Khảo sát khả năng liên kết carbohydrate của lectin với một số loại đường và glycoprotein bằng cách cho lectin tương tác với đường hoặc glycoprotein với các nồng độ khác nhau trong vòng 60 phút. Sau đó, tiến hành bổ sung hồng cầu thỏ đã xử lý
trypsin vào hỗn hợp trên để đánh giá khả năng gây ức chế hoạt độ NKHC của lectin. Từ đó, tìm ra được giá trị nồng độ nhỏ nhất của đường hoặc glycoprotein mà lectin có thể liên kết được.
Bảng 3.15. Nồng độ đường và glycoprotein nhỏ nhất có khả năng ức chế hoạt độ NKHC của lectin từ rong đỏ E. denticulatum
Mẫu HI Cmin
(mM), (µg/mL)
Đường: D-glucose, D-mannose, D-galactose, L-
fucose, D-xylose, D-glucosamine, D-gluconic acid, p-nitrophenyl-D-galactoside, p- nitrophenyl-D-glucoside, p-nitrophenyl-D- mannoside (100mM) - - Glycoprotein (2.000μg/mL) Transferrin - - Fetuin 25 62,5 Pocine thyroglobulin 210 1,953 Asialo-pocine thyroglobulin 210 1,953 Bovine thyroglobulin 28 7,812 Asialo-bovine thyroglobulin 28 7,812 Yeast mannan 29 3,906
Bovine submaxillary mucin 26 31,25
Asialo-bovine submaxillary mucin 26 31,25
Porcine stomach mucin - -
“-“: Đường 100mM hay glycoprotein 2.000µg/mL không có khả năng gây ức chế hoạt độ NKHC của lectin.
“HI”: khả năng gây ức chế hoạt độ NKHC.
“Cmin”: nồng độ nhỏ nhất của đường (mM) hoặc glycoprotein (µg/mL) có khả năng gây ức chế hoạt độ NKHC.
Phân tích này được thực hiện như được mô tả trong thí nghiệm. Những giá trị chỉ ra nồng độ thấp nhất của đường (mM) và glycoprotein (μg/mL) ức chế hoàn toàn sự ngưng kết hồng cầu. Kết quả từ bảng cho thấy hoạt độ NKHC của lectin từ rong E.
denticulatum không bị ức chế bởi sự có mặt của tất cả các loại đường được khảo sát. Nghĩa là lectin không có khả năng liên kết với các loại đường này. Kết quả trên cho thấy sự tương đồng với các nghiên cứu của Hori và cộng sự năm 1990 [19] hay kết quả của tác giả Leite Marques năm 2000 khi nghiên cứu về loài rong đỏ Gracilaria ornata [28].
Trong khi đó, khảo sát khả năng liên kết của lectin với các glycoprotein cho thấy 2/10 loại glycoprotein mà lectin không thể liên kết được là: Transferrin và Porcine stomach mucin. Trong khi đó, 8/10 loại glycoprotein còn lại có thể liên kết với lectin ở các nồng độ khác nhau. Đặc biệt, các glycoprotein như: Yeast mannan, Porcine thyroglobulin và Asialo-porcine thyroglobulin có khả năng làm ức chế hoàn toàn hoạt độ NKHC của lectin chỉ với những nồng độ rất thấp, với các nồng độ tương ứng là 3,906; 1,953; 1,953 (µg/mL). Kết quả này cũng có sự tương đồng cao với 2 loại rong khác của dòng rong đỏ là Eucheuma serra [26] và Eucheuma amakusaensis [27]. Theo kết quả nghiên cứu của Hori và cộng sự năm 1990 [19] thì hầu hết các lectin từ rong biển không tương tác với đường đơn và đường đa mà chỉ tương tác với các glycoprotein. Trong khi đó, lectin thu nhận từ thực vật bậc cao lại có khả năng tương tác mạnh với các loại đường đơn [23].
Tìm hiểu về cấu trúc của các glycoprotein tương tác mạnh với lectin trong thí nghiệm trên cho thấy 3 loại glycoprotein: Yeast mannan, Porcine thyroglobulin và Asialo-porcine có cấu trúc lõi là oligo-saccharide N-glycan dạng high-mannose. Từ đó có thể thấy rằng lectin từ dòng rong này có tính đặc hiệu cao đối với glycoprotein N- glycan dạng high-mannose. Đây là dạng glycoprotein xuất hiện nhiều trên lớp vỏ của hầu hết các virus gây bệnh, đặc biệt là HIV và HBV [23]. Mặt khác, trong thời gian gần đây một số lectin cũng có tính đặc hiệu cao đối với glycoprotein N-glycan dạng high-mannose như: lectin từ rong E. serra hay rong K. alvarezii đã được nghiên cứu, ứng dụng để ngăn chặn sự phát triển của các loài virus gây bệnh truyền nhiễm ở người [37, 43]. Chính vì vậy, việc nghiên cứu sâu hơn về cấu trúc của lectin từ rong E.
denticulatum cũng như khả năng tương tác của chúng với glycoprotein dạng high-
mannose này sẽ mang lại những kết quả khả quan hơn trong việc phòng chống và ngăn chặn các bệnh nan y hiện nay.
Qua kết quả nghiên cứu cho thấy tính chất lý, hóa và sinh học của lectin từ rong
alvarezii [23,37], Eucheuma amakusaensis [27], Eucheuma serra [26] như: Khối lượng phân tử thấp, khoảng 29 kDa, tồn tại ở dạng monomer, khả năng chịu nhiệt tốt, pH hoạt động trong giới hạn rất rộng, có tính đặc hiệu cao với glycoprotein dạng high- mannose. Trong khi đó, các lectin từ những loài rong này đã và đang được nghiên cứu, ứng dụng thành công trong lĩnh vực y sinh như: Chữa trị một số bệnh ung thư, bệnh do virus hay vi khuẩn gây ra,…[37, 43]. Đây sẽ là những tiền đề quan trọng và thuận lợi bước đầu để chúng ta có thể tiếp tục nghiên cứu ứng dụng lectin từ rong E.
denticulatum cho các lĩnh vực nêu trên.