Tiến hành chiết lectin từ rong đỏ E. denticulatum với các khoảng thời gian khác nhau: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 (giờ) bằng dung môi ethanol 20%, tỷ lệ nguyên liệu : dung môi (w/v) 1:8 và nhiệt độ chiết 4oC. Sau đó, ly tâm với tốc độ 6.000 vòng/phút trong 15 phút, thu DC. Xác định HĐTS và HĐR của từng DC.
Bảng 3.4. Ảnh hưởng của thời gian chiết đến HĐTS và HĐR của lectin
Thời gian
(giờ) Thể tích (ml) HĐTS (HU) Protein tổng số (mg) HĐR (HU/mg)
1 35 560 18,2 30,77 2 35 560 11,9 47,06 3 35 1.120 16,8 66,67 4 35 2.240 25,9 86,49 5 35 2.240 27,3 82,05 6 35 2.240 28,7 78,05 7 35 2.240 29,4 76,19 8 35 2.240 30,8 72,73 9 35 1.120 32,2 34,78
Hình 3.7. Ảnh hưởng của thời gian chiết đến HĐTS của lectin
Thời gian chiết là một trong những thông số cơ bản đối với các quá trình chiết các hợp chất sinh học nói chung từ vật liệu. Trong nghiên cứu này, thời gian chiết lectin có ảnh hưởng đáng kể đến hiệu quả chiết lectin từ rong E. denticulatum (Bảng 3.4, Hình 3.7 và Hình 3.8). Kết quả cho thấy rằng hiệu quả chiết lectin tăng cùng với thời gian chiết và đạt giá trị cao nhất ứng với thời gian chiết là 4 giờ. Tuy nhiên, nếu tiếp tục tăng thời gian chiết trong khi vẫn giữ nguyên các điều kiện chiết khác thì hiệu quả chiết lectin không tăng đáng kể, thậm chí nếu thời gian kéo quá dài (đến 9 giờ) thì hiệu quả chiết lectin giảm rõ rệt. Giá trị của HĐTS và HĐR của lectin ứng với thời gian chiết 4 giờ lần lượt là 2.240 HU và 86,49 HU/mg protein.
Ảnh hưởng của thời gian chiết đến hiệu quả chiết lectin có thể được lý giải dựa vào định luật Fick về tốc độ khuếch tán của vật chất. Theo định luật này, lượng vật chất được khuếch tán ra môi trường chiết tỷ lệ thuận với thời gian chiết. Tuy nhiên, hiệu quả chiết chỉ thích hợp trong một khoảng thời gian thích hợp nếu kéo dài quá thời gian giới hạn thì có thể dẫn đến một số các hợp chất không mong muốn cũng được khuếch tán ra môi trường.
Dựa vào các kết quả đạt được trong nghiên cứu này, tác giả chọn thời gian thích hợp để chiết lectin từ rong đỏ E.denticulatum là 4 giờ để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo.