3. Những đóng góp mới của đề tài
2.2.5.2.Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy xốp thích hợp cho khả năng tổng hợp
xylanase ở các chủng nghiên cứu
a. Môi trường thích hợp
Vi khuẩn được nuôi cấy lắc 200 vòng/phút, 40oC trong 5 môi trường dịch thể kí hiệu là: V1, V2, V3, V4, V5. Sau 2 ngày thu dịch và xác định hoạt tính enzyme và khả năng sinh trưởng.
Xạ khuẩn được nuôi cấy lắc 200 vòng/phút, 40oC trong 5 môi trường dịch thể ký hiệu là: X1, X2, X3, X4, X5. Dịch nuôi cấy sau 2 ngày được xác định hoạt tính enzyme và khả năng sinh trưởng.
b. Nhiệt độ thích hợp
Các chủng nghiên cứu được nuôi cấy trong môi trường thích hợp ở nhiệt độ 25, 30, 35, 40, 50 và 55oC trên máy lắc ổn nhiệt. Sau 2 ngày, thu dịch, xác định hoạt tính xylanase và khả năng sinh trưởng.
c. pH thích hợp
Các chủng nghiên cứu được nuôi cấy lắc 200 vòng/phút trên môi trường thích hợp, pH được chỉnh ở các giá trị: 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9. Sau 2 ngày, thu dịch, xác định hoạt tính xylanase và khả năng sinh trưởng.
d. Thời gian thích hợp cho giống khởi động
Chủng vi khuẩn được nuôi cấy lắc trong môi trường canh thang ở nhiệt độ thích hợp. Thu dịch nuôi cấy sau 8, 16, 24, 32, 40 giờ và xác định mật độ tế bào ở OD 600.
Chủng xạ khuẩn được nuôi cấy lắc trong môi trường YG ở nhiệt độ thích hợp. Thu dịch nuôi cấy sau 24, 30, 36, 42, 48 giờ, lọc qua giấy lọc và xác định sinh khối.
2.2.5.2. Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy xốp thích hợp cho khả năng tổng hợp xylanase ở các chủng nghiên cứu xylanase ở các chủng nghiên cứu
50
a. Lựa chọn cơ chất
Các chủng vi sinh vật được nuôi trên các cơ chất xốp khác nhau, ủ 3 ngày ở 40oC, sau đó được chiết bằng nước theo tỷ lê ̣ 1 cơ chất: 3 nước, lắc 200 vòng/phút trong 3 giờ. Chiết dịch enzyme bằng ly tâm 12.000 vòng/phút trong 10 phút và xác định hoạt độ enzyme.
b. Lựa chọn thời gian nuôi cấy
Các chủng vi khuẩn và xạ khuẩn được nuôi cấy xốp trên cơ chất thích hợp, ở 400C với thời gian từ 1 - 7 ngày. Chiết dịch, xác định hoạt độ xylanase.
c. Lựa chọn độ ẩm
Các chủng vi sinh vật được nuôi trên các cơ chất xốp thích hợp ở các độ ẩm lần lượt là 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80%. Ủ trong 3 ngày ở 40oC, chiết bằng nước và xác định hoạt độ xylanase.
d. Lựa chọn tỷ lệ giống cấy
Các chủng vi sinh vật được cấy vào các cơ chất xốp thích hợp với các tỷ lệ 5, 10, 15, 20 và 25%. Ủ 3 ngày, thu dịch và xác định hoạt độ xylanase.
e. Lựa chọn nguồn cacbon bổ sung
Các chủng vi sinh vật được nuôi cấy trên cơ chất xốp có bổ sung thêm 4% nguồn carbon là glucose, sacarose, D-lactose, D-Mannitol, xylose trên. Sau 3 ngày, chiết bằng nước, thu dịch và xác định hoạt độ xylanase.
f. Lựa chọn nguồn nitơ bổ sung
Các chủng vi sinh vật được nuôi cấy trên cơ chất xốp thích hợp, có bổ sung 4% nguồn nitơ là (NH4)2SO4, nitrat, nitrit, cao malt, cao thịt, cao men, peptone, ure. Sau 3 ngày, chiết bằng nước, thu dịch và xác định hoạt độ xylanase.
g. Lựa chọn nguồn khoáng
Các chủng vi sinh vật được nuôi trên cơ chất xốp làm ẩm bằng các hỗn hợp khoáng khác nhau. Sau 3 ngày, chiết bằng nước, thu dịch và xác định hoạt độ xylanase.
Thành phần các loại khoáng như sau [10]:
MA1 (g/l): MgSO4.7H2O- 0.5; K2HPO4- 1.5; pH 8.0;
MA2 (g/l): MgSO4 .7H2O- 0.5; K2HPO4- 1.5; peptone 2.0; yeast extract 2.0; pH 8.0;
MA3 (g/l): MgSO4.7H2O- 0.1; Na2HPO4- 11.0; NaH2PO4- 6.0; KCl 3.0; pH 8.0; Và MA4 g/l): MgSO4.7H2O- 0.5; K2HPO4 - 0.1; (NH4)2H2PO4 - 1.0; CaCl2 - 0.1; FeSO4- 0.1; MnSO4- 0.1; pH 8.0.
51