Để quá trình chiết đạt hiệu quả cao và thu được lectin có hoạt tính cao thì việc khảo sát các điều kiện chiết lectin là cần thiết. Do đó, quy trình dự kiến để tách chiết và tinh sạch lectin từ rong đỏ E. denticulatum như sau:
Hình 2.3. Sơ đồ quy trình tổng quát chiết lectin từ rong đỏ E. denticulatum
Giải thích quy trình:
-Nguyên liệu: Rong đỏ Eucheuma denticulatum được thu tại vùng biển Cam Ranh, tỉnh Khánh Hòa.
-Xử lý nguyên liệu: Rong sau khi đem về phòng thí nghiệm sẽ được rửa bằng nước ngọt để loại bỏ các tạp chất dính trên rong. Sau đó, rong được đem xay nhỏ trong môi trường Nitơ lỏng bằng cối xay inox. Nitơ lỏng vừa giúp tăng hiệu quả của quá trình xay rong, cũng như tạo môi trường lạnh giúp các protein không bị biến tính.
Điều kiện chiết:
- Dung môi, nồng độ dung môi chiết. - Tỷ lệ nguyên liệu/dung môi.
- Thời gian chiết. - Nhiệt độ chiết. Nguyên liệu rong đỏ
E. denticulatum Rửa sạch, giữ -20oC Xay nhỏ Chiết lectin Tỷ lệ dịch chiết/dung môi Kết tủa lectin Ly tâm Lọc, loại bã Thẩm tích Sắc ký lọc gel G-75 Lectin
Rong sau khi xay sẽ được bảo quản ở -20oC cho đến khi sử dụng. Mục đích của quá trình xay là giúp phá vỡ cấu tạo thành tế bào của rong, giúp cho quá trình chiết lectin được dễ dàng.
-Chiết: Rong sẽ được tiến hành chiết với loại dung môi với thời gian, tỷ lệ và nhiệt độ phù hợp. Mục đích của quá trình chiết làm cho lectin trong rong hòa tan vào dung môi bằng các điều kiện thích hợp cho phép thu nhận được lượng lectin cao nhất.
-Lọc: rong sau khi chiết sẽ được lọc qua rây lọc để loại bã thu dịch chứa lectin. Sau khi lọc qua rây sẽ tiến hành ly tâm 6.000 vòng/10 phút để loại được hết cặn còn lại trong dịch chiết.
-Kết tủa dịch lectin: Sử dụng dung dịch ethanol để kết tủa lectin trong dịch chiết.
-Ly tâm thu tủa: Tốc độ 8.000 vòng/phút, nhiệt độ 4C trong 15 phút để thu tủa, loại bỏ dịch trong.
-Thẩm tích kết tủa: Sử dụng dung môi chiết với lượng ít nhất hòa tan hết kết tủa. Sau đó mang đi thẩm tích với kính thước màng loại 10 kDa, thời gian 16 giờ, nhiệt độ 4C.
-Ly tâm thu dịch trong: Dịch sau thẩm tích được ly tâm với tốc độ 8.000 vòng/phút trong 15 phút để loại cặn, thu phần dịch trong, đây chính là chế phẩm lectin kỹ thuật.
-Chế phẩm lectin kỹ thuật được cô đặc để chạy sắc ký thu các phân đoạn có chứa lectin.