3. Những đóng góp mới của đề tài
2.2.6.2. Thu hồi enzyme bằng các dung môi hữu cơ
Nuôi các chủng vi sinh vật trên các môi trường dịch thể và xốp thích hợp, sau 2 ngày/dịch và 3 ngày/xốp, chiết dịch enzyme. Tủa enzyme bằng các dung môi hữu cơ (các dung môi hữu cơ được sử dụng là cồn 100% và aceton lạnh):
- Đổ từ từ một lượng dịch enzyme vào bình đựng cồn 100% hoặc axeton lạnh đang được đặt trên máy khuấy từ ở 4oC theo tỷ lệ thể tích 1 : 3. Tiếp tục khuấy trong 30 phút để trộn đều hỗn hợp.
- Hỗn hợp trên được đặt vào tủ lạnh ở nhiệt độ - 20oC để qua đêm. - Ly tâm lạnh ở 4oC- 9000g / phút trong 10 phút và thu cặn.
- Bổ sung nước cất vào cặn. Lắc nhẹ bằng máy lắc để từ từ hòa tan cặn. Dịch đã hòa tan được dùng làm dịch enzyme cho các thí nghiệm tiếp theo.
2.2.6.3. Thu hồi enzyme bằng muối ammonisunfat
Nuôi các chủng vi sinh vật trên các môi trường dịch thể và xốp thích hợp, sau 2 ngày/dịch và 3 ngày/xốp, chiết dịch enzyme. Tủa enzyme bằng muối ammonisunfat bão hòa 80%.
Cách tiến hành
- 20 ml dịch nuôi cấy enzyme đựng trong ống Falcon 50 đặt trên máy khuấy từ. Muối ammonisunfat được thêm vào ở các nồng độ từ 30 đến 90% với khối lượng như sau:
Phân đoạn (1): 0 -> 30%: 3.28 g ammonisunfat. Phân đoạn (2): 30 -> 40%: 1 12 g ammonisunfat. Phân đoạn (3): 40 -> 50%: 1.16 g ammonisunfat. Phân đoạn (4): 50 -> 60%: 1-2 g ammonisunfat. Phân đoạn (5): 60 -> 70%: 1.24 g ammonisunfat. Phân đoạn (6): 70 -> 80%: 1.3 g ammonisunfat. Phân đoạn (7): 80 -> 90%: 1.34 g ammonisunfat.
Ở mỗi phân đoạn, dịch enzyme đã hòa tan ammonisunfat được ủ trong đá 30 phút sau khi đã hòa tan hoàn toàn ammonisunfat. Ly tâm hỗn hợp ở 9500 g/10phút
52
ở 4oC. Chuyển dịch trong sau ly tâm sang một ống falcon khác- sau đó tiếp tục bổ sung ammonisunfat vào dịch này đến các nồng độ tiếp theo. Cặn sau ly tâm được hoàn nguyên về nồng độ ban đầu bằng nước cất. Dịch thu được sau khi hòa tan hoàn toàn cặn được dùng để xác định hoạt độ xylanase.