C ñ nh: Tùy theo loi gia súc, phương pháp gi tm và ñ iu kin cơ s# mà dùng phương pháp c ñnh thích h p, ñ m b o thu n l i cho thao tác gi t m , an toàn cho công
B ng 7.10 Xác ñ# nh vi khu2n Staphylococcus aureus trong th#t và sn ph2m th#t
Tính ch t M!c ñ K t lu n
Huy t tương ñông c ng sau 4 – 6
gi ; khó di ñ ng 4+ Xác ñnh là S. aureus
Huy t tương ñông ch c sau 6 gi ;
d( di ñ ng 3+ ðư c xem là S. aureus
Huy t tương ñông thành c c nh ,
không liên k t thành kh"i 2+ Nghi ng Huy t tương ñông k t sau 24 gi 1+ Nghi ng
Tính t* l$ khu n l c ñi n hình và khu n l c không ñi n hình có ph n ng dương tính v i huy t tương.
- Tính k t qu : D a vào công th c sau ñ tính s" Staphylococcus aureus trong 1 gam th t 10 (Ca fa + Cb fb)
X (CFU/g) = --- d1+d2
Trong ñó: Ca là t ng s" khu n l c ñi n hình. C b là t ng s" khu n l c không ñi n hình.
fa là t* l$ gi!a s" khu n l c ñi n hình cho th nghi$m kh9ng ñnh (+) so v i s"
khu n l c ñ c trưng.
fb là t* l$ gi!a s" khu n l c không ñ c trưng cho th nghi$m kh9ng ñnh (+) so v i s" khu n l c không ñi n hình.
d1 và d2 là ñ pha loãng th nh t và th hai.
Khi m+u th t có m t ñ S.aureus th p có th ñnh lư ng S. aureus b1ng phương pháp MPN.
e. Phương pháp xác ñ nh t ng s Clostridium perfringens trong th t và ch ph m th t.
- X lý và pha loãng m+u ñư c ti n hành gi"ng ph n trên.
- Nuôi c y m+u: hút 1 ml m+u pha loãng ñưa vào gi!a ñĩa th ch TSC (Tryptose Sulfit Cycloserin), dàn ñ u dung d ch m+u trên m t ñĩa th ch b1ng que thu* tinh hình ch! V và ñ
thêm 15 ml th ch TSC không có lòng ñ tr ng vào, l c ñ u. M0i ñ pha loãng c a m+u ñư c c y vào 2 ñĩa môi trư ng và ph i c y 2 n ng ñ pha loãng liên ti p. Khi th ch ñông, l t ngư c
ñĩa th ch ñ t vào bình y m khí và ñ # 37 0C / 24 gi . Sau th i gian nuôi c y, ch n các ñĩa có khu n l c m u ñen hay ñư c bao quanh b#i vòng ñen. Tính k t qu theo công th c gi"ng v i ph n c a VKHK:
∑ C N1 (CFU / g) = --- (n1 + 0,1n2) x d1
- Kh9ng ñnh: Ch n kho ng 10 khu n l c ñi n hình ki m tra hình thái, di ñ ng, ñ c tính làm tan ch y gelatin, kh năng chuy n hóa nitrat thành nitrit.
- Tính k t qu : D a vào k t qu kh9ng ñnh, n u vi khu n có hình g y, gram âm, không di
ñ ng, làm tan ch y gelatin, lên men sinh hơi ñư ng lactoza, chuy n hóa nitrat thành nitrit ch ng t s có m t c a Cl. perfringen trong m+u phân tích; s" khu n l c Cl. perfringens ñư c xác ñnh s& là n/10. S" khu n l c Cl. perfringens th c t s&ñư c tính như sau:
N1 x n N (CFU/ g) = --- 10
Thí d : Sau khi nuôi c y trên th ch TSC ta ñ m ñư c C1 = 60, C2 = 40, C3= 20, C4 = 12 và d = 10- 3. K t qu kh9ng ñ nh có 8 khu n l c có tính ch t ñ c trưng, v y s" lư ng khu n l c Cl.
perfringens th c t trong m+u ñư c tính như sau: (60 + 40 +20 + 12) x 8
N1 (CFU/ g) = --- = 48 x103 (2+0,2) x 10 -3 x 10
Tiêu chu n v$ sinh cho phép c a các vi sinh v t trong th c ph m nhìn chung thay ñ i tùy theo nhóm vi sinh v t c n phân tích, ñ"i tư ng th c ph m và tiêu chu n v$ sinh an toàn th c ph m c a t%ng qu"c gia. ð"i v i vi sinh v t gây b$nh có m c ñ nguy hi m cao như
Salmonella, tiêu chu n thư ng quy ñnh không cho phép s có m t c a nó trong m t ñơn v kh"i lư ng th c ph m nh t ñnh (25 g). Do v y, vi$c phân tích trong trư ng h p này ch c n
ñnh tính s có m t c a vi sinh v t và ñưa ra nh n ñnh: có m t hay không có m t Salmonella trong 25 g s n ph m. Thông thư ng, tiêu chu n quy ñnh m t ñ vi sinh v t cho phép có m t trong m t kh"i lư ng th c ph m xác ñnh (1 gam hay 1 mililit). Trong trư ng h p này c n ti n hành ñnh lư ng m t ñ c a vi sinh v t có m t trong m+u ki m tra. Tuy nhiên, k t qu phân tích, ñnh lư ng vi sinh v t trong m+u th c ph m thư ng không ph n ánh chính xác m t
sinh v t trên m t s" lư ng m+u xác ñnh và s d ng k t qu phân tích vi khu n mà nh n ñnh k t qu theo 2 kho ng:
- Ch p nh n lô hàng: khi m t ñ vi sinh v t có trong các ñơn v m+u ki m tra (v i n = 5) ñ u ít hơn m t giá tr m (là ch tiêu vi sinh v t cho phép cho m t lo i vi sinh v t nêu ra trong ít hơn m t giá tr m (là ch tiêu vi sinh v t cho phép cho m t lo i vi sinh v t nêu ra trong b ng) trong m t ñơn v m+u s n ph m xác ñnh (1 g hay 1 ml s n ph m). Thí d : tiêu chu n v vi khu n E. coli c a th t l nh ñông theo TCVN 7047-2002 quy ñnh gi i h n t"i ña là 102
s" vi khu n trên 1 gam s n ph m có nghĩa là m = 102.
- Không ch p nh n : khi trong các m+u ki m tra có ít nh t t% 1 ñơn v m+u có m t ñ vi sinh v t cao hơn giá tr m (c/n ≥ 1/5 mà n là s" ñơn v m+u ki m tra v i b" c c n = 5, c là s"ñơn v m+u có k t qu m t ñ vi sinh v t cao hơn giá tr m).
Nh n ñnh k t qu phân tich vi khu n theo 3 kho ng v i nh!ng kho ng gi i h n quy ư c như:
- Kho ng ch p nh n: Khi m t ñ vi sinh v t n1m dư i m t giá tr m (thí d : khi k t qu phân tích là 0,4x102 Staphylococcus aureus / 1 g th t l nh ñông).