Nguồn mẫu thực vật Thổ phục linh (S. glabra) đã được khảo sát sơ bộ về hàm lượng và trữ lượng của chúng tại 8 tỉnh miền Bắc và Thổ phục linh Trung Quốc được mua tại hiệu thuốc phố Lãn Ơng [144]. Kết qủa khảo sát cho thấy Thổ phục linh ở nước ta cĩ hàm lượng cao hơn hẳn Thổ phục linh Trung Quốc bán tại các hiệu thuốc tại Hà Nội. Vì vậy nguồn nguyên liệu rễ Thổ phục linh đã được thu mua tại hai tỉnh Bắc Giang và Tuyên Quang là 2 vùng cĩ trữ lượng khá phong phú.
Mẫu rễ Thổ phục linh sau khi thu mua được rửa sạch, thái mỏng, phơi, sấy khơ và bảo quản trong bao kín, khơ ráo và nghiền nhỏ trước khi chiết.
Mẫu Thổ phục linh khơ (10 kg) được nghiền nhỏ và ngâm, chiết trong EtOH 85% ( 1 × 40 L + 3 × 20 L) ở nhiệt độ phịng trong 2 ngày mỗi lần, quá trình chiết mẫu được lặp lại 4 lần đảm bảo astilbin trong mẫu được chiết hầu hết (kiểm tra bằng SKLM). Gộp các dịch chiết lại rồi quay cất dưới áp suất thấp loại dung mơi thu được dịch cơ ethanol (2 L). Dịch cơ ethanol được pha lỗng 2 lần về thể tích với H2O (2 L) thu được hỗn hợp dạng huyền phù (4 L). Hỗn hợp huyền phù (4 L) được lần lượt chiết với n-hexan (1 × 2 L + 3 × 1 L) rồi với ethyl acetate (1 × 2 L + 3 × 1 L)
đảm bảo thu hồi hết astilbin (kiểm tra bằng SKLM). Dịch chiết n-hexan và ethyl
acetate được làm khan qua Na2SO4 rồi quay cơ loại dung mơi thu được cao n-hexan (41 g) và cao ethyl acetate (EA, 465 g). Cao EA được phân lập sơ bộ qua sắc ký cột
nhanh trên silica gel thu được astilbin thơ (254 g) và các phân đoạn của các hợp chất giải hấp trước astilbin (92 g) và giải hấp sau astilbin (43 g). Astilbin thơ được kết tinh lại từ hỗn hợp dung mơi MeOH/H2O (1/1; v/v) 3 lần thu được 100 g astilbin với hàm lượng 95,5% theo HPLC với hiệu suất tách 1,0 % so với trọng lượng mẫu khơ.
Hình 3.4. Sơ đồ phân lập astilbin quy mơ 10 kg TPL/mẻ
Astilbin (94) là chất rắn màu trắng FT-IR max (cm-1): 3427, 3263, 2912, 1640, 1603, 1519, 1476, 1363, 1301, 1177, 1070, 977. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,98 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2′), 6,86 (1H, dd, J = 8,0 , 2,0 Hz, H-6′), 6,83 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 5,94 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 5,92 (1H, d , J = 2,0 Hz, H-8), 5,10 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-2), 4,60 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-3), 4,28 (1H, dq, J = 6,0, 9,6 Hz, H-5′′), 4,07 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-1′′), 3,68 (1H, dd, J = 3,0 , 9,6 Hz, H-3′′), 3,56 (1H, dd, J = 1,5 , 3,0 Hz, H-2′′), 3,3 (1H, m, H-4′′), 1,21 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-6′′).
13C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,0 (C=O); 168,5 (C-7); 165,5 (C- 5); 164,1 (C-9); 147,4 (C-4′); 146,5 (C-3′), 129,2 (C-1′), 120,5 (C-6′); 116,3 (C-5′), 115,5 (C-2′); 102,5 (C-10); 102,1 (C-1′′); 97,4 (C-6); 96,2 (C-8); 83,9 (C-2); 78,5 (C-3); 73,8 (C-4′′); 72,2 (C-3′′); 71,8 (C-2′′); 70,5 (C-5′′); 17,8 (C-6′′).