3. Nội dung, nguyên liệu và ph− ơng pháp nghiên cứu
3.3.2.1. Kiểm tra vi sinh vật có trong nguồn n−ớc sử dụng cho giết mổ
N−ớc dùng trong giết mổ đ−ợc lấy, bảo quản và phân tích theo tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5995 - 1995 và TCVN 6000 - 1995 (ISO 5667 - 5 và ISO 5667 - 11: 1992)
* Ph−ơng pháp xác định tổng số vi khuẩn hiếu khí
* Lấy mẫu và chuẩn bị mẫu
Dùng chai nút mài 500ml đã đ−ợc hấp, sấy tiệt trùng. Lấy mẫu n−ớc trong bể chứa hay đầu vòi n−ớc sử dụng, thao tác lấy mẫu phải đảm bảo vô trùng. Sau đó chuyển mẫu về phòng thí nghiệm phân tích.
* Tiến hành phân tích
Sử dụng ph−ơng pháp rót thạch để xác định vi khuẩn.
+ Mẫu n−ớc pha loãng ở các đậm độ khác nhau: 10- 1, 10- 2, 10- 3,... Mỗi đậm độ cấy vào hai đĩa petri. Lấy 1ml n−ớc ở từng đậm độ pha loãng khác nhau cho vào giữa đĩa petri, rót vào mỗi đĩa 12 - 15ml môi tr−ờng thạch 46oC, trộn đều thạch với n−ớc pha loãng bằng cách lắc đi lắc lại 2 - 3 lần. Để đĩa thạch đông tự nhiên và úp lại, đem bồi d−ỡng trong tủ ấm 37oC/24h.
Đọc kết quả và tính toán theo công thức: N (VSV/1ml) = n D 1000 C 100 B 10 A+ + +
Trong đó: N: số l−ợng vi khuẩn trong 1ml n−ớc
A: số khuẩn lạc trong 1ml trạng thái ban đầu không pha B: số khuẩn lạc trong 1ml ở độ pha loãng 10- 1
C: số khuẩn lạc trong 1ml ở độ pha loãng 10- 2 D: số khuẩn lạc trong 1ml ở độ pha loãng 10- 3 n: số đậm độ pha loãng
* Ph−ơng pháp xác định Coliforms, Feacal coliform và vi khuẩn E.coli
Mẫu n−ớc kiểm tra pha loãng với các đậm độ: 10- 1, 10- 2, 10- 3,... Mỗi mẫu phải nuôi cấy ít nhất ba đậm độ liên tiếp.
Trường Đại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp …………46
* B−ớc 1: n−ớc không pha (n−ớc nguyên) đ−ợc cấy vào 3 ống môi tr−ờng CLP 1,5% (canh thang Lactose). Với đậm độ pha loãng 10- 1, 10- 2,10-3 ,... mỗi đậm độ nuôi cấy trong 3 ống canh thang CLP 0,5%.
Mỗi ống canh thang CLP 1,5% cho 1ml n−ớc nguyên.
Mỗi ống canh thang CLP 0,5% cho 1ml n−ớc pha loãng 10- 1, 10- 2, 10- 3 Để tủ ấm 42oC/24 - 48h đọc kết quả.
Đọc các ống d−ơng tính: môi tr−ờng chuyển từ màu tím sang vàng và có sinh hơi (làm nổi ống Durham), tra bảng MPN (Most probale number) tính kết quả.
* B−ớc 2:
+ Từ những ống d−ơng tính ở trên dùng que cấy vô trùng lấy một vòng canh trùng ria cấy trên thạch Endo hoặc môi tr−ờng Macconkey để tủ ấm 37oC/24h đọc kết quả.
+ Trên môi tr−ờng Macconkey: khuẩn lạc E.coli có dạng S bờ đều bóng, màu đỏ. Từ những khuẩn lạc nghi E.coli dùng que cấy vô trùng cấy vào các môi tr−ờng sau:
Ure - Indol để kiểm tra tính chất sinh ánh kim, Indol (+) Clark - Lubs để kiểm tra: Phản ứng đỏ Methyl: MR (+)
Phản ứng Voges - Proskauer: V (-) Simon - Citrat: C (-)
Để tủ ấm 37oC trong 24h. Đọc kết quả
E.coli cho phép kiểm nghiệm IMVIC (+ ,+ ,- ,-) tra bảng MPN để xác định tổng số E.coli trong 1000ml n−ớc (Coliindex) và tính số ml n−ớc có 1 E.coli.