3. Những đóng góp mới của đề tài
1.4. TINH SẠCH ENZYME XYLANASE
Trong các tổ chức của cơ thể sống, protein có thể ở dưới dạng tự do trong các dịch sinh vật hoặc dưới dạng kết hợp, hoặc bị giữ trong các tế bào. Hơn nữa, trong tế bào có chứa hàng nghìn loại protein khác nhau, nên khi chúng ta cần nghiên cứu từng loại protein, trước hết phải chiết rút và tinh sạch chúng. Chính vì vậy, các kỹ thuật chiết rút, tinh sạch và nghiên cứu protein luôn ở vị trí trung tâm của các nghiên cứu hóa sinh và luôn được cập nhật và hiện đại hóa [38].
Tinh sạch enzyme là một chuỗi các quá trình liên tiếp nhằm tách riêng một loại enzyme từ hỗn hợp ban đầu. Tinh sạch enzyme là quá trình thiết yếu để xác định được các đặc tính về cấu trúc - chức năng, động lực học, cơ chế xúc tác và sự tương tác giữa các loại enzyme quan trọng. Nguyên liệu khởi đầu được sử dụng cho quá trình tinh sạch thường là một loại mô sinh học hoặc dịch nuôi cấy vi sinh vật. Quá trình tinh sạch enzyme cho phép tách chiết một loại enzyme từ một hỗn hợp ban đầu có chứa loại enzyme đó, tách riêng các phần có bản chất là protein và phần không có bản chất là protein trong hỗn hợp. Quá trình tách chiết này là một quá trình khá phức tạp. Các bước tách chiết này dựa vào kích thước phân tử, đặc tính lý hóa, khả năng bám dính và hoạt độ sinh học của từng loại enzyme.
Mục đích của việc tinh sạch enzyme nhằm tối ưu hóa hoạt độ xúc tác của enzyme, tinh sạch tối đa được enzyme và nghiên cứu các đặc tính của chúng. Tinh sạch enzyme còn được ứng dụng rộng rãi trong lĩnh vực y tế và công nghiệp.
Muốn tinh sạch được enzyme mà vẫn giữ nguyên được đặc tính của nó thì chúng ta có thể sử dụng nhiều phương pháp khác nhau, dựa vào nhiệt độ, nồng độ proton (pH), hoặc các tác nhân hóa học (các muối trung tính (NH4)2SO4, Na2SO4, …).
Để tinh sạch được enzyme, người ta thường sử dụng kết hợp đồng thời nhiều kỹ thuật khác nhau: thu hồi enzyme bằng muối ammonisunfat, sắc ký trao đổi ion, điện di SDS-PAGE và điện di trên gel hoạt tính.
31