CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.6.2. Phương pháp xét nghiệm:
Mẫu bệnh phẩm được lấy và phân tích tuân thủ theo các quy trình hiện hành của Trung tâm cũng như các Quy trình, hướng dẫn của Bộ Y tế, của nhà sản xuất:
- Quy trình định lượng Triglycerid [49], [50].
- Quy trình định lượng Cholesterol tồn phần [49], [51]. - Quy trình định lượng LDL-c [49], [52].
- Quy trình định lượng HDL-c [49], [53]. - Quy trình định lượng Glucose [49], [54].
- Các cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo vận hành thiết bị thành thạo trên 10 năm và đã được cấp chứng chỉ vận hành thiết bị.
Hình 2.2: Quy trình thực hiện xét nghiệm mẫu cho bệnh nhân tại Trung tâm DVYT - Các xét nghiệm trong nghiên cứu có tham gia ngoại kiểm định kỳ cho kết quả tương đồng với các phòng xét nghiệm khác trên thế giới (Phụ lục 1) và được thực hiện nội kiểm hàng ngày cùng với các xét nghiệm khác tại Trung tâm.
Hình 2.3: Các thiết bị Cobas 6000 và Cobas 8000 tại Trung tâm Dịch vụ Y tế. - Mẫu được phân tích trên 2 hệ thống máy xét nghiệm Cobas 6000 và Cobas 8000 (hãng Roche). Các thiết bị được bảo dưỡng hàng ngày bởi nhân viên xét nghiệm, định kỳ mỗi 3 tháng/lần do kỹ sư thực hiện và hiệu chuẩn
Khách hàng Mẫu máu Xử lý mẫu Xét nghiệm Kết quả
được thực hiện trên mỗi lô sinh phẩm theo đúng hướng dẫn của nhà sản xuất. Máy Cobas sử dụng nguyên lý đo quang với sự có mặt của các enzyme khác nhau tùy từng xét nghiệm.
2.2.6.3. Nguyên lý xét nghiệm:
- Xét nghiệm Triglycerid: sử dụng phương pháp của Wahlefeld với sự xúc tác của enzyme lipoprotein lipase từ vi sinh vật để thủy phân TG thành glycerol. Sau đó các phản ứng tiếp theo để tạo được chất có màu đỏ dưới sự xúc tác của peroxidase. Cường độ chất màu đỏ tỷ lệ thuận với nồng độ TG có trong mẫu và được đo bằng phương pháp đo quang [50].
- Xét nghiệm Cholesterol total: sử dụng phương pháp đo quang dưới sự xúc tác của enzyme cholesterol esterase, CE bị thủy phân thành cholesterol và acid béo tự do. Các cholesterol sẽ được chuyển hóa qua các bước để tạo thành chất có màu đỏ dưới sự xúc tác của peroxidase. Cường độ đậm nhạt tỷ lệ thuận với nồng độ CT trong mẫu và độ hấp thu được đo hoàn toàn tự động [51].
- Xét nghiệm LDL-c và HDL-c: sử dụng enzyme cholesterol esterase nhưng sản phẩm cuối cùng của LDL-c có màu xanh tím [52] và cũng được đo tương tự như cholesterol total. Xét nghiệm HDL-c cũng sử dụng phương pháp như cholesterol total và LDL-c, nhưng HDL-c sử dụng enzyme PEG – cholesterol esterase và PEG – cholesterol oxidase [53].
- Xét nghiệm Glucose: sử dụng enzyme hexokinase để chuyển hóa glucose thành gluconate – 6 –phosphate và NADPH. Tốc độ NADPH tạo thành trong suốt phản ứng tỷ lệ thuận với nồng độ glucose trong mẫu và cũng được đo bằng phương pháp đo quang [54].
Hầu hết các thiết bị hóa sinh của hãng Roche đều sử dụng nước khử ion, tự động thay hàng ngày để ủ các buồng đo, làm mát bóng đèn, rửa hệ thống… Các mẫu được trộn bằng sóng siêu âm để hạn chế việc nhiễm chéo giữa các mẫu. Mỗi mẫu được đo 70 lần/10 phút ở 2 bước sóng chính và phụ trước khi tính tốn và cho ra kết quả.