Tiến hành khảo sát khả năng liên kết carbohydrate của lectin với một số loại đường và glycoprotein được liệt kê trong Bảng 2.3.
Bảng 2.3. Khảo sát khả năng liên kết của lectin với một số loại đường và glycoprotein
Đường (100mM) Glycoprotein (2.000µg/mL) • D-glucose • D-mannose • D-galactose • L-fucose • D-xylose • D-glucosamine • D-gluconic acid • p-nitrophenyl-D-galactoside • p-nitrophenyl-D-glucoside • p-nitrophenyl-D-mannoside • Transferrin • Fetuin • Yeast mannan • Porcine thyroglobulin • Asialo-porcine thyroglobulin • Bovine thyroglobulin • Asialo-bovine thyroglobulin • Bovine submaxillary mucin
• Asialo-bovine submaxillary mucin • Porcine stomach mucin
Tiến hành
- Sử dụng đĩa 96 giếng đáy chữ V. Cho 25µL NaCl 0,85% vào các giếng. - Cho 25µL dung dịch đường hoặc glycoprotein vào giếng số 1 và số 2, rồi pha loãng 2 lần theo từng hàng bắt đầu từ giếng số 2.
- Cho 25µL dung dịch lectin vào mỗi giếng. Lắc nhẹ và giữ ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ.
- Sau 1 giờ, cho 25µL huyền phù hồng cầu thỏ đã xử lý trypsin vào mỗi giếng, lắc nhẹ, giữ ở nhiệt độ phòng. Sau 2 giờ, đọc kết quả.
Đọc kết quả
- Nếu hoạt độ NKHC của lectin không thay đổi: lectin không có khả năng liên kết với đường hoặc glycoprotein được kiểm tra.
- Nếu hoạt độ NKHC của lectin giảm: lectin đã liên kết với đường hoặc glycoprotein được kiểm tra. Nồng độ nhỏ nhất của đường (mM) hoặc glycoprotein (2.000µg/mL) mà tại đó hiện tượng NKHC do lectin gây ra bị ức chế hoàn toàn (nghĩa là lectin đã liên kết với đường hoặc glycoprotein kiểm tra), được tính theo công thức:
C Cmin =
HI
Trong đó:
Cmin: Nồng độ phản ứng nhỏ nhất của đường (mM) hoặc glycoprotein (µg/mL) mà tại đó hiện tượng NKHC do lectin gây ra bị ức chế hoàn toàn.
C: Nồng độ của đường và glycoprotein. (Nồng độ đường: 100mM; Nồng độ glycoprotein: 2.000 µg/mL).
HI: Giá trị nồng độ pha loãng mà tại đó hoạt độ NKHC vẫn còn bị ức chế, sau khi lectin đã liên kết với đường hoặc glycoprotein.