CHƯƠNG 2: PHÂN TÍCH CÂY TRỒNG
2.4.3 Xácđịnh tinh bột bằng thủy phân axit
- Nguyên tắc xác định tinh bột trước hết phải thủy phân (bằng axit hay bằng men) đến glucozo. Đường glucozo được xác định theo phương pháp Bectran, hay phương pháp phân cực. Phương pháp Bectran để xác định tinh bột trong lá, thân và rễ nghĩa là chất tách có màu sắc. Còn phương pháp phân cực xác định glucozo trong chất chiết không màu.
- Trình tự phân tích:
Cân 1g nguyên liệu thực vật cho vào bình khô 300ml. Thêm vào 150ml HCl 1% lắc đều, đậy bằng nút có hệ thống sinh hàn. Thủy phân trong bình cách thủy trong vòng 3 giờ. Đồng thời đăth trong bình cách thủy tam giác không có mẫu chứa 150ml axit HCl 1% để kiểm tra.
Sau 2-3 giờ thủy phân để kiểm tra lấy 1 ít dịch nghiên cứu cho lên mặt kính, nhỏ vào hồ tinh bột.
Thêm 2-3 giọt metyl đỏ vào bình kiểm tra (không có mẫu) trung hòa từ buret bằng dung dịch NaOH 205, còn bình thí nghiệm có mẫu thì cũng trung hòa với số lượng tương đương của kiềm nhưng không có chỉ thị. Lượng kiềm không được thức vì trong môi trường kiềm đường bị phân hủy.
Kết tủa protein bằng cách thêm vào bình 1ml chì acetat 10% và lắc đều. Thêm 1-2 giọt chì acetat theo thành bình nếu thấy đục thì protein kết tủa chưa hết. Thêm tiếp từng giọt chì acetat.
Sau 0,5-1 giờ để kết tủa hoàn toàn, Thêm vào bình dung dịch Na2SO4 với thể tích gấp 4 lần thể tích chì acetat (2-4ml) để loại trừ lượng chì thừa.
Để dung dịch và kết tủa qua đêm, lọc qua giấy lọc nhanh vào bình định mức 200ml, rửa bình, kết tủa trên giấy lọc 4-5 lần bằng nước định mức tới vạch, lắc đều. dung dịch để xác định mono saccarit theo Bectran.
- Tách đường hòa tan bằng nước hay bằng rượu; Khi phân tích tinh bột có đường hòa tan chữa trong mẫu. Vì vậy cần thiết xác định đường hòa tan riêng trong mẫu hay trước khi xác định tinh bột phải tách đường hòa tan bằng nước hay rượu.
Cân 5-10 gam mẫu thêm vào 100-200ml (1/20) nước nóng, đun cách thủy 800C nửa giờ để tách đường hòa tan. Để nguội và lọc.
Tách lần 2 với thời gian đun cách thủy 15 phút và lọc. Phần mẫu đã rửa sạch dùng để xác định tinh bột.
Mẫu thực vật giàu tinh bột thì tách đường hòa tan bằng rượu, vì dịch chiết tách bằng nước rất khó lọc. Tách mẫu bằng rượu nóng 90%, tách 2 lần liên tiếp (tỉ lệ mẫu:rượu=1/80. Phần dung dịch có thể dùng để xác định đường theo phương pháp Bectran. - Tính kết quả; Tinh bột% = b 0,9 10 . 2 b a − +
a: lượng tổng số glucozo, 5 sau khi thủy phân b: hàm lượng đường hòa tan, % trước thủy phân .
10 . 2 b
Hệ số hiệu chỉnh cho phân hủy fructozo 0,9: hệ số chuyển thành tinh bột
- Hóa chất: HCl 1%, Dung dịch iot, NaOH 10%, phenolphtalein, các thuốc thử dùng để xác định glucozo theo phương pháp Bectran.