Phần 3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.2. Nguyên liệu nghiên cứu
3.2.1. Dụng cụ lấy mẫu
Bảo hộ lao động, bông cồn sát trùng, tăm bông vô trùng, ống đựng dung dịch bảo quản mẫu, khay inok, thùng bảo quản mẫu, đá khô, nhãn dán mẫu, phiếu ghi thông tin mẫu, túi đựng mẫu, thuốc sát trùng, găng tay,...
3.2.2. Hóa chất lấy mẫu
a. Mơi trường bảo quản và vận chuyển mẫu
- Môi trường PBS - Glycerol - Dung dịch đệm phốt phát (PBS)
NaCl 8,00 g
KCl 0,20 g
Na2HPO4 1,44 g KH2PO4 0,24 g Nước cất 1 lít
- Hấp vô trùng PBS sau đó trộn với một lượng tương đương PBS và glycerol vơ trùng. Bổ sung kháng sinh vào 1 lít dung mơi PBS/Glycerol.
Benzylpenicillin 2 x 106 IU/lit Streptomycin 200 mg/lit Gentamicin 250 /lit
- Điều chỉnh pH = 7,4 rồi lấy 4ml vào 1 ống nghiệm 15ml, bảo quản ở 40C.
b. Dụng cụ, hóa chất cho xét nghiệm mẫu bệnh phẩm
- Cabinet Class 2, tủ lạnh, máy Real time PCR: Biorad IQ5; máy spin, máy vortex, máy ly tâm lạnh;
- Micropipettes (1 kênh và 8 kênh) và đầu típ phù hợp;
- Ống Eppendoff 0,5 ml; 1,5 ml không chứa ARNse. Máy đọc kết quả RT- PCR Cerpheid, Biorad IQ5, ABI 7500;
- Nước tinh khiết (Distilled Water);
- Bộ kít chiết tách RNeasy Mini kit - Cat Qiagen. No. 74106 do hãng Qiagen của Đức sản xuất;
- Bộ kít One-Step RT-PCR Qiagen® (Cat No.210210) hoặc Invitrogen One-step RT-PCR (Cat No.11732-020);
- MgCl2 (Promega) 25nM;
- Đoạn mồi (primers) và đoạn dò (probe) để phát hiện virus.
3.2.3. Vacxin và động vật thí nghiệm
- Vacxin CGC H5N1:
+ Vacxin Navet-vifluvac (clade 1) do Công ty NAVETCO sản xuất và cung cấp: số lô 27, NSX 03/01/2018, HSD 02/01/2019.
+ Vacxin Re-5 (clade 2.3.4) do Trung Quốc sản xuất, Công ty RTD cung cấp: số lô 2015009, NSX 09/02/2018, HSD 08/02/2019.
- Động vật thí nghiệm: gà Lương Phượng và vịt bầu cánh trắng được chọn từ đàn khỏe mạnh, khơng có virus cúm type A (kiểm tra mẫu dịch hầu họng bằng phương pháp Real time RT-PCR), chưa tiêm phòng vacxin CGC và khơng có kháng thể cúm H5 (kiểm tra mẫu huyết thanh bằng phương pháp HI).