3. Những đóng góp mới của đề tài
2.2.4.2.Quan sát hình thái
a. Hình thái tế bào và khuẩn lạc vi khuẩn
Quan sát hình dạng khuẩn lạc: Vi khuẩn được cấy ria trên môi trường canh thang, sau 2 ngày, quan sát hình thái bề mặt, màu sắc, kích thước…
Quan sát hình thái tế bào: Vi khuẩn nuôi trong môi trường canh thang 24 giờ, quan sát tế bào.
Nhuộm Gram
- Dung dịch tím kết tinh: 2g tím kết tinh hòa tan trong 20ml ethanol 95%; 0,8g ammoni oxalate hòa tan trong 80ml nước cất. Trộn hai dịch nói trên lại với nhau, giữ 48 giờ rồi lọc. Bảo quản trong lọ tối màu, sử dụng trong vài tháng.
- Dung dịch Lugol: hòa tan 2g KI trong 30ml nước cất, thêm 1g iodine, khuấy cho tan hết, thêm nước cất cho đủ 300ml. Bảo quản trong lọ tối màu.
- Dung dịch tẩy màu: ethanol 95% hoặc trộn hỗn hợp 70ml ethanol 95% với 30ml acetone.
- Dung dịch nhuộm bổ sung: chuẩn bị sẵn dung dịch Safranin O 2,5% trước khi dung pha với nước cất theo tỉ lệ 1:5 để có dung dịch 0,5%.
* Cách tiến hành
Chuẩn bị vết bôi: dùng que cấy vô trùng lấy một ít vi khuẩn từ thạch (sau khi cấy 24 giờ) hoà vào một giọt nước cất ở giữa phiến kính, làm khô trong không khí. Cố định tế bào: hơ nhanh vết bôi trên ngọn lửa đèn cồn 2 - 3 lần.
Nhuộm bằng dung dịch tím kết tinh trong 1 phút, rửa nước, thấm khô. Nhuộm lại bằng dung dịch Lugol trong 1 phút, rửa nước, thấm khô.
Nhỏ dịch tẩy màu, giữ khoảng 30 giây (cho đến khi vừa thấy mất màu), rửa nước, thấm khô.
Nhuộm bổ sung bằng dung dịch safranin trong 2 – 3 phút, rửa nước, để khô trong không khí.
49
b. Quan sát hình thái xạ khuẩn
- Quan sát hình dạng khuẩn lạc: Xạ khuẩn được cấy ria trên môi trường thạch YG, sau 2 - 5 ngày lấy ra quan sát hình thái bề mặt, màu sắc, kích thước khuẩn lạc. - Quan sát hình dạng cuống sinh bào tử: xạ khuẩn được nuôi trên môi trường YG, cắm lamen nghiêng. Sau 2-5 ngày lấy lamen quan sát hình dạng cuống sinh bào tử và đếm số lượng bào tử trên kính hiển vi quang học.