Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 71 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
71
Dung lượng
2,44 MB
Nội dung
i LỜI CẢM ƠN Trước tiên tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS. Trịnh Tất Cường là người thầy đã hướng dẫn, giúp đỡ tận tình, tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành luận văn này. Tôi xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô đã giảng dạy tại khoa Sinh học làm cơ sở cho tôi thực hiện tốt luận văn này. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ quý báu của tập thể cán bộ, các anh, chị và các bạn trong Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Enzym và Protein – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – ĐHQGHN. Cuối cùng tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình và bạn bè đã luôn động viên, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua. Hà Nội ngày 27 tháng 10 năm 2014 Học viên Lý Thị Kim Tuyến ii MỤC LỤC M U 1 U 3 1.1. Gama-Aminobutyric axit (GABA) 3 1.2. Cng ca GABA 3 1.3. ng h 4 1.4. Enzym tng hp GABA 5 1.5. Th th GABA 6 1.6. Sn xut GABA t vi sinh vt 7 1.7. t tham gia sn xut GABA 9 1.8. Thc phm ch 10 1.8.1. o - nguu to thc phm cha GABA 10 1.8.2. u v GABA Vit Nam 10 1.9. th 11 14 2.1. U 14 2.1.1. Vi sinh vt 14 2.1.2. o 14 2.1.3. 14 2.1.4. ng c 14 2.1.5. 14 2.2. U 15 2.2.1. n xut GABA t do 15 2.2.1.1. o qun chng KC1 15 2.2.1.2. Kim tra kh a chng KC1 16 2.2.1.3. o 16 2.2.1.4. nh hoo 19 2.2.1.5. nh glutamic axit bn mng (TLC) 19 iii 2.2.1.6. ng glutamic acid b 19 2.2.1.7. Chit xuo bc 20 2.2.1.8. nh GABA bn mng (TLC) [41] 20 2.2.1.9. ng GABA b 21 2.2.1.10. nh ngu 22 2.2.1.11. u kin p ng do . 23 2.2.2. Tinh ch GABA [31] 24 2.2.2.1. Kh 24 2.2.2.2. Kh mui 24 2.2.2.3. Chy si ion 24 2.2.2.4. Kt tinh GABA 25 2.2.3. 25 2.2.3.1. WSS- PC12 25 2.2.3.2. ng cht ca t 26 2.2.3.3. nh GABA b[42] 26 2.2.3.4. 26 2.2.3.5. ng GABA ds 27 : KT QU O LUN 29 3.1. n xut GABA t do 29 3.1.1. Kh a chng KC1 29 3.1.2. c phm co 29 3.1.3. ng co 30 3.1.4. a cho 31 3.1.4.1. o 31 3.1.4.2. ng glutamic acid trong hai mo 32 3.1.5. c b 34 3.1.6. ng chung GABA b 35 iv 3.1.7. Ngup 36 3.1.8. u king dch o 40 3.1.8.1. pH p cho 40 3.1.8.2. Nhi 41 3.1.8.3. Th 42 3.1.8.4. T l 43 3.1.9. dch chio 45 3.2. a GABA bn mng 46 3.3. a GABA 47 3.3.1. ng cht ca t 47 3.3.2. nh GABA bng HPLC 48 3.3.3. c c th 52 3.3.3.1. y t WSS-1 52 3.3.3.2. bt WSS-1 53 3.3.3.3. ng GABA d 54 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT GABA Axit gamma-amino butylric GABA-T GABA transaminase GAD L-glutamate decarboxylase HTS c High throughput screening KC1 Chng Lactobacillus plantarum KLEPT ml milliliter mM millimolar MRS De Man, Rogosa, Sharpe MSG Monosodium glutamate OD M quang hc PLP Pyridoxalphosphate TCVN n Vit Nam TLC Thin layer chromatography TPCN Thc phm ch vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Ca GABA 4 ng tng hy ca GABA 5 a th th GABA A 6 a th th GABA B 7 ng ca th th n kt vi GABA 7 6: Kt qu chy si vi dng MRS 29 7: Ho 31 Kt qu nh glutamic acid o bng TLC 32 ng chun glutamic acid 33 u qu nhi i i vglutamic acid t go 35 ng chun GABA 36 u qu cn t n xut GABA 37 ng ca pH tn xu dch chit o 41 ng ca nhi tn xut G men dch chit o 42 ng ca thi gian tn xu men dch chio 43 ng cn xu dch chio 44 o 45 18: Sn ph (B) 46 Kim tra GABA bng TLC 46 vii Kh o v t a d ng Lactobacillus- plantarum KLEPT 48 S ca GABA chun 49 22: ng chun GABA qua HPLC 49 H23: Chy smu d 50 24: Cht bng sc k ct 51 u GABA tinh sng chu tinh sch ca mu 52 nh chp t i sau 24 gi y t -1 (A), sau 48 gi (B) 53 t qu i OD ca Iot di n c men 54 ng chun gia n quang t 405nm 55 viii DANH MỤC BẢNG BIỂU Bng MRS 15 Bng 2: Ch ng ca hai mo 30 B glutamic acid cu co 33 B t thun Cacbon 38 B t thun Nit Bng 7: T l MSG (%) ng ti hiu sut to GABA trong hai loi ng 40 Bng 8: ng GABA trong d 55 1 MỞ ĐẦU -ng trong h thng thn kinh. GABA thc hiu thn kinh qua khe i nhau trong h thng thn kinh c biu qu t s ri lon thn kinh gi nhng cht nhiu tr n thc phm ch. Hin xut t nhing ht t c, tu kin t ht go ny mm, hong vi sinh vt. n xut GABA bn vi sinh vt (vi khun, n c ng dng ru qu gic bit, vi khu c ng d cho ng ln GABA t thc phm truyn thn xut GABA khi s dng vi khui vi mp. c GABA Lactobacillus Hiu ng dn gc t thc phm chu xut hin Vit Nam. Thc t, khi mt sn ph th tip c n phm phm bo v ch gii quyt hai v lu c n mt nguu r tit n cung c u sut cao. V chng sn phm dng cht ch th ch ra c s ion clorua kim tra ho ca t 2 Xu khoa hc thc ti “ Nghiên cứu quy trình sản xuất γ-Aminobutyric axit (GABA) từ dịch cám gạo bằng Lactobacillus” u thc hin nh: sn xut GABA t do bng chng Lactobacillus plantarum t hiu su. th GABA. [...]... đích tăng cƣờng hệ miễn dịch Chính vì vậy, đã có một số công trình nghiên cứu cám gạo nhƣ là một nguồn sản xuất GABA Tuy nhiên, với những điều kiện tối ƣu để làm tăng cƣờng quá trình hoạt động của GAD trong cám gạo thì cũng chỉ cho hàm lƣợng GABA là 29 g/100 g cám gạo [36] Ngoài ra, một công bố gần đây của nhóm nghiên cứu Hàn Quốc đã sử dụng Lactobacillus để lên men dịch cám gạo đã cho hiệu suất lên... GABA bằng sử dụng những GABA sản xuất từ vi khuẩn lactic đƣợc phân lập từ sản phẩm của bơ [45], sữa đậu nành [37], kimchi [12], phophat [35] và những sản phẩm lên men từ cá [26] Một vài chủng sản xuất GABA đã đƣợc chứng minh có tiềm năng sản xuất GABA ở quy mô lên men với thể tích lớn [28] Chẳng hạn, chủng Lactobacillus brevis NCL 912 phân lập từ paocai Trung Quốc [32] đã thu đƣợc nồng độ GABA trong dịch. .. cho hiệu suất lên men GABA là 660 mM trong dịch lên men từ 1 kg cám gạo đã đƣợc bổ sung thêm 10 lít nƣớc và 12% MSG tƣơng đƣơng với 679 g/1kg cám gạo [28] 1.8.2 Nghiên cứu về GABA ở Việt Nam Tại Việt Nam, cho đến nay đã có một số công trình nghiên cứu về GABA nhƣ tách chiết GABA từ đậu tƣơng hoặc dự án cấp nhà nƣớc năm 2007 về nghiên cứu 10 công nghệ sản xuất một số thực phẩm chức năng giàu GABA phòng... hƣởng của nhiệt độ tới quá trình lên bằng dịch cám gạo Thời gian thích hợp cho lên men 23 1 lít dịch từ 10 lít chiết trong 1 kg cám gạo bổ sung thêm 5% MSG, pH=6 Sau đó, cấy 1% Lactobacillus plantarum KLEPT giữ ở 30ºC trong các khoảng thời gian khác nhau: 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 120 h, và tỉ lệ ôxy 40% Tỉ lệ ôxy thích hợp cho lên men 1 lít dịch từ 10 lít chiết trong 1 kg cám gạo bổ sung thêm 5% MSG,... Nguồn NaCl + 1 lít dịch chiết cám gạo đƣợc bổ sung thêm 5% MSG + Bổ sung thêm NaCl với tỉ lệ lần lƣợt là 0, 1, 3, 5, 7% vào môi trƣờng dịch chiết cám gạo + Sau đó khử trùng và điều chỉnh pH=6,5 + Đƣa thêm 1% dịch chủng gốc + Thời gian lên men kéo dài 96 giờ, ở 34ºC, lắc với tốc độ 150 vòng/phút + Định lƣợng GABA tạo thành trong dịch lên men Nguồn Cacbon + 1 lít dịch chiết từ cám gạo đƣợc bổ sung thêm... sung MSG thích hợp cho lên men 1 lít dịch từ 10 lít chiết trong 1 kg cám gạo bổ sung thêm 3%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15% MSG Sau đó, cấy 1% Lactobacillus plantarum KLEPT lên men ở điều kiện tối ƣu theo các thông số chỉ ra ở trên 2.2.1.11 Tìm các điều kiện lên men thích hợp trên môi trƣờng dịch cám gạo pH thích hợp cho lên men 1 lít dịch từ 10 lít chiết trong 1 kg cám gạo sẽ đƣợc bổ sung 5% MSG ở các giá... dụng cám gạo nhƣ một nguồn nguyên liệu chính trong quá trình sản xuất GABA Trong khi đó, nguồn nguyên liệu lên men từ cám gạo trong nƣớc rất dồi dào, giá thành thấp và gần nhƣ chỉ sử dụng để làm thức ăn gia súc Do vậy, đây là một trong những lý do chính giúp cho quá trình sản xuất GABA có giá thành thấp 1.9 Đánh giá hoạt tính sinh học GABA thông qua thụ thể Trong cơ thể, tế bào có rất nhiều quá trình. .. nuôi cấy tế bào (Corning, Mỹ) Bình nghiêng nuôi cấy tế bào, đầu côn các loại (1 ml; 0,2 ml) và các ống eppendorf các loại (0,5 ml; 1,5 ml), pipet tiệt trùng dùng trong nuôi cấy tế bào (1 ml, 5 ml, 10 ml, 50 ml), Bình thủy tinh duran các loại (Inovagen, Mỹ) Màng lọc vi khuẩn (Sigma, Đức) 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Xây dựng quy trình lên men sản xuất GABA từ dịch cám gạo 2.2.1.1 Nuôi cấy và bảo quản... lƣợng GABA trong đề tài nghiên cứu 13 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 2.1 NGUYÊN LIỆU 2.1.1 Vi sinh vật Chủng Lactobacillus plantarum KLEPT (KC1) đƣợc cung cấp bởi Phòng Thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzym và Protein - Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên 2.1.2 Các mẫu cám gạo Cám gạo Thái Bình (giống lúa BC15) và cám gạo Đồng bằng sông Cửu Long (giống lúa OM4900) mua trực tiếp từ ngƣời nông dân sau... GABA bằng phƣơng pháp sắc ký bản mỏng (TLC) [41] Dịch lên men bằng vi sinh vật trên môi trƣờng cám gạo có bổ sung 5% MSG đƣợc ly tâm và phân tích định tính GABA theo phƣơng pháp sắc ký bản mỏng và so màu + Dịch lên men sau khi ly tâm 1500 vòng trong 15 phút sẽ đƣợc phân tích bằng sắc ký bản mỏng (TLC) 20 + Lấy 0,5 μl dịch chấm lên bản mỏng sắc ký để khô và nhúng vào dung dịch đệm gồm: butanol: axit . thc ti “ Nghiên cứu quy trình sản xuất γ-Aminobutyric axit (GABA) từ dịch cám gạo bằng Lactobacillus u thc hin nh:. sản xuất GABA Monosodium glutamate (MSG) sn xut Axit gamma-aminobutyric (GABA) bng vi khun lactic [28t dng mui ca glutamic axit. . gen y trong Lactobacillus brevis [38], Lactobacillus plantarum, Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus [48], Lactobacillus paracasei [25 Lactococcus