phân tích, trong cùng điều kiện sắc kí có thời gian lưu gần với thời gian lưu của chất phân tích nhưng được tách hoàn toàn. Một số nội chuẩn được sử dụng trong định lượng metformin bằng phương pháp HPLC gồm: Atenolol [17], [32], [109]; phenformin [11], [27]; ranitidin [101], glipizid [52] và clorpheniramin [62].
+ Giới hạn định lượng dưới: Metformin có độ nhạy cao với phương pháp định lượng bằng HPLC, nồng độ phát hiện thấp khoảng 10 - 50 ng/ml.
1.3.3. Thẩm định phương pháp định lượng metformin trong dịch sinh học học
Phương pháp phân tích dịch sinh học phải được thẩm định một số tiêu chí trước khi áp dụng vào phân tích mẫu [22], [41]: Tính chọn lọc – đặc hiệu (Selectivity – specificity), xây dựng đường chuẩn và xác định khoảng tuyến tính (Linearity), giới hạn định lượng dưới (LLOQ), độ đúng – độ chính xác (Accuracy – precision), phần trăm tìm lại, độ ổn định.
Trong hầu hết các nghiên cứu, phương pháp định lượng metformin trong dịch sinh học được xây dựng và định lượng theo các tiêu chí của FDA và dược điển Mỹ.
Tóm lại, dạng thuốc GPKD chứa MH được bào chế theo nhiều cơ chế khác nhau. Trong đó, dạng cốt thân nước được ứng dụng nhiều vì có ưu điểm
dễ bào chế, TD sẵn có và dễ dàng nâng qui mô. Vì vậy, viên nén MH GPKD dạng cốt được nhiều hãng lớn trên thế giới sản xuất, viên Glucophage XR của hãng Merck – santé là sản phẩm được lựa chọn làm viên đối chiếu trong nhiều nghiên cứu. Hiện nay, có một số nghiên cứu bào chế viên MH GPKD theo cơ chế bơm thẩm thấu và đã có ứng dụng trong công nghệ dược phẩm. Dạng bơm thẩm thấu qui ước có cấu tạo đơn giản với lỗ giải phóng trên bề mặt viên được khoan bằng tia laser cho tốc độ GPDC duy trì hằng định theo động học bậc 0 và phù hợp với điều kiện nghiên cứu ở Việt Nam. Căn cứ vào liều dùng và lượng dược chất trong viên đối chiếu, lựa chọn hàm lượng 500 mg để bào chế viên MH GPKD. Như vậy, dạng cốt thân nước và dạng bơm thẩm thấu qui ước được lựa chọn để nghiên cứu bào chế viên MH 500 mg GPKD. DĐVN IV chưa có chuyên luận cho viên nén MH GPKD, vì vậy các thử nghiệm hoà tan đánh giá khả năng GPDC được tiến hành theo hướng dẫn của USP 35. Chế phẩm bào chế được đánh giá SKD in vivo so với viên đối chiếu Glucophage XR. Việc đánh giá SKD in vivo có thể được thực hiện trên người hoặc động vật. Phần lớn các nghiên cứu này trên thế giới đều được tiến hành trên người tình nguyện khoẻ mạnh. Nhận thấy, việc đánh giá SKD trên chó thực nghiệm có các điều kiện gần với người nhất, đồng thời do sự giới hạn về thời gian và kinh phí nên chó đực khoẻ mạnh được lựa chọn để tiến hành nghiên cứu. Qua việc tham khảo các tài liệu cho thấy, hầu hết các nghiên cứu đều sử dụng phương pháp phân tích HPLC với detector UV. Do đó, lựa chọn phương pháp này để định lượng MH trong huyết tương chó. Phương pháp tủa protein được sử dụng trong nhiều nghiên cứu, đơn giản và dùng ít dung môi. Vì vậy, mẫu trước khi phân tích sẽ được xử lý bằng phương pháp tủa protein với acetonitril.
CHƯƠNG 2
NGUYÊN LIỆU, THIẾT BI ̣, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU