CHƯƠNG 2: PHÂN TÍCH CÂY TRỒNG
2.4.1 Xácđịnh nitơ tổng số trong thực vật (phương pháp Kenđan)
Nguyên tắc của phương pháp: Nguyên liệu thực vật được tro hóa trong bình Kenđan bằng H2SO4 đặc và có mặt chất xúc tác, kết quả nitơ chuyển toàn bộ thành (NH4)2SO4. Cất NH3 bằng phản ứng với NaOH 40% và hấp thụ nó bằng H3BO3 hay H2SO4 chuẩn.
- Trình tự phân tích:
Cân 0,2 g mẫu gói gọn trong miếng giấy lọc không tro để cho gọn vào bình Kenđan (để mẫu khỏi dính vào cổ bình). Thêm 1g hỗn hợp muối xác tác ( CuSO4, K2SO4), thêm 5ml H2SO4 đặc. Đốt mẫu (tro hóa), điều chỉnh nhiệt để cho dung dịch trong bình không trào lên cổ, thành bình. Đốt cho đến dung dịch trong bình trắng trong. Để nguội bình, thêm 100ml nước cất lắc đều. Sau khi nguội chuyển toàn bộ sang bình 500ml để cất.
Lấy 20ml dung dịch H3BO3 có hỗn hợp chỉ thị để hấp thu NH3 cho vào cốc 250ml. Đầu mút ống sinh hàn phải ngập trong dung dịch axit.
Thêm 25ml NaOH 10N (40%) vào bình Kenđan để giải phóng NH3. Cất cho đến khi thể tích trong bình Kenđan bay hơi gần 1/3 thì kết thúc. Thử phản ứng của dung dịch chảy ra bằng thuốc thử Nestle để biết quá trình cất nên kết thúc hay chưa.
Chuẩn độ: Xác định nitơ trong bình hấp thu bằng cách chuẩn độ với axit H2SO4
0,05N. Dung dịch chuyển từ màu xanh lá cây sang màu hồng tím. Tính kết quả: hàm lượng N được tính bằng % như sau:
N% = .100 n 014 , 0 . N . a
a: số ml H2SO4 có nồng độ N tiêu tốn khi chuẩn độ N nồng độ H2SO4 0,05N)
n: Khối lượng mẫu 100: tính ra %
0,014: hệ số chuyển từ mg đương lượng sang gam nitơ.
Từ hàm lượng nitơ tổng só có thể chuyển thành “protein thô” bằng cách nhân với hệ số 6,25.
- Hóa chất
H3BO3 4% có hỗn hợp chỉ thị (bromocresol xanh và metyl đỏ: 0,099g bromocresol xanh và 0,066 g metyl đỏ trong 100ml rượu etylic)
Hỗn hợp muối:100g K2SO4 + 10g CuSO4 và 1g Se. NaOH 40%
H2SO4 đặc (d=1,84)
H2SO4 hoặc HCl có nồng độ 0,05N hay 0,02N.