CHƯƠNG 2: PHÂN TÍCH CÂY TRỒNG
2.4.8 Xácđịnh vitamin
Vitamin là nhóm hợp chất hữu cơ phân tử thấp, có thể chứa hidratcacbon, rượu, axit, về thành phần hóa học rất đa dạng, chúng rất cần thiết đối với đời sống con người và động vật.
Theo đặc điểm hòa tan, vitamin có thể chia thành 2 nhóm: Hòa tan trong nước (vitamin C, B1, B2, PP), hòa tan trong mỡ như vitamin A, E. Hàm lượng vitamin trong nông sản được coi là chỉ tiêu chất lượng sản phẩm, Khi phân tích tiến hành trạng thái mẫu tươi.
- Chuẩn bị mẫu để phân tích: Lấy mẫu trung bình quả, củ, lá rau từ ngoài đồng mang về phòng thí nghiệm, rửa sạch và lau khô bằng giấy lọc.
- Mẫu trung bình thường gồm khoảng từ 10-20 mẫu, nghiền nhỏ tất cả rất khó khăn, bởi vậy trộn đều và chia thành nhiều phần nhỏ. Lấy một số phần để chuẩn bị phân tích.
- Mẫu phân tích được nghiền nhỏ bằngcối sứ hay bằng chất dẻo cứng, không sử dụng dụng cụ bằng sắt, đồng bởi vì 2 kim loại này xúc tác cho quá trình phân hủy vitamin C.
* Xác định vitamin C:
-Nguyên tắc của phương pháp: Dịch chiết bằng nước mẫu cây chứa vitamin C (axit ascobic), khử dung dịch màu xanh (2,6-điclophenolindophenol) thành hợp chất không màu. Phản ứng này là cơ sở của phương pháp xác định axit ascobic
-Trình tự phân tích: Cần 1-3 gam (lá xanh) và 5-10g (củ) cho vào cối nghiền nhỏ đòng nhất. Thêm 20ml dung dịch HCl%, tiếp tục nghiền, trộn trong thời gian 10 phút. Chuyển hỗn hợp trong cối sang bình định mức 100ml (dùng đũa thủy tinh). Rửa cối sứ, chày, đũa thủy tinh nhiều lần bằng dung dịch axit metaphotphoric 2%, nước rửa thu vào bình 100ml. Lắc đều và định mức tới vạch bằng HPO3 2%. Để yên bình 10-15 phút để tách axit ascobic và prrotein. Lọc qua giấy lọc nhanh vào bình hay cốc. Lấy 2 mẫu, mỗi mẫu 10-20ml cho vào bát sứ nhỏ.
Chuẩn độ dung dịch trong bát sứ bằng dung dịch màu xanh (2,6- điclophenolindophenol) đều xuất hiện màu hồng rõ không mất sau 1 phút.
Hỗn hợp HCl và axit HPO3 cũng có tính khử liên quan đến màu xanh, vì vậy phải làm mẫu kiểm tra. Để làm mẫu kiểm tra lấy 20ml HCl 1 % cho vào bình 100ml, thêm đến vạch bằng HPO3 lắc đều. Lấy 2 mẫu mỗi mẫu 10-20ml cho vào bát sứ chuẩn độ bằng 2,6- điclophenolindophenol đến màu hông (ghi kết quả).
Axit HCl tách từ mô thực vật axit ascobic và cũng có khả năng tách một số men. Axit HPO3 sử dụng để kết tủa protein, tăng tính bền vững của axit ascobic trong chất tách.
- Tính kết quả: - Vitamin C = d . n 100 . V . 088 , 0 . x . V 1
V: Thể tích dung dịch màu tiêu tốn trong chuẩn độ (ml) và x là độ chuẩn của nó. 0,088: là mg đương lượng của chất màu.
V1: thể tích tổng số của dung dịch tách (ml) d: thể tích phần chiết lấy để chuẩn (ml) n: khối lượng mẫu (g)
- Hóa chất:
- HCl 1%, HPO3 2% thời gian bảo quản 2-3 tuần
- Dung dịch 2,6-điclophenolindophenol 0,001N (dung dịch màu xanh): Hòa tan 60g trong bình định mức 200ml bằng nước cất ấm, thêm 4-5 giọt NaOH 0,01N, lắc đều định mức tới vạch. Dung dịch màu chuẩn bị trước khi phân tích. Bảo quả trong tủ lạnh đến 8 ngày. Độ chuẩn xác định trong ngày phân tích bằngKIO3 có nồng độ chuẩn.
- KIO3: hòa tan 0,0357 gam và định mức tới 1 lít.
- Xác định độ chuẩn của 2,6-điclophenolindophenol: Người ta biết rằng 1ml dung dịch KIO3 0,001N tương đương 0,088mg axit ascobic. Pha dung dịch ascobic có nồng độ loãng bằng cách cân 1,5mg (một vài tinh thể) axit hòa tan trong bình định mức 50 ml bằng HCl 2% định mức tới vạch. Lấy 2 mẫu mỗi mẫu 10-15ml cho vào bát sứ, một mẫu chuẩn bằng dung dịch màu xanh, còn mẫu thứ 2 bằng dung dịch KIO3 nhưng trước khi chuẩn thêm 5-10mg KI và nhỏ 5 giọt dung dịch hồ tinh bột. Độ chuẩn của chất màu xanh 2,6-điclophenolindophenol X = b N . a
X: độ chuẩn của chất màu. N: nồng độ KIO3.
a: thể tíchKIO3 (ml) tiêu tốn khi chuẩn độ. b: Thể tích chất màu xanh tiêu tốn khi chuẩn độ.