3.2. Bệnh tích đại thể của gà được gây bệnh thực nghiệm với virus cúm A/H5 biến chủng mới
Sau khi kết thúc thí nghiệm công cường độc, tiến hành mổ khám gà thí nghiệm để kiểm tra bệnh tích đại thể:
Gà nhóm thí nghiệm clade 2.3.2.1c có bệnh tích chủ yếu xuất hiện ở đường hô hấp (hình 4.25): niêm mạc xoang mũi, miệng bị sung huyết, chảy dịch (hình 4.25A); khí quản xuất huyết nặng (hình 4.25B); phổi phù, sung huyết, xuất huyết (hình 4.25C). Ngoài ra, còn một số gà quan sát thấy: tuyến tụy xuất huyết (hình 4.25D); trực tràng xuất huyết (hình 4.25E); phù,xuất huyết dưới da vùng đầu (hình 4.25F); não sung huyết (hình 4.25G); xuất huyết mỡ vành tim (hình 4.25H). Tuy nhiên, một số con không biểu hiện bệnh tích rõ ràng có thể do chết quá cấp tính nên không quan sát thấy tổn thương về đại thể.
Gà nhóm thí nghiệm clade 2.3.4.4a, bệnh tích cũng tập trung ở đường hô hấp tương tự như nhóm clade 2.3.2.1c nhưng diễn biến chậm hơn, số lượng gà có biểu hiện bệnh tích nhiều hơn, cụ thể (hình 4.25): da chân xuất huyết (hình 4.25I); khí quản thấy chứa nhiều dịch, xuất huyết (hình 4.25J); phổi phù, sung
huyết và xuất huyết (hình 4.25K); kiểm tra niêm mạc ruột, 7/10 con có các đám xuất huyết (hình 4.25L); 8/10 con có xuất huyết ở hậu môn (hình 4.25M); 4/10 con phù, xuất huyết dưới da vùng đầu (hình 4.25N); 5/10 con não xuất huyết (hình 4.25O); 6/10 con có mỡ vành tim xuất huyết (hình 4.25P).
Gà nhóm thí nghiệm clade 2.3.4.4b, bệnh tích cũng tập trung ở đường hô hấp tương tự như 2 nhóm trên, với các bệnh tích cụ thể như: mào tích tím tái, xuất huyết (hình 4.25Q); khí quản xuất huyết (hình 4.25R); phổi phù và xuất huyết (hình 4.25S); tuyến tụy xuất huyết (hình 4.25T); túi Fabricius phù Tuyến (hình 4.25U); lách phù, xuất huyết (hình 4.25V); não xuất huyết (hình 4.25W); xuất huyết mỡ vành tim (hình 4.25X).
Như vậy, qua kết quả thí nghiệm cho thấy bệnh tích chủ yếu của gà được gây bệnh thực nghiệm với virus cúm H5N1 clade 2.3.2.1c, H5N6 clade 2.3.4.4a và 2.3.4.4b xuất hiện ở nhiều cơ quan trong cơ thể với đặc trưng là phù, sung huyết và xuất huyết.
Trong đó, bệnh tích trầm trọng nhất tập trung ở đường hô hấp, gồm xoang mũi, xoang miệng, khí quản và phổi. Khí quản thấy chứa nhiều dịch, xuất huyết; phổi phù, sung huyết và xuất huyết rất nặng. Điều này giải thích cho các triệu chứng quan sát được khi theo dõi lâm sàng như: khó thở, chảy nước mũi, vẩy mỏ. So sánh với gà được gây bệnh thực nghiệm với virus CGC H5N1 (Pfeiffer & cs., 2009), bệnh tích đại thể ở phổi giống nhau, trong khi bệnh tích ở xoang mũi và miệng không được đề cấp đến. So với kết quả khảo sát của Lê Văn Năm (2004), về bệnh tích đại thể bệnh CGC ở một số cơ sở chăn nuôi các tỉnh phía Bắc từ phổi viêm cata, xuất huyết đến viêm thể fibrin. Trên gà tây gây bệnh thực nghiệm với virus CGC FAV002/H5N1, cũng có bệnh tích chủ yếu là viêm màng phổi dạng fibrin trong khi ở ngan còn thấy phù phổi và sung huyết ở khí quản (Berhane & cs., 2016).
Tần số xuất hiện bệnh tích ở đường tiêu hóa cũng chiếm tỷ lệ cao với đặc điểm thành ruột dầy, có các đám xuất huyết ở vùng niêm mạc và mảng Peyer vùng ruột non. Lớp niêm mạc manh tràng, vùng hậu môn, điểm nối hồi manh tràng cũng có biểu hiện sung huyết, xuất huyết.
Clade 2.3.2.1c Clade 2.3.4.4a Clade 2.3.4.4b
Ghi chú: (A) xoang mũi, miệng, chảy dịch; (B; R) khí quản xuất huyết; (C; K; S) phổi phù, xuất huyết; (D; T) tuyến tụy xuất huyết; (E) trực tràng xuất huyết; (F;N) da vùng đầu phù, xuất huyết; (G) não sung huyết; (H; P; X) mỡ vành tim xuất huyết; (I) da chân xuất huyết; (J) khí quản chứa dịch, xuất huyết; (L) ruột xuất huyết; (M) hậu môn xuất huyết; (O; W) não xuất huyết;(Q) mào tích xuất huyết; (U) túi Fabricius phù; (V) lách phù, xuất
huyết; Mũi tên chỉ các điểm xuất huyết ở tổ chức.
Hình 4.25. Bệnh tích đại thể của gà được gây bệnh thực nghiệm với virus cúm A/H5 biến chủng mới
A B C D E F G H I Q R J K S L T M U V O N X P W
Điều này phù hợp với các triệu chứng ỉa chảy, phân lẫn máu đã quan sát được khi theo dõi lâm sàng. Những bệnh tích này giống với gà bị nhiễm virus CGC ở ngoài thực địa như với các đặc điểm viêm xuất huyết đường ruột, đặc biệt vùng lỗ huyệt, điểm nối hồi manh tràng, dạ dày tuyến và niêm mạc tá tràng (Lê Văn Năm, 2004). Đối với gà gây bệnh thực nghiệm với virus cúm H5N1, bệnh tích chỉ được miêu tả xuất huyết mảng Peyer và điểm nối hồi manh tràng (Pfeiffer & cs., 2009).
Giải thích cho những bệnh tích xuất hiện nhiều ở đường hô hấp và ruột là quá trình xâm nhập và nhân lên của virus CGC ở các cơ quan này đầu tiên khi chúng hít phải virus. Trypsin giống những enzyme ở tế bào biểu mô của đường hô hấp và tiêu hóa cho phép phân tách hemagglutinin bề mặt, virus xâm nhập, nhân lên, giải phóng các virion trong đường hô hấp và đường tiêu hóa. Sau đó các virion này xâm nhập vào lớp hạ niêm mạc rồi đi vào mao mạch. Virus nhân lên trong tế bào nội mạc, phát tán ra toàn bộ cơ thể thông qua hệ tuần hoàn và bạch huyết dẫn tới gây nhiễm, nhân lên ở nhiều loại tế bào trong các cơ quan nội tạng, não và da (Swayne & Halvorson, 2008).
Qua mổ khám thấy những tổn thương đại thể quan sát được đã lý giải các triệu chứng lâm sàng của gà theo dõi được sau khi gây bệnh. Bệnh tích đại thể biểu hiện ở gà cũng phản ánh sự tấn công của virus CGC H5N1 clade 2.3.2.1c, H5N6 clade 2.3.4.4a và 2.3.4.4b đã gây ra các biểu hiện có tính toàn thân. Do đó khi mắc bệnh CGC H5N1, H5N6 biểu hiện bệnh lý thường nặng nề dẫn đến tỷ lệ chết cao.
Kết quả quan sát thấy gà chết ở thể cấp tính không có biểu hiện triệu chứng và bệnh tích trong nghiên cứu này hoàn toàn phù hợp với những nghiên cứu trước đây, triệu chứng và bệnh tích bắt đầu xuất hiện từ 48h và rõ rệt lúc 72h sau gây nhiễm với những gà sống sót qua giai đoạn á cấp tính (Suzuki & cs., 2009; Wibawa & cs., 2013). Đối với gà có bệnh tích thì những bệnh tích của gà nhiễm H5N6 clade 2.3.4.4a và clade 2.3.4.4b rất khó phân biệt với nhau và rất khó phân biệt với bệnh tích của gà nhiễm virus H5N1 clade 2.3.2.1c. Tuy nhiên các bệnh tích thu thập được trong nghiên cứu này là khá đầy đủ so với những nghiên cứu trước đây khi chỉ có một số bệnh tích được mô tả như lách sưng to, lốm đốm, viêm phổi đặc, phù, sung huyết và xuất huyết, xuất huyết ở mảng Payer, hạch ruột tịt, xuất huyết điểm màng tim như ở gà nhiễm virus H5N1 clade 2.3.4 (Pfeiffer & cs., 2009), tổn thương hoại tử, xuất huyết ở các cơ quan nội tạng như màng thanh dịch, niêm mạc, lách và gan ở gà nhiễm virus H5N8 clade 2.3.4.4 (Bae & cs., 2015), xuất huyết đinh ghim nhẹ ở mỡ dưới da, sung huyết, xuất
huyết và hoại tử ở phổi, gan to màu hổ phách (Jiao & cs., 2016). Hơn nữa, nhiều nghiên cứu gần đây với virus H5N6 cũng không mô tả các biến đổi bệnh lý khi thực hiện thí nghiệm gây bệnh trên gà (Xiang & cs., 2017).
Đồng thời kết quả cũng phản ánh những biến đổi bệnh lý đại thể của gà mắc CGC H5N6 tương đối giống với những biến đổi bệnh lý của gà mắc cúm H5N1.
4.2.3.3. Bệnh tích vi thể của gà được gây bệnh thực nghiệm với virus cúm A/H5 biến chủng mới
Gà sau khi mổ khám, lấy 15 mẫu ngẫu nhiên làm tiêu bản để kiểm tra bệnh tích vi thể gồm: khí quản, phổi, tuyến tụy, gan, thận, ruột và túi Fabricius. Kết quả tổng thể cho thấy gà thuộc 3 lô gây bệnh các cơ quan nội tạng đều quan sát phát hiện có tổn thương. Gà thuộc lô đối chứng cũng được lấy mẫu kiểm tra bệnh tích vi thể nhưng các cơ quan nội tạng đều bình thường, không có biến đổi bệnh lý.
Clade 2.3.2.1c Clade 2.3.4.4a Clade 2.3.4.4b
Ghi chú: (A) phổi sung huyết, xuất huyết; (B) biểu mô khí quản bong tróc; (C; I) gan xuất huyết; (D) tuyến tụy viêm, xuất huyết; (E) ruột bong tróc niêm mạc; (F; H) fabricius phù, sung huyết; (G) thận xuất huyết; Mũi tên chỉ
các điểm xuất huyết ở tổ chức.
Hình 4.26. Bệnh tích vi thể của gà được gây bệnh thực nghiệm với virus cúm A/H5 biến chủng mới (HE 10x)
A B C D G E F H I
Ở cả 3 nhóm thí nghiệm công cường độc, gà đều có bệnh tích vi thể:
Nhóm gà thí nghiệm công cường độc clade 2.3.2.1c: phổi bị sung huyết, xuất huyết tràn lan, biểu hiện bằng hình ảnh các hồng cầu tập trung lấp đầy mạch quản và tràn lan ở trong lòng các phế quản và phế nang (hình 4.26A). Kể cả ở những con chết không biểu hiện bệnh tích đại thể đều thấy rõ hiện tượng phù. Nguyên nhân là do virus nhân lên trong tế bào nội mạc, phá vỡ tế bào nội mạc gây tổn thương thành mạch đến các thành phần trong lòng mạch thoát ra ngoài trong đó hồng cầu là có thể quan sát rõ nhất. Đồng thời không duy trì được sự cân bằng áp lực thủy tĩnh dẫn đến nước ra khỏi lòng mạch và vào gian bào (Swayne & Halvorson, 2008). Bệnh tích này cũng phù hợp với bệnh tích đại thể khi mổ khám gà có thể thấy hiện tượng xuất huyết rất rõ. Qua đây cho thấy sự tổn thương ở phổi của gà mắc bệnh CGC do virus cúm H5N1 và H5N6 làm phổi suy giảm chức năng vốn có của nó. Trong khi đó, lớp tế bào biểu mô khí quản bong tróc, lông rung bị bong tróc và bào mòn (hình 4.26B). Gan sung huyết, hình thành các điểm xuất huyết trên bề mặt (hình 4.26C).
Nhóm gà thí nghiệm công cường độc clade 2.3.4.4a: tuyến tụy viêm, có các điểm xuất huyết (hình 4.26D). Tế bào hồng cầu tập trung thành từng đám, các tế bào tuyến tụy bị hoại tử. Khi quan sát trong vi trường thấy hình ảnh nhiều đám tế bào bắt màu hồng đều một cách đồng nhất do hoại tử tế bào, nhân tế bào vỡ và tan vào nguyên sinh chất nên không có vết tích của nhân. Ở ruột thấy hiện tượng xuất huyết, các mạch quản bị sung huyết ở 50% số con thuộc 3 lô, đồng thời 1 số con có cấu trúc lông nhung bị phá hủy ở vùng niêm mạc (hình 4.26E), đây cũng là bệnh tích thường gặp của gà mắc CGC thể độc lực cao. Quan sát tiêu bản vi thể ở túi Fabricius có nhiều dịch phù, sung huyết (hình 4.26F). Virus xâm nhập, nhân lên và làm biến đối cấu trúc của túi Fabricius, cụ thể: các nang lympho bị thoái hóa, cấu trúc của nang rời rạc; quan sát các nang lympho thấy cấu trúc đã bị phá hủy, lòng nang giãn rộng, các tế bào biểu mô của nang bị thoái hóa, bắt màu mờ nhạt hơn so với những nang còn nguyên vẹn; gây xuất huyết túi Fabricius.
Nhóm gà thí nghiệm công cường độc clade 2.3.4.4b: quan sát thận thấy hiện tượng xuất huyết từng đám (hình 4.26G); ở túi Fabricius có nhiều dịch phù, sung huyết và xuất huyết (hình 4.26H); gan xuất huyết hình thành nhiều điểm xuất huyết trên bề mặt (hình 4.26I).
So sánh với thí nghiệm gây bệnh thực nghiệm trên gà với virus Cúm H5N1 (VN/203) (Pfeiffer & cs., 2009), ở cơ quan miễn dịch như lách, túi Fabricius các nang lympho cũng bị giảm. Thí nghiệm trên gà tây, ngỗng và ngan với virus FAV002/H5N1 cũng cho thấy sự hoại tử ở lách dẫn đến giảm số lượng các tế bào lympho (Berhane & cs., 2016). Tuy nhiên, ngoài những bệnh tích nêu trên gà nhiễm virus cúm H5N1 còn thấy ở cơ tim có nhiều điểm bị thoái hóa đến hoại tử và sự xâm nhập của một số các tế bào viêm dạng lympho.
Do virus cúm H5N1 và H5N6 đều có độc lực cao, khi công cường độc virus qua đường nhỏ mũi, tấn công mạnh vào hệ hô hấp rồi vào hệ tuần hoàn, gây bệnh cấp tính trên gà nên diễn biến bệnh nhanh, gây ra hiện tượng sung huyết, xuất huyết tràn lan ở các cơ quan phủ tạng như gan, lách, thận, dạ dày tuyến, ruột. Không thấy có sự khác biệt đáng kể nào về bệnh tích đại thể và vi thể giữa 3 clade 2.3.2.1c (H5N1), 2.3.4.4a và 2.3.4.4b (H5N6).
Từ kết quả thu được của thực nghiệm cho thấy khi gà nhiễm virus CGC H5N1 clade 2.3.2.1c, biến chủng H5N6 clade 2.3.4.4a và 2.3.4.4b, bệnh tích thường gặp là phù, sung huyết, xuất huyết và hoại tử ở hầu hết các cơ quan phủ tạng của gà bệnh như: phổi, gan, lách, thận, não, tim, ruột, tụy, túi Fabricius, dạ