Pha dung dịch MH chuẩn có nồng độ khoảng 5 µg/ml và dung dịch TD (mẫu placebo) trong môi trường nước cất và đệm phosphat pH 6,8. Tiến hành ghi phổ trong vùng có bước sóng từ 200 – 500 nm. Sau đó, so sánh với phổ của dung dịch chứa MH và phổ của hỗn hợp TD. Kết quả được trình bày ở phụ lục 1 (Phần Phụ lục).
Kết quả cho thấy: Trong khoảng từ 200 – 500 nm, dung dịch MH trong nước cất và đệm phosphat pH 6,8 đều có một cực đại hấp thụ tại 233 nm và tại bước sóng này, phổ của dung dịch TD không xuất hiện đỉnh hấp thụ. Điều đó chứng tỏ, TD không ảnh hưởng đến phép đo quang phổ của MH. Do đó, có thể dùng phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV tại bước sóng 233 nm để xác định nồng độ MH trong quá trình đo độ hoà tan.
Xây dựng đường chuẩn: Đo mật độ quang các dung dịch MH có nồng độ 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0 µg/ml trong nước cất và đệm phosphat pH 6,8 tại bước sóng 233 nm. Kết quả được trình bày ở bảng 3.1 và hình 3.1.
Bảng 3.1. Kết quả đo mật độ quang của dung dịch metformin trong nước cất và đệm phosphat pH 6,8 (n = 6) Mật độ quang Nồng độ (µg/ml) 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 Nước cất D 0,0935 0,1720 0,2456 0,3306 0,4189 0,5077 0,5951 0,6714 RSD (%) 1,05 1,02 1,49 1,23 1,03 0,98 0,90 1,03 pH 6,8 D 0,0949 0,1648 0,2455 0,3308 0,4188 0,5070 0,5669 0,6305 RSD (%) 1,37 0,90 1,18 1,08 1,22 1,08 1,11 1,10
Hình 3.1. Đồ thị mối tương quan giữa nồng độ và mật độ quang của dung dịch metformin trong môi trường nước cất (a) và pH 6,8 (b)
Kết quả ở bảng 3.1 và hình 3.1 cho thấy: Mật độ quang D và nồng độ MH trong môi trường nước cất và đệm phosphat pH 6,8 trong khoảng 1,0 µg/ml đến 8,0 µg/ml có mối quan hệ tuyến tính với hệ số tương quan ≈ 1. Do đó, có thể sử dụng phương pháp quang phổ hấp thụ UV tại bước sóng 233 nm để định lượng MH trong môi trường nước cất và đệm phosphat pH 6,8. Đối với dạng viên thẩm thấu, lượng MH giải phóng tại các thời điểm đầu thấp nên sử dụng phương pháp thêm chuẩn với nồng độ khoảng 5,0 µg/ml.